非酒精性脂肪性肝炎的多基因组合检测试剂盒制造技术

本发明专利技术提供一种非酒精性脂肪性肝炎的多基因组合检测试剂盒，其特征在于，包括：基因PRAMEF10信使RNA的扩增引物，基因RPS6KA1信使RNA的扩增引物，基因UBE2T信使RNA的扩增引物，基因MCM10信使RNA的扩增引物，基因SLC12A4信使RNA的扩增引物，基因WIPI1信使RNA的扩增引物，以及基因RHBDF2信使RNA的扩增引物。本发明专利技术的试剂盒的检测结果快速准确，并且为普通肥胖人群和脂肪肝患者制定健康管理提供了帮助。

Multigene combination detection kit for nonalcoholic steatohepatitis

The present invention provides a multiple gene expression in nonalcoholic fatty liver detection kit, which is characterized in that: the primers including PRAMEF10 gene messenger RNA and primers of RPS6KA1 gene messenger RNA, gene amplification primer UBE2T messenger RNA and MCM10 messenger RNA gene amplification primers, primers of SLC12A4 gene messenger RNA primers of WIPI1 gene, RNA gene and RHBDF2 Messenger, RNA messenger primer. The detection results of the kit of the invention are fast and accurate, and provide help for the health management of the common obese people and the fatty liver patients.

【技术实现步骤摘要】
非酒精性脂肪性肝炎的多基因组合检测试剂盒
本专利技术涉及一种非酒精性脂肪性肝炎的多基因组合检测试剂盒，属于生物检测领域。
技术介绍
非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholicfattyliverdisease，NAFLD)是指除外酒精和其他明确的损肝因素所致的肝细胞内脂肪过度沉积为主要特征的临床病理综合征，与胰岛素抵抗和遗传易感性密切相关的获得性代谢应激性肝损伤。近年来，由于生活方式和饮食结构的改变，非酒精性脂肪肝病的发病率逐年增加，已成为危害人类健康的三大肝病之一。非酒精性脂肪性肝病包括单纯性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、脂肪性肝纤维化这一系列肝脏病变。疾病的进展过程中，10％-30％的非酒精性脂肪性肝炎患者在10年内可发展为肝硬化，并进一步发展为肝细胞癌。部分非酒精性脂肪性肝炎患者甚至可以不经肝硬化，直接进展为肝细胞癌。因此尽早发现非酒精性脂肪性肝炎是避免病情恶化的关键。而目前临床上发现非酒精性脂肪性肝炎十分困难。一方面，绝大多数患者无症状或仅有非特异性症状如乏力等。另一方面，传统的血清学、影像学检查的敏感性和特异性让人难以满意；而肝脏活检作为诊断非酒精性脂肪性肝炎的金标准，因有创、费用高及耐受差等原因，不被大多数患者接受。因此建立代替肝活检诊断非酒精性脂肪性肝炎的简便、准确的诊断方法在临床诊断上是一个亟待解决的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种多基因组合检测试剂盒及其应用，以实现对非酒精性脂肪性肝炎的辅助诊断。本专利技术采用了如下技术方案：本专利技术提供一种非酒精性脂肪性肝炎的多基因组合检测试剂盒，其特征在于，包括：基因PRAMEF10信使RNA的扩增引物，基因RPS6KA1信使RNA的扩增引物，基因UBE2T信使RNA的扩增引物，基因MCM10信使RNA的扩增引物，基因SLC12A4信使RNA的扩增引物，基因WIPI1信使RNA的扩增引物，以及基因RHBDF2信使RNA的扩增引物。进一步，本专利技术的非酒精性脂肪性肝炎的多基因组合检测试剂盒，还包括：TRIzol试剂，氯仿，异丙醇，75％乙醇，DEPC水，oligo(dT)18引物，逆转录酶，SYBRGreen聚合酶链式反应体系。进一步，本专利技术的非酒精性脂肪性肝炎的多基因组合检测试剂盒，其特征在于：优选的，基因PRAMEF10信使RNA的扩增引物是：正向引物：5’-TGCCTGAGCTACCTTTTTGGG-3’；反向引物：5’-TCCCGTTTTATTGAGAGAGCAC-3’；优选的，基因RPS6KA1信使RNA的扩增引物是：正向引物：5’-CAGTGGGCACCTGTATGCTAT-3’；反向引物：5’-ACGAATGGGTGATTTACATCAGC-3’；优选的，基因UBE2T信使RNA的扩增引物是：正向引物：5’-ATCCCTCAACATCGCAACTGT-3’；反向引物：5’-CAGCCTCTGGTAGATTATCAAGC-3’；优选的，基因MCM10信使RNA的扩增引物是：正向引物：5’-TGTCCCTGCGCTACCAAGA-3’；反向引物：5’-GATGAGCTTTTGGGATCTGGAG-3’；优选的，基因SLC12A4信使RNA的扩增引物是：正向引物：5’-CCTCATCGTGCTTATCTGCTG-3’；反向引物：5’-GGCTGCTGCGAATGTTGTTC-3’；优选的，多基因组合的热点基因WIPI1信使RNA的扩增引物是：正向引物：5’-ACTAAAGCCGGGTATAAGCTGT-3’；反向引物：5’-CGGGATTTCATTGCTTCCGTG-3’；优选的，基因RHBDF2信使RNA的扩增引物是：正向引物：5’-GATGGGGCAGACACGTTTGA-3’；反向引物：5’-CCTCGGAAGTAGCTGGCAG-3’。本专利技术还提供基因PRAMEF10信使RNA的扩增引物，基因RPS6KA1信使RNA的扩增引物，基因UBE2T信使RNA的扩增引物，基因MCM10信使RNA的扩增引物，基因SLC12A4信使RNA的扩增引物，基因WIPI1信使RNA的扩增引物，以及基因RHBDF2信使RNA的扩增引物，在非酒精性脂肪性肝炎的多基因组合检测试剂盒中的应用。进一步，上述的应用，还可以具有这样的特征：其中，优选的，基因PRAMEF10信使RNA的扩增引物是：正向引物：5’-TGCCTGAGCTACCTTTTTGGG-3’；反向引物：5’-TCCCGTTTTATTGAGAGAGCAC-3’；优选的，基因RPS6KA1信使RNA的扩增引物是：正向引物：5’-CAGTGGGCACCTGTATGCTAT-3’；反向引物：5’-ACGAATGGGTGATTTACATCAGC-3’；优选的，基因UBE2T信使RNA的扩增引物是：正向引物：5’-ATCCCTCAACATCGCAACTGT-3’；反向引物：5’-CAGCCTCTGGTAGATTATCAAGC-3’；优选的，基因MCM10信使RNA的扩增引物是：正向引物：5’-TGTCCCTGCGCTACCAAGA-3’；反向引物：5’-GATGAGCTTTTGGGATCTGGAG-3’；优选的，基因SLC12A4信使RNA的扩增引物是：正向引物：5’-CCTCATCGTGCTTATCTGCTG-3’；反向引物：5’-GGCTGCTGCGAATGTTGTTC-3’；优选的，多基因组合的热点基因WIPI1信使RNA的扩增引物是：正向引物：5’-ACTAAAGCCGGGTATAAGCTGT-3’；反向引物：5’-CGGGATTTCATTGCTTCCGTG-3’；优选的，基因RHBDF2信使RNA的扩增引物是：正向引物：5’-GATGGGGCAGACACGTTTGA-3’；反向引物：5’-CCTCGGAAGTAGCTGGCAG-3’。进一步，上述的应用，还可以具有这样的特征，还包括：对被测样本的检测结果进行评分的步骤。进一步，上述的应用，还可以具有这样的特征：其中，评分所用的公式为：式中，Sn为利用多基因组合检测试剂盒检测出的单个基因信使RNA的相对量；为针对于每个热点基因的校正值。进一步，上述的应用，还可以具有这样的特征：各基因评分所用的校正值如下：σMCM103.337σPRAMEF104.449σRHBDF24.884σRPS6KA16.292σSLC12A46.787σUBE2T4.076σWIPI17.770本专利技术的专利技术人在研究中发现一组热点基因在非酒精性脂肪性肝炎患者的腹部皮下脂肪组织中显著上调；相反，用RT-PCR技术在脂肪肝患者和体型肥胖但没有肝脏病变的志愿者的腹部皮下脂肪组织样本中验证得知，该组热点基因并没有明显上调。通过运用加权算法，进一步将多基因组合检测的结果进行评估打分，结果发现，评分结果可以准确地诊断非酒精性脂肪性肝炎，并且反映脂肪肝到非酒精性脂肪性肝炎的病程进展。由于非酒精性脂肪性肝炎的发生发展与脂质代谢紊乱密切相关，因而脂肪细胞中基因的变化可能对非酒精性脂肪性肝炎起到提示作用。通过分析非酒精性脂肪性肝炎患者皮下脂肪组织样品的多基因组合的信使RNA的丰度，发现由7个热点基因组成的多基因组合的丰度与非酒精性脂肪性肝炎的发病高度关联，并研制出可便于临床本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种非酒精性脂肪性肝炎的多基因组合检测试剂盒，其特征在于，包括：基因PRAMEF10信使RNA的扩增引物，基因RPS6KA1信使RNA的扩增引物，基因UBE2T信使RNA的扩增引物，基因MCM10信使RNA的扩增引物，基因SLC12A4信使RNA的扩增引物，基因WIPI1信使RNA的扩增引物，以及基因RHBDF2信使RNA的扩增引物。

【技术特征摘要】
1.一种非酒精性脂肪性肝炎的多基因组合检测试剂盒，其特征在于，包括：基因PRAMEF10信使RNA的扩增引物，基因RPS6KA1信使RNA的扩增引物，基因UBE2T信使RNA的扩增引物，基因MCM10信使RNA的扩增引物，基因SLC12A4信使RNA的扩增引物，基因WIPI1信使RNA的扩增引物，以及基因RHBDF2信使RNA的扩增引物。2.如权利要求1所述的非酒精性脂肪性肝炎的多基因组合检测试剂盒，其特征在于，还包括：TRIzol试剂，氯仿，异丙醇，75％乙醇，DEPC水，oligo(dT)18引物，逆转录酶以及SYBRGreen聚合酶链式反应体系。3.如权利要求1所述的非酒精性脂肪性肝炎的多基因组合检测试剂盒，其特征在于：优选的，基因PRAMEF10信使RNA的扩增引物是：正向引物：5’-TGCCTGAGCTACCTTTTTGGG-3’；反向引物：5’-TCCCGTTTTATTGAGAGAGCAC-3’；优选的，基因RPS6KA1信使RNA的扩增引物是：正向引物：5’-CAGTGGGCACCTGTATGCTAT-3’；反向引物：5’-ACGAATGGGTGATTTACATCAGC-3’；优选的，基因UBE2T信使RNA的扩增引物是：正向引物：5’-ATCCCTCAACATCGCAACTGT-3’；反向引物：5’-CAGCCTCTGGTAGATTATCAAGC-3’；优选的，基因MCM10信使RNA的扩增引物是：正向引物：5’-TGTCCCTGCGCTACCAAGA-3’；反向引物：5’-GATGAGCTTTTGGGATCTGGAG-3’；优选的，基因SLC12A4信使RNA的扩增引物是：正向引物：5’-CCTCATCGTGCTTATCTGCTG-3’；反向引物：5’-GGCTGCTGCGAATGTTGTTC-3’；优选的，多基因组合的热点基因WIPI1信使RNA的扩增引物是：正向引物：5’-ACTAAAGCCGGGTATAAGCTGT-3’；反向引物：5’-CGGGATTTCATTGCTTCCGTG-3’；优选的，基因RHBDF2信使RNA的扩增引物是：正向引物：5’-GATGGGGCAGACACGTTTGA-3’；反向引物：5’-CCTCGGAAGTAGCTGGCAG-3’。4.基因PRAMEF10信使RNA的扩增引物，基因RPS6KA1信使RNA的扩增引物，基因UBE2T信使RNA的...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁得天，胡江峰，刘起东，张鑫，
申请(专利权)人：昆山德诺瑞尔生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32