气相色谱‑质谱法测定葡萄酒中邻氨基苯甲酸酯类葡萄香精的方法技术

本发明专利技术公开了一种气相色谱‑质谱法测定葡萄酒中邻氨基苯甲酸酯类葡萄香精的方法。将葡萄酒样品用正己烷作为提取剂进行提取，经过特定的液‑液萃取净化处理后采用气相色谱‑质谱仪的选择离子监测模式进行测定，外标法定量。结果显示葡萄酒中3种邻氨基苯甲酸酯类葡萄香精在0.05～1.00 mg/L范围内，呈现良好的线性关系，相关系数r值均大于0.999，该方法定量限为5μg/L，样品加标平均回收率为86.2～102.4%，平均相对标准偏差为1.02～8.75%（n=6）。本发明专利技术方法简便、快速、准确、灵敏，具有良好的回收率和稳定性，适用于葡萄酒中邻氨基苯甲酸酯类葡萄香精的快速测定。

Methods anthranilic acid esters of grape flavor determination by gas chromatography mass spectrometry Wine.

Methods anthranilic acid esters of grape flavor Wine determination of the invention discloses a gas chromatography mass spectrometry in. The Wine samples with hexane as extraction agent were extracted after purification liquid liquid extraction specific after using selected ion monitoring mode of gas chromatography mass spectrometry were measured and quantified by external standard method. The results show Wine 3 kinds of anthranilic acid esters of grape flavor in 0.05 ~ 1 mg/L range showed a good linear relationship, the correlation coefficient r values are greater than 0.999, the limit of quantification was 5 g/L, the average recovery rate was 86.2 ~ 102.4%, the average relative standard deviation is 1.02 ~ 8.75% (n=6). The method is simple, rapid, accurate and sensitive, and has good recovery and stability. It is suitable for the rapid determination of amino benzoic acid grape essence in wine.

【技术实现步骤摘要】
气相色谱-质谱法测定葡萄酒中邻氨基苯甲酸酯类葡萄香精的方法
本专利技术涉及检测
，更具体地，涉及一种气相色谱-质谱法测定葡萄酒中邻氨基苯甲酸酯类葡萄香精的方法。
技术介绍
葡萄酒作为上佳饮品，受到越来越多人的喜爱，它含有大量的营养物质，对抗氧化、预防衰老、预防冠心病等有很好的作用。但葡萄酒的质量安全一直是人们关心的问题，葡萄酒市场存在以次充好甚至制假售假等非法行为。出现劣质葡萄酒的原因主要有：一、葡萄原材料的劣质；二、葡萄酒在发酵过程中为了节约成本加水稀释，使葡萄酒口味变得平淡，于是个别生产企业就向葡萄酒中添加各种添加剂，如：合成着色剂、甜味剂、葡萄香精等，弥补葡萄酒的口感和香气。国家标准《GB/T15037-2006葡萄酒》中明确规定葡萄酒中不得添加任何香精，否则被视为不合格产品。我国暂没有葡萄酒中邻氨基苯甲酸酯类葡萄香精检测的相关标准，因此，我们有必要对葡萄酒中邻氨基苯甲酸酯类葡萄香精进行研究分析。葡萄香精是一种食用香精，有2种或2种以上的香料和助剂按一定的比例制成的葡萄味的香料混合物。葡萄香精的主要成分是邻氨基苯甲酸酯类的合成，其中包括邻氨基苯甲酸甲酯、N-甲基邻氨基苯甲酸甲酯、邻氨基苯甲酸乙酯，辅以酒香、玫瑰花香、糖甜香，配以酯类果香组成。据资料报道，邻氨基苯甲酸酯类一般存在于甜橙、柠檬、葡萄等水果的芳香组分中，葡萄酒中只有美洲葡萄及其杂交品种酿制的葡萄酒才含有邻氨基苯甲酸酯类，而欧洲葡萄品种未见有关邻氨基苯甲酸酯类的报道。目前，王开宇等研究感官品评结合液相色谱法应用于葡萄酒中邻氨基苯甲酸酯类成分的检测；张燕葡萄酒中邻氨基苯甲酸酯类葡萄香精的高效液相色谱检测方法的研究。两个研究方法均采用二氯甲烷提取，液相色谱法分析。但现有的方法对一些样品背景较复杂、杂质难以去除、基质效应比较明显的样品，检测容易受到干扰，影响样品的判定，对于确证有一定的局限性。尽快研究建立简单、快捷、准确的葡萄酒中邻氨基苯甲酸酯类葡萄香精的检测方法为辨别葡萄酒的真假提供一定的科学依据，有助于有关部门对葡萄酒进行更加全面的监管，保障食品的安全性。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是针对现有葡萄酒中邻氨基苯甲酸酯类葡萄香精检测技术的不足，提供一种气相色谱-质谱法测定葡萄酒中邻氨基苯甲酸酯类葡萄香精的方法。本专利技术的专利技术目的通过以下技术方案予以实现：提供一种气相色谱-质谱法测定葡萄酒中邻氨基苯甲酸酯类葡萄香精的方法，包括以下步骤：S1.采用有机溶剂提取葡萄酒样品；S2.步骤S1提取所得提取液经液-液萃取净化处理得到待测样品液；S3.将待测样品液不分流进样，经气相色谱-质谱仪的选择离子监测模式进行测定，外标法定量；本专利技术所述邻氨基苯甲酸酯类葡萄香精包括邻氨基苯甲酸甲酯、N-甲基邻氨基苯甲酸甲酯和邻氨基苯甲酸乙酯等。优选地，步骤S1所述有机溶剂为石油醚或正己烷；进一步优选采用正己烷作为提取溶剂。进一步优选地，所述提取剂的用量按照葡萄酒样品：提取剂的体积比为1：1的比例确定。优选地，步骤S1所述提取是将葡萄酒样品加入有机溶剂进行提取，涡旋处理后再进行振摇处理。进一步优选地，所述涡旋处理的时间为2min；所述振摇处理是置入振荡器中振摇10min。步骤S2所述液-液萃取净化是采用离心管作为萃取容器；步骤S2所述液-液萃取净化的操作方法是将步骤S1所得提取液离心处理，吸取有机层于另一离心管中，若分层不明显，则加入少量氯化钠，使其下层饱和，再重复提取一次；合并上清液，经氮吹，浓缩，用乙醇溶解残渣并定容，过0.2μm微孔滤膜，取滤液供上机分析。进一步优选地，所述氮吹，浓缩是于水浴温度40℃条件下在氮吹仪上氮吹，浓缩至小于0.5mL。所述定容是用乙醇溶解残渣并定容至1.0mL。步骤S3的测定条件为：气相色谱条件：采用30m×0.25mm×0.25μm的HP-5MS色谱柱，升温程序为：初始温度70℃，以5℃/min升至160℃，再以20℃/min升至260℃，后运行280℃；进样口温度为280℃，辅助通道温度为280℃，氦气流速1mL/min，进样量1μL，进样方式：不分流进样；质谱条件为：离子源温度：230℃，四极杆温度：150℃；电离方式：EI；质谱扫描方式：选择离子监测(SIM)；定量离子、定性离子及丰度比分别为：邻氨基苯甲酸甲酯离子：119(100)：151(61)：92(59)：65(33)、N-甲基邻氨基苯甲酸甲酯离子：165(100)：105(93)：104(88)：77(64)、邻氨基苯甲酸乙酯离子：119(100)：165(52)：92(44)：120(34)。本专利技术的有益效果：在本
，由于香精本身成分的复杂性与样品整体组成的双重复杂性，对葡萄酒样品中邻氨基苯甲酸酯类葡萄香精的准确快速检测一直是本领域的技术难题，本专利技术通过对样品前处理的优化，结合对检测条件的精确确定，总结得到一种可行的适用于葡萄酒样品中邻氨基苯甲酸酯类葡萄香精的检测方法，填补了本领域空白。尤其是，本专利技术将样品用正己烷作为提取剂，经过液-液萃取净化，气相色谱-质谱仪的选择离子监测模式进行测定，外标法定量，获得了显著的检测结果：3种邻氨基苯甲酸酯类葡萄香精在0.05～1.00mg/L范围内，呈现良好的线性关系，相关系数r值均大于0.999，该方法定量限为5μg/L，样品加标平均回收率为86.2～102.4％，平均相对标准偏差为1.02～8.75％(n＝6)。本专利技术首次提出了气相色谱-质谱法应用于葡萄酒中邻氨基苯甲酸酯类葡萄香精的检测，该方法简便、快速、准确、灵敏，具有良好的回收率和稳定性，适用于葡萄酒中邻氨基苯甲酸酯类葡萄香精的快速测定。附图说明图1本专利技术两种提取溶剂回收率比较结果图。图2三种葡萄香精的标准品色谱图。图3采用本专利技术方法检出邻氨基苯甲酸甲酯葡萄香精的样品色谱图。图4空白葡萄酒样品加标色谱图。具体实施方式下面结合附图和具体实施例进一步说明本专利技术。下述实施例仅用于示例性说明，不能理解为对本专利技术的限制。除非特别说明，下述实施例中使用的试剂为常规市购或商业途径获得的试剂，除非特别说明，下述实施例中使用的方法和设备为本领域常规使用的方法和设备。本专利技术采用的主要材料与方法如下：1.仪器气相色谱-质谱联用仪(带EI源)7890A-5975C(美国安捷伦公司)、离心机TDL-5-A(上海安亭科学仪器厂)、涡旋振荡器HY-BⅡ(上海琪特分析仪器有限公司)、回旋振荡器QT-1(江苏省金坛市医疗仪器厂)。2.试剂氯化钠(分析纯)、乙醇(色谱纯)、正己烷(色谱纯)，邻氨基苯甲酸甲酯(AlfaAesar公司，纯度≥99％)、N-甲基邻氨基苯甲酸甲酯(AlfaAesar公司，纯度≥98％)，邻氨基苯甲酸乙酯(AlfaAesar公司，纯度≥99％)。3.方法3.1标准溶液的配制单标储备液配制：分别准确称取3种标准品邻氨基苯甲酸甲酯、N-甲基邻氨基苯甲酸甲酯、邻氨基苯甲酸乙酯10mg(精确至0.0001g)于3个100mL容量瓶中，用乙醇溶解并定容至刻度，配制成100mg/L的标准储备液，储存于-18℃冰箱中备用。混合标准储备液配制：各取1.0mL上述标准储备液，用乙醇定容至10mL，配制成10mg/L的混合标准储备液。混合标准工作液配制：将上述混合标准储备液用乙醇稀释本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种气相色谱‑质谱法测定葡萄酒中邻氨基苯甲酸酯类葡萄香精的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.采用有机溶剂提取葡萄酒样品；S2.步骤S1提取所得提取液经液‑液萃取净化处理得到待测样品液；S3.将待测样品液不分流进样，经气相色谱‑质谱仪的选择离子监测模式进行测定，外标法定量；其中，步骤S3的测定条件为：气相色谱条件：采用30m×0.25mm×0.25μm 的HP‑5MS色谱柱，升温程序为：初始温度70℃，以5℃/min升至160℃，再以20℃/min升至260℃，后运行280℃；进样口温度为280℃，辅助通道温度为280℃，氦气流速1mL/min，进样量1μL，进样方式：不分流进样；质谱条件为：离子源温度：230℃，四极杆温度：150℃；电离方式：EI；质谱扫描方式：选择离子监测（SIM）；定量离子、定性离子及丰度比分别为：邻氨基苯甲酸甲酯离子：119（100）：151（61）：92（59）：65（33）、N‑甲基邻氨基苯甲酸甲酯离子：165（100）：105（93）：104（88）：77（64）、邻氨基苯甲酸乙酯离子：119（100）：165（52）：92（44）：120（34）。

【技术特征摘要】
1.一种气相色谱-质谱法测定葡萄酒中邻氨基苯甲酸酯类葡萄香精的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.采用有机溶剂提取葡萄酒样品；S2.步骤S1提取所得提取液经液-液萃取净化处理得到待测样品液；S3.将待测样品液不分流进样，经气相色谱-质谱仪的选择离子监测模式进行测定，外标法定量；其中，步骤S3的测定条件为：气相色谱条件：采用30m×0.25mm×0.25μm的HP-5MS色谱柱，升温程序为：初始温度70℃，以5℃/min升至160℃，再以20℃/min升至260℃，后运行280℃；进样口温度为280℃，辅助通道温度为280℃，氦气流速1mL/min，进样量1μL，进样方式：不分流进样；质谱条件为：离子源温度：230℃，四极杆温度：150℃；电离方式：EI；质谱扫描方式：选择离子监测（SIM）；定量离子、定性离子及丰度比分别为：邻氨基苯甲酸甲酯离子：119（100）：151（61）：92（59）：65（33）、N-甲基邻氨基苯甲酸甲酯离子：165（100）：105（93）：104（88）：77（64）、邻氨基苯甲酸乙酯离子：119（100）：165（52）：92（44）：120（34）。2.根据权利要求1所述气相色谱-质谱法测定葡萄酒中邻氨基苯甲酸酯类葡萄香精的方法，其特征在于，步骤S1所述有机溶剂为石油醚或正己烷。3.根据权利要求2所述气相色谱-质谱法测定葡萄酒中邻氨基苯甲酸酯类葡萄香精的方法，其特征在于，步骤S1所述有机溶剂为正己烷。4.根据权利要求1、2或3所述气相色谱-质谱法测定葡萄酒中邻氨基苯...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈丹萍，谢应新，杨富春，曹晓燕，陈彩彦，原波，
申请(专利权)人：佛山出入境检验检疫局检验检疫综合技术中心佛山国际旅行卫生保健中心，
类型：发明
国别省市：广东,44