一种检测动物源性食品中兽药残留的方法技术

本发明专利技术公开了一种检测动物源性食品中兽药残留的方法，采用改进的QuEChERS试剂盒方法进行样品前处理，具有简单快速、高效省力、重现性好而且低试剂消耗、低劳动强度、低成本、环境友好等优点，同时配合UPLC‑MS/MS‑Qtrap检测方法可实现十四类82种兽药的同时筛查、确证分析，进而实现了多种类兽药的高通量分析检测。

【技术实现步骤摘要】
一种检测动物源性食品中兽药残留的方法
本专利技术公开涉及兽药残留检测的
，尤其涉及一种检测动物源性食品中兽药残留的方法。
技术介绍
随着生活水平的提高，动物源性食品在我国人民的饮食结构中比例越来越大，已经成为百姓餐桌上不可或缺的一部分。而人们对食品的安全意识及对食品质量的要求也越来越高。为了治疗动物的各种疾病以及作为食物添加剂饲喂动物，以促进动物的生长，兽药在动物的养殖过程中应用非常广泛。兽药的使用在一定程度上的确起到了治疗动物疾病、促进其生长的作用，但另一方面兽药的滥用导致在动物组织以及在动物产品中存在兽药残留超标，而超标的兽药残留将对消费者的身体健康产生危害，比如一些中毒反应、过敏反应、致畸反应等等，从长远看还会对养殖业的发展和市场的正常秩序产生影响。因此，采取有效的措施，对兽药残留进行积极的检测和监控，防止残留超标的动物源性食品流入市场，成为当务之急。开展兽药残留分析研究和开发相关的检测方法，是加强兽药残留监控中非常重要的一步。随着残留检测技术的不断发展，残留限量要求的不断降低，目前兽药残留样品处理和检测技术正朝着“绿色检测”的方向发展。随着食品安全问题日益被重视，食品检验机构面临大量的检测工作，而目前检测方法仍以单类兽药的检测为主，因此样品需要重复处理，分别检测，耗时费力。因此，如何研发一种可实现多类兽药同时检测，特别是样品中多种兽药的筛查、确证是许多兽药残留分析工作者亟待解决的问题。
技术实现思路
鉴于此，本专利技术公开提供了一种检测动物源性食品中兽药残留的方法，以至少解决以往的检测方法每次只能检测一种兽药，导致被检测样品需要重复处理，分别检测，耗时费力，检测效率低等问题。本专利技术提供的技术方案，具体为，一种检测动物源性食品中兽药残留的方法，该方法包括如下步骤：1)样品前处理：称取样品放置于萃取管中，并加入体积浓度为1％的甲酸乙腈水溶液涡旋振荡，加入盐包后均质提取，离心；取上清液置于净化管中进行净化、浓缩、定容后，备用；2)定性分析：运用UPLC-MS/MS-Qtrap法对经过样品前处理的待检测动物源性食品样品进行筛查，采用液相色谱-串联四极杆线性离子阱质谱仪的增强子离子扫描功能，建立MRM-IDA-EPI筛查方法，获得待检测动物源性食品样品中各目标兽药母离子的MS2谱图，用已知数据库中各兽药的标准MS2谱图与获得待检测动物源性食品样品中各目标兽药母离子的MS2谱图分别进行对比后，获得相似度值，并且匹配两者的特征碎片离子，进而判断待检测动物源性食品样品中是否含有目标兽药；3)定量分析：分别称取各兽药标准品，依据相似相溶原理选择溶剂分别配制1mg/mL的标准储备液，备用；按照步骤1)中的样品前处理方法对空白样品进行处理后，用空白样品基质溶液稀释标准储备液，制成混合标准储备溶液；将混合标准储备溶液定容后，得到空白样品基质溶液，配制浓度为0.5ng/mL～80ng/mL的系列匹配标准工作溶液；采用液相色谱-串联四极杆线性离子阱质谱仪对系列匹配标准工作溶液和经过样品前处理的待检测动物源性食品样品分别进行测定，获得以浓度为横坐标，定量离子的峰面积为纵坐标的绘制标准曲线，以此标准曲线来计算待检测动物源性食品样品中目标兽药的残留量。优选，所述兽药为阿苯哒唑、苯硫氨酯、左旋咪唑、芬苯哒唑、地昔尼尔、盐霉素、莫能菌素、氯羟吡啶、三氯苯哒唑、吡喹酮、丙氧苯咪唑、依诺沙星、洛美沙星、麻保沙星、司帕沙星、奥比沙星、氟罗沙星、吡哌酸、西诺沙星、米洛沙星、恩诺沙星、氟甲喹、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、二氟沙星、噁喹酸、沙拉沙星、达氟沙星、培氟沙星、磺胺甲噻二唑、苯酰磺胺、磺胺吡唑、磺胺索嘧啶、磺胺苯吡唑、磺胺二甲基嘧啶、磺胺异恶唑、磺胺噻唑、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺喹噁啉、磺胺嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺多辛、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺吡啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺醋酰、林可霉素、替米考星、克林霉素、罗红霉素、红霉素、泰乐菌素、螺旋霉素、交沙霉素、北里霉素、土霉素、四环素、金霉素、强力霉素、甲硝唑、地美硝唑、洛硝哒唑、氯丙嗪、甲基睾丸酮、醋酸甲孕酮、地塞米松、克伦特罗、沙丁胺醇、特布他林、莱克多巴胺、西马特罗、氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、乙烯雌酚、孔雀石绿、隐色孔雀石绿以及金刚烷胺中的一种或多种。进一步优选，所述步骤1)中样品前处理具体为：称取样品5.00g放置于盛装有硫酸铵的50mL萃取管中，并加入20mL体积浓度为1％的甲酸乙腈水溶液，于漩涡混合器上涡旋振荡3min，将盐包中的盐全部加入萃取管中，均质提取1min，以5000r/min离心5min；用针筒净化器抽取上清液于净化管中，插入堵头，涡旋混匀1min，以5000r/min离心3min，取5mL上清液，40℃条件下浓缩至干，加入1.0mL体积浓度为20％的甲醇水溶液溶解残渣，过0.2μm滤膜，备用。进一步优选，所述步骤2)中液相色谱-串联四极杆线性离子阱质谱仪的质谱条件为：离子源：电喷雾离子源；扫描模式：正/负离子扫描；采集模式：多反应监测；信息关联扫描：强度阈值100cps；增强子离子扫描：质量数采集范围m/z50～1000Da；电喷雾电压：5500V；雾化气压力：50psi；气帘气压力：30psi；辅助气压力：60psi；离子源温度：550℃；去簇电压：80V；入口电压：10V；碰撞气能量：20、35、50V；扩展碰撞能量：15V。进一步优选，所述步骤3)中液相色谱-串联四极杆线性离子阱质谱仪的色谱条件为：色谱柱：WatersBEHC18反相色谱柱；柱温：40℃；进样体积：10μL；流速：0.3mL/min；流动相：流动相A：体积浓度为0.2％的甲酸水溶液，B：体积浓度为0.2％的甲酸乙腈溶液，梯度洗脱程序：0min，95％A；1min，95％A；10min，60％A；15min，5％A；18min，5％A；18.1min，95％A；23min，95％A；所述步骤3)中液相色谱-串联四极杆线性离子阱质谱仪的质谱条件为：离子源：电喷雾离子源；扫描模式：正/负离子扫描；采集模式：多反应监测；电喷雾电压：5500V；雾化气压力：50psi；气帘气压力：30psi；辅助气压力：60psi；离子源温度：550℃；去簇电压：80V；入口电压：10V。进一步优选，所述待检测动物源性食品样品为经组织匀浆机匀浆好的猪肉、牛肉、鱼肉、鸡肉或鸡肝。本专利技术提供的检测动物源性食品中兽药残留的方法，采用改进的QuEChERS试剂盒方法进行样品前处理，具有简单快速、高效省力、重现性好而且低试剂消耗、低劳动强度、低成本、环境友好等优势，同时配合UPLC-MS/MS-Qtrap检测方法可实现十四类82种兽药的同时筛查、确证分析，进而实现了多种类兽药的高通量分析检测。本专利技术提供的检测动物源性食品中兽药残留的方法，解决了十四类82种兽药同时提取、净化的难题，简化了样品处理步骤，具有高效、快速、成本低、操作简便、环境友好等优点，净化效果好，灵敏度高，准确度和精密度均符合多残留分析方法的要求。附图说明此处的附图被并入说明书中并构成本说明书的一部分，示出了符合本专利技术的实施例，并与说明书一起用于解释本专利技术的原理。图1为本专利技术公开实施例提供的一种待检测动物源性食品中可疑峰的M本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测动物源性食品中兽药残留的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)样品前处理：称取样品放置于萃取管中，并加入体积浓度为1％的甲酸乙腈水溶液涡旋振荡，加入盐包后均质提取，离心；取上清液置于净化管中进行净化、浓缩、定容后，备用；2)定性分析：运用UPLC‑MS/MS‑Qtrap法对经过样品前处理的待检测动物源性食品样品进行筛查，采用液相色谱‑串联四极杆线性离子阱质谱仪的增强子离子扫描功能，建立MRM‑IDA‑EPI筛查方法，获得待检测动物源性食品样品中各目标兽药母离子的MS

【技术特征摘要】
1.一种检测动物源性食品中兽药残留的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)样品前处理：称取样品放置于萃取管中，并加入体积浓度为1％的甲酸乙腈水溶液涡旋振荡，加入盐包后均质提取，离心；取上清液置于净化管中进行净化、浓缩、定容后，备用；2)定性分析：运用UPLC-MS/MS-Qtrap法对经过样品前处理的待检测动物源性食品样品进行筛查，采用液相色谱-串联四极杆线性离子阱质谱仪的增强子离子扫描功能，建立MRM-IDA-EPI筛查方法，获得待检测动物源性食品样品中各目标兽药母离子的MS2谱图，用已知数据库中各兽药的标准MS2谱图与获得待检测动物源性食品样品中各目标兽药母离子的MS2谱图分别进行对比后，获得相似度值，并且匹配两者的特征碎片离子，进而判断待检测动物源性食品样品中是否含有目标兽药；3)定量分析：分别称取各兽药标准品，依据相似相溶原理选择溶剂分别配制1mg/mL的标准储备液，备用；按照步骤1)中的样品前处理方法对空白样品进行处理后，用空白样品基质溶液稀释标准储备液，制成混合标准储备溶液；将混合标准储备溶液定容后，得到空白样品基质溶液，配制浓度为0.5ng/mL～80ng/mL的系列匹配标准工作溶液；采用液相色谱-串联四极杆线性离子阱质谱仪对系列匹配标准工作溶液和经过样品前处理的待检测动物源性食品样品分别进行测定，获得以浓度为横坐标，定量离子的峰面积为纵坐标的绘制标准曲线，以此标准曲线来计算待检测动物源性食品样品中目标兽药的残留量。2.根据权利要求1所述检测动物源性食品中兽药残留的方法，其特征在于，所述兽药为阿苯哒唑、苯硫氨酯、左旋咪唑、芬苯哒唑、地昔尼尔、盐霉素、莫能菌素、氯羟吡啶、三氯苯哒唑、吡喹酮、丙氧苯咪唑、依诺沙星、洛美沙星、麻保沙星、司帕沙星、奥比沙星、氟罗沙星、吡哌酸、西诺沙星、米洛沙星、恩诺沙星、氟甲喹、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、二氟沙星、噁喹酸、沙拉沙星、达氟沙星、培氟沙星、磺胺甲噻二唑、苯酰磺胺、磺胺吡唑、磺胺索嘧啶、磺胺苯吡唑、磺胺二甲基嘧啶、磺胺异恶唑、磺胺噻唑、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺喹噁啉、磺胺嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺多辛、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺吡啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺醋酰、林可霉素、替米考星、克林霉素、罗红霉素、红霉素、泰乐菌素、螺旋霉素、交沙霉素、北里霉素、土霉素、四环素、金霉素、强力霉素、甲硝唑、地美硝唑、洛硝哒唑、氯丙嗪、甲基睾丸酮、醋酸甲孕酮、地塞米松、克伦特罗、沙丁...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵颖，刘瑜，吴渺渺，李晓东，姜玲玲，徐宜宏，金雁，张彤，
申请(专利权)人：沈阳出入境检验检疫局检验检疫综合技术中心，
类型：发明
国别省市：辽宁,21