一种贻贝多肽提取物及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种利用纳米酶技术制备贻贝多肽的方法以及由该方法制备的具有调节血脂作用的贻贝多肽提取物和贻贝多肽单体PEPTIDE‑S，其氨基酸序列为：Gly‑Ile‑Ala‑Val‑Pro‑Val‑Trp。

【技术实现步骤摘要】
一种贻贝多肽提取物及其制备方法
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种贻贝多肽提取物及其制备方法。
技术介绍
血脂是血浆中中性脂肪和类脂的总称，血脂中的主要成分是甘油三酯TG和胆固醇TC，当血脂浓度超过正常高限值(TG1.81mM，TC5.95mM)时称为高血脂症。高血脂症可诱发许多心脑血管疾病和代谢疾病，比如高血压、动脉粥样硬化症和糖尿病等。防治高血脂症对于预防其并发症特别是心脑血管疾病具有重要的意义。目前预防高血脂的方法之一是限制高热量食物、动物油脂及肝脏等高胆固醇食物的摄取。这种方法会造成体内蛋白质和脂类的获取不足造成身体虚弱者体质下降，损害身体健康；第二种方法是药物治疗，通过抑制低密度脂蛋白(LDL)和极低密度脂蛋白(VLDL)合成和加强其清除，抑制胆固醇的吸收与合成达到降脂目的。药物治疗会产生很多毒副作用，而且中止服药后血脂会迅速回升。因此，如何研制开发出安全无毒、无副作用，且降脂功效显著而用后又不反弹的纯天然降脂产品，成为目前业界开发的热点。贻贝俗称海虹，一种海洋软体动物。贻贝的营养价值很高，并有一定的药用价值。贻贝肉的蛋白质含量约为60％，并且富含人体必需的氨基酸(达到49％)，其含量远超其他肉类产品。此外还含有维生素、微量元素和对人体有益的不饱和脂肪酸如DHA、BPA等等。鲜活贻贝是大众化的海鲜品，营养价值很高，但是由于收获后不易保存，历来将其煮熟后加工成干品—淡菜，这就大大降低其营养价值，造成了极大的浪费，也限制了我国贻贝行业的发展。目前已经有贻贝深加工的工艺，比如中国专利技术专利“贻贝活性多肽的制备方法(授权号CN10175598B)”等等。但是这些专利技术均采用普通的酶解方法，酶的利用率低，并且获取的贻贝多肽均无调节人体血脂的功能。如何提高酶的利用效率，降低工业生产成本，改进生产工艺，并获取一种具有调节血脂活性的海洋贻贝肽，促进贻贝的开发利用是目前业界研究急需解决的一个现实问题。
技术实现思路
针对现有技术存在的问题，本专利技术提供一种利用纳米酶技术制备贻贝多肽的方法以及由该方法制备的具有调节血脂作用的贻贝多肽提取物和贻贝多肽单体。本专利技术第一方面提供一种贻贝多肽提取物的制备方法，该方法采用固定化纳米酶对贻贝冻干粉进行酶解制备得到贻贝多肽提取物。根据本专利技术第一方面任一项所述的制备方法，其中贻贝冻干粉为新鲜贻贝肉经搅碎、冷冻干燥、脱脂处理后得到的贻贝粉。其中，所述贻贝冻干粉粒径没有特殊要求，优选10-200μm，更优选50-150μm，最优选80-100μm。所述脱脂处理可采用本领域已知的各种方法，优选用超临界萃取装置对贻贝粉进行脱脂处理，超临界萃取压力优选为30-50MPa，更优选35-40MPa，最优选约35MPa；超临界萃取温度优选为30-50℃，更优选35-45℃，最优选约35℃；超临界萃取时间优选为100-300min，更优选150-250min，最优选约200min。根据本专利技术第一方面任一项所述的制备方法，其中所使用的固定化纳米酶为风味蛋白酶。各种粒径的固定化纳米酶均可用于本专利技术，优选所述固定化纳米酶的粒径为100-1000nm，优选200-800nm。本专利技术所使用的固定化纳米酶可以商购获得，优选符合FAO/WHO/JECFA/FCC推荐的食品级酶制剂标准的风味蛋白酶。根据本专利技术第一方面任一项所述的制备方法，其中固定化纳米酶的加入量为贻贝冻干粉的0.005-5％，优选0.01-1％，更优选0.05-0.5％，最优选约0.1％(所述百分比为质量百分比)。酶解时间2-6h，优选3-5h，最优选约4h。酶解温度为40-68℃，优选50-65℃，更优选55-62℃，最优选约60℃。酶解反应体系的pH值为7.5-10，更优选8.5-9.5，最优选为9。可以使用本领域通常使用的各种pH调节剂调节酶解反应体系的pH值，优选用NaOH水溶液和HCl水溶液调节反应体系的pH值，更优选用0.5-2mol/L的NaOH水溶液和0.5-2mol/L的HCl水溶液调节反应体系的pH值，最优选用约1mol/L的NaOH水溶液和约1mol/L的HCl水溶液调节反应体系的pH值。根据本专利技术第一方面任一项所述的制备方法，还包括对酶解产物进行纯化的步骤，具体为对酶解产物去除色素，所述去除色素的方法采用本领域已知的各种方法，优选采用活性炭吸附法，具体为：将酶解液离心，取上清，加入活性炭，磁力搅拌吸附色素，然后离心去除沉淀。其中活性炭的加入量为贻贝冻干粉的0.1-10％，优选0.5-5％，更优选1-3％，最优选约2％(所述百分比为质量百分比)；活性炭吸附色素的温度为20-65℃，更优选30-50℃，最优选约42℃。优选50-200rpm磁力搅拌10-120min吸附色素，更优选80-160rpm磁力搅拌20-60min吸附色素，最优选120rpm磁力搅拌约30min吸附色素。优选用管式离心机离心0.5-2h，更优选0.8-1.5h，最优选约1h得精制酶解液。优选所述管式离心机的离心因数为6000-15000，更优选8000-12000，最优选约10000。本专利技术第二方面提供由上述制备方法制备得到的贻贝多肽提取物。该提取物含有70-80％的多肽、10-18％的人体必需氨基酸、3.5-6％的粘多糖，另外还含有钙，铁，锌，锰，磷等微量元素和维生素等其他营养成分。提取物中的多肽成分以2-10肽(其分子量主要在0.2～1.5kDa之间)为主，占总肽含量约80％。本专利技术第三方面提供一种活性多肽PEPTIDE-S，所述多肽的氨基酸序列为如SEQIDNO：1所示，具体为：Gly-Ile-Ala-Val-Val-Pro-Trp，其分子量为740.89Da。所述活性多肽PEPTIDE-S可以由上述贻贝多肽提取物精制纯化得到：将贻贝多肽提取物用1000Da超滤滤膜截取分子量小于等于1000Da的组份；然后采用葡聚糖凝胶柱色谱分离，收集在560nm处吸光度值最高的组份；最后用C18柱色谱分离，得到活性多肽PEPTIDE-S。所述活性多肽PEPTIDE-S除可以通过本专利技术提供的上述方法制备得到外，还可以通过本领域已知的其他方法制备得到，例如固相合成的方法、生物工程的方法等等。本专利技术第四方面提供所述贻贝多肽提取物或活性多肽PEPTIDE-S在制备治疗和/或预防与高脂血症相关疾病的药物或保健品中的应用。所述与高脂血症相关的疾病包括但不限于高血压、动脉粥样硬化症、糖尿病、脑血管病、胰腺炎、结石症、脂肪肝等。本专利技术第五方面提供一种药物组合物，其包含活性成分贻贝多肽提取物和/或活性多肽PEPTIDE-S以及药学上可接受的辅料。本专利技术的药物组合物可以制成本领域常规剂型，包括但不限于适于口服的散剂、片剂(包括各种包衣片剂、缓释或控释片剂)、锭剂、胶囊剂(包括软胶囊和硬胶囊)、颗粒剂、丸剂、可分散粉末、水性或油性混悬剂、水性或油性溶液剂、乳剂、酏剂、糖浆剂等等，适于局部使用的霜剂、软膏剂、凝胶、水性或油性溶液剂、水性或油性混悬剂等等；适于吸入使用的粉末或液体气雾剂；适于经胃肠外给药的静脉内、皮下或肌内注射用无菌水性或油性的注射剂或冻干粉针剂、栓剂等等。所述药学上可接受的辅料包括但不限于赋形剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂、水溶性聚合物、无机盐、溶剂、溶解助剂、悬本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种活性多肽PEPTIDE‑S，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列为如SEQ ID NO：1所示。

【技术特征摘要】
1.一种活性多肽PEPTIDE-S，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列为如SEQIDNO：1所示。2.如权利要求1所述的活性多肽PEPTIDE-S在制备治疗和/或预防与高脂血症相关疾病的药物或保健品中的应用。3.一种贻贝多肽提取物的制备方法，其特征在于，该方法采用固定化纳米酶对贻贝冻干粉进行酶解制备得到贻贝多肽提取物。4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述贻贝冻干粉为新鲜贻贝肉经搅碎、冷冻干燥、脱脂处理后得到的贻贝粉。5.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述固定化纳米酶的加入量为贻贝冻干粉的0.01-1％；酶解时间为2-6h；酶解温度为40-68℃；酶解...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵树民，石松传，鲍勇刚，闫云霞，
申请(专利权)人：北京博肽聚康生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11