一种联合使用DNA水凝胶和DNAzyme检测SNP的方法技术
A combined method of using DNA hydrogel and DNAzyme to detect SNP
The invention belongs to the field of medical diagnosis technology, and relates to a detection method of single nucleotide polymorphisms (SNP) of nucleic acids, which is used for individualized medical treatment and auxiliary diagnosis of diseases. The invention uses the difference between the double chain spin temperature (DNA) between the single nucleotide mismatch DNA and the completely complementary DNA when the double chain DNA of the detected DNA and the probe DNA is formed, and identifies SNP by the peroxidase activity of DNAzyme and the chromogenic dye. The method of the invention has the advantages of high sensitivity and low detection limit.
【技术实现步骤摘要】
一种联合使用DNA水凝胶和DNAzyme检测SNP的方法
：本专利技术属于医用诊断
，涉及一种核酸的单核苷酸多态性(SNP)的检测方法，用于个体化医疗和疾病辅助诊断。
技术介绍
：单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphisms，SNPs)，即染色体基因组中单个核苷酸的突变而引起的DNA序列的多态性，根据研究发现一些致病型SNPs与很多遗传性疾病有着密切的联系，例如镰刀型细胞贫血症、乳糖不耐症、阿尔兹海默症、二型糖尿病等，因此，实现SNPs的快速灵敏的检测具有很重要的意义。有代表性的传统的SNPs检测手段是聚合酶链反应(PCR)，通常在分子生物学实验室中需要借助一个热循环仪进行检测，因此具有高成本、耗时长、选择性低、受限于耐热酶和实验室设备等缺点，这使得对开发其他方便快速检测方法的迫切需要。新型的检测SNPs方法一般分为均相法和表面固定化探针两类，均相的检测方法传感器和靶标都在相同的溶液中并且在没有分离步骤的情况下产生信号，因此操作简便而受到追捧。然而，因为没有分离的过程使得灵敏度受到背景信号的干扰，容易产生假阳性结果。而固定化探针...
【技术保护点】
一种联合使用DNA水凝胶和DNAzyme检测SNP的方法。
【技术特征摘要】
1.一种联合使用DNA水凝胶和DNAzyme检测SNP的方法。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的DNA水凝胶是以甲叉双丙烯酰胺为交联剂，丙烯酰胺与甲基丙烯酰胺修饰探针DNA的共聚物为骨架的高分子水凝胶。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的DNAzyme为具有过氧化酶活性的DNA。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，制备并使用水凝胶中固定的支链DNA作为探针来检测被检测DNA中的SNP位点，包括如下步骤：(1)制备DNA水凝胶：以甲叉双丙烯酰胺为交联剂，丙烯酰胺与甲基丙烯酰胺修饰探针DNA的共聚物为骨架的高分子水凝胶；(2)靶标DNA的杂交：将(1)中制备的DNA水凝胶分别加入到含有完全互补DNA的缓冲液和含有单碱基变异的被检测靶标DNA缓冲液中，在5-70℃下孵育2-60min，进行分子杂交；其特征在于分子杂交后形成的双链DNA中含有SNP位点；(3)肉眼可视化显色反应：在步骤(2)中已形成不同双链数目的水凝胶中均加入DNAzymeD11溶液，将反应体系置于恒温器中，在5-70℃下反应2-90min，随后用缓冲液共洗脱1-5次，之后在室温下分别加染料、H2O2溶液，室温下反应2–300min后观察并记录胶块颜色变化。5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的DNAzymeD11的序列中含有DNAzyme序列和与被检测DNA互补的序列。6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，制备内部含有支链DNA的水凝胶用于被检测DNA的固定，利用DNAzyme的连接臂来鉴别被检测靶标DNA中的SNP位点，包括如下步骤：(1)制备DNA水凝胶：是以甲叉双丙烯酰胺为交联剂，...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘明哲，马琪，刘俊，刘禹杉，
申请(专利权)人：沈阳药科大学，
类型：发明
国别省市：辽宁,21
- 暂无相关专利
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