一种纤维素酶的制备方法技术

一种纤维素酶的制备方法，包括选用里氏木霉制备所述的低温中性纤维素酶，添加了种子液的扩大生产，a.培养至发酵液OD600到达0.8‑1.0；b.流加培养，优选的，流加培养时发酵液的OD600为0.8‑1.0；或取出部分发酵种子液，以获得枯草芽孢杆菌B3发酵种子液，向保留的种子液中补加无菌发酵培养基，并继续发酵培养至发酵液OD600到达0.8‑1.0，c.枯草芽孢杆菌B3发酵种子液。提高生产效率和设备利用率；减少设备投入及能耗、降低生产成本；提高了发酵种子液中成活性。

A preparation method of Cellulase

Preparation method of cellulase, including low temperature selection of neutral cellulase from Trichoderma reesei the preparation, adding seed liquid culture to expand production, a. OD600 of fermentation liquid reached 0.8 1; plus training, B. flow optimization, fed batch culture fermentation broth at OD600 0.8 for 1 or removed; in order to obtain seed liquid fermentation, Bacillus subtilis B3 fermentation liquid seed, to retain the seed liquid adding sterile fermentation medium, the fermentation broth and continue to arrive at OD600 0.8 1 C., Bacillus subtilis B3 fermentation liquid seed. Improve production efficiency and equipment utilization, reduce equipment input and energy consumption, reduce production costs, improve the activity of fermented seed liquid.

【技术实现步骤摘要】
一种纤维素酶的制备方法
本专利技术涉及生物发酵
，具体涉及一种纤维素酶的制备方法。
技术介绍
纤维素酶(cellulase)是一种重要的酶产品，主要由外切β-葡聚糖酶、内切β-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶等组成，能降解纤维素β-1，4糖苷键生成纤维二糖和葡萄糖等小分子物质的一组酶的总称，是一种复合的诱导酶，包括多种水解酶。纤维素酶的工业化应用主要集中在生物能源，酿造工业，洗涤工业，造纸工业及纺织工业等行业中。在生物能源方面，纤维素酶将纤维素物质彻底的分解，其水解产物变成单糖，再将其进一步发酵，便可产生生物柴油；在酿造工业中，可用于啤酒的生产，增加发酵糖的产量，也可用于酱油的酿造，增加酱油的产量以及改善其质量；在洗涤工业中，纤维素酶加到洗涤剂中，能将水合纤维素分子彻底破坏，彻底清除封闭在纤维内部的污渍，提升洗涤效果；在造纸工业中，纤维素酶能使纤维表面改性，减少机械打浆的能耗；在纺织工业中，用于棉麻的后整理，纤维素酶能降低反应温度，使反应条件温和，织物整理平滑触感好。现有技术中发酵种子液的扩大生产很难，发酵菌株在培养过程中，容易发生退化，不能连续进行发酵培养获得发酵种子液，目前生产中还本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种纤维素酶的制备方法，包括选用里氏木霉制备所述的低温中性纤维素酶，所述制备方法包括以下步骤：(1)将里氏木霉菌株接种到斜面活化培养基上，活化菌种；培养活化后的菌种，挑取单菌落制备孢子悬浮液，并用紫外照射孢子悬浮液，诱变得到孢子菌落；(2)将(1)中的孢子菌落涂布于初筛培养基中，在10～15℃下培养3～5天，挑选初筛菌株并纯化该菌株；(3)在10～15℃下，将(2)中的纯化菌株按5％的接种量接种于发酵培养基中，逐级扩大培养制备种子液，培养时间为48～72小时；(4)将(3)中的种子液按发酵液体积3～5％的接种量接种于产酶培养基中，10～15℃培养96～144小时，即里氏木霉发酵生产低温中性纤维...

【技术特征摘要】
1.一种纤维素酶的制备方法，包括选用里氏木霉制备所述的低温中性纤维素酶，所述制备方法包括以下步骤：(1)将里氏木霉菌株接种到斜面活化培养基上，活化菌种；培养活化后的菌种，挑取单菌落制备孢子悬浮液，并用紫外照射孢子悬浮液，诱变得到孢子菌落；(2)将(1)中的孢子菌落涂布于初筛培养基中，在10～15℃下培养3～5天，挑选初筛菌株并纯化该菌株；(3)在10～15℃下，将(2)中的纯化菌株按5％的接种量接种于发酵培养基中，逐级扩大培养制备种子液，培养时间为48～72小时；(4)将(3)中的种子液按发酵液体积3～5％的接种量接种于产酶培养基中，10～15℃培养96～144小时，即里氏木霉发酵生产低温中性纤维素酶结束；将发酵液在4000～6000rpm离心，收集所得液体为粗酶液；(5)将(4)得到的粗酶液进行超浓缩过滤，得到1000～2000UI/G的浓缩酶液；其特征在于：步骤(4)中的扩大种子液的制备步骤为：a.培养至发酵液OD600到达0.8-1.0；b.流加培养，优选的，流加培养时发酵液的OD600为0.8-1.0；或取出部分发酵种子液，以获得枯草芽孢杆菌B3发酵种子液，向保留的种子液中补加无菌发酵培养基，并继续发酵培养至发酵液OD600到达0.8-1.0，c.枯草芽孢杆菌B3发酵种子液。2.根据权利要求1所述的纤维素酶的制备方法，其特征在于：所述初筛培养基选用60.0～80.0g马铃薯，0.5gK2HPO4，2.0～2.4g明胶，20.0～25.0g琼脂和1.0L蒸馏水制备，并将制备好的所述初筛培养基在温度为115℃～121℃的高压蒸汽下灭菌30分钟。3.根据权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：张泽书，
申请(专利权)人：湖北省新兴地生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42