The invention discloses a trivalent Subunit Influenza Vaccine and a preparation method thereof, which is characterized in that the influenza vaccine using cracking agent and new purification methods will further purified virus protein after cleavage, made of tetravalent Subunit Influenza Vaccine, in which each agent containing a type 1 (H1N1), a type 3 (H3N2), a total of three HA content influenza B in 80%, without the adjuvant, without thimerosal as preservative. The invention also provides a preparation method of the flu vaccine, which comprises the following steps: virus inoculation, virus proliferation, allantoic fluid, clarification, ultrafiltration, inactivation, purification of lysis and ultracentrifugation, gel filtration chromatography (UF), mixing, filtration, packaging, packaging. The Subunit Influenza Vaccine provided by the invention can improve the safety of influenza vaccine, eliminate the adverse reactions caused by adjuvants, and eliminate the toxic and side effects caused by thiorhal.
【技术实现步骤摘要】
一种三价流感病毒亚单位疫苗及其制备方法
本专利技术属于生物
,具体涉及一种新的流感病毒亚单位疫苗的制备方法。
技术介绍
流感是由流感病毒引起的,可造成大规模流行的人、禽畜共患的急性呼吸道传播疾病。流行性感冒病毒分甲、乙、丙三型。其中,甲型致病力最强,可感染动物和人类并引起流行甚至是世界范围内的大流行;乙型致病力稍弱,可引起局部流行。流感病毒经常发生抗原漂移和抗原转移,逃避机体免疫系统的防御,这也是造成大流行的原因。流感病毒具有高度传染性,通过飞沫经空气传播。经短暂潜伏期后,急起高热寒战,1~2日内体温可高达40℃,伴随全身乏力、头痛、肌痛、咽痛等症状,可引发肺炎、支气管炎、心肌炎、心包炎等并发症,造成老年人、体弱者等高危人群的大量死亡,给社会带来巨大的损失。最大规模的流感大流行发生于1918~1919年,造成2100~4000万人死亡(其中美国就有50万人,仅1918年10月就有19.6万人死亡),超过第一次世界大战的战争死亡人数。因此,流感的预防一直受到世界各国的高度重视。临床上对流感仍缺乏有效的治疗药物,接种流感疫苗是唯一有效预防手段。市场上现有疫苗为流感全病毒灭活疫苗和流感病毒裂解疫苗,传统裂解疫苗纯化方法为:澄清灭活的单价收获液经超滤浓缩、蔗糖密度区带离心法纯化、超滤除去蔗糖、裂解、再次蔗糖密度区带离心法纯化,再次超滤除去蔗糖,除菌过滤,加入硫柳汞作为防腐剂。工艺复杂,步骤繁琐,消耗大量的人力物力,增加微生物污染风险。同时传统流感疫苗纯度不够且含有对人体有害的佐剂及防腐剂。佐剂虽然可以改善疫苗的免疫应答,但代价是反应原性增加,甚至很严重。例如 ...
【技术保护点】
一种三价流感病毒亚单位疫苗及其制备方法,其特征在于所述三价流感病毒亚单位疫苗每剂含甲1型(H1N1)、甲3型(H3N2)、乙型共三种流感血凝素含量在80%以上,所述三价流感病毒亚单位疫苗制备方法制备时,采用一步法同时进行裂解和分离亚单位组分血凝素,裂解剂为新型裂解剂壬苯醇醚‑9,将鸡胚尿囊收获液中流感病毒裂解后的蛋白进一步纯化,制成流感病毒亚单位疫苗。
【技术特征摘要】
1.一种三价流感病毒亚单位疫苗及其制备方法,其特征在于所述三价流感病毒亚单位疫苗每剂含甲1型(H1N1)、甲3型(H3N2)、乙型共三种流感血凝素含量在80%以上,所述三价流感病毒亚单位疫苗制备方法制备时,采用一步法同时进行裂解和分离亚单位组分血凝素,裂解剂为新型裂解剂壬苯醇醚-9,将鸡胚尿囊收获液中流感病毒裂解后的蛋白进一步纯化,制成流感病毒亚单位疫苗。2.一种三价流感病毒亚单位疫苗及其制备方法,其特征在于所述一种三价流感病毒亚单位疫苗制备方法依次包括以下步骤:病毒接种:将甲1(H1N1)、甲3(H3N2)和乙(B)型流感病毒工作种子分别接种于9~11日龄健康鸡胚尿囊腔中;病毒增殖培养:将接种后的鸡胚转入33~35℃孵箱培养48~72小时,增殖流感病毒;尿囊液收获:筛选活鸡胚,放置2~8℃冷胚10~24小时后收获尿囊液;澄清:用离心法或者过滤法除去鸡胚血红细胞等大部分杂质;超滤浓缩:将充分灭活后的流感病毒尿囊收获液,用截留分子量300~1000kD的超滤膜进行超滤浓缩;灭活:单价病毒收获液中加入终浓度不高于200μg/ml的甲醛,于2~8℃灭活40~120小时裂解和超速离心纯化:将超滤浓缩液加入裂解剂,混匀上样,经蔗糖密度区带离心纯化,根据一定的蔗糖浓度收获裂解液;凝胶过滤层析纯化或超滤:将上一步蔗糖密度梯度离心得到的溶液经凝胶过滤层析系统进一步纯化或者超滤得到流感病毒亚单位疫苗单价原液;混配:将甲1(H1N1)、甲3(H3N2)和乙(B)型流感病毒单价原液按照血凝素浓度1:1:1的关系进行混配,各型病毒血凝素浓度控制在40~48μg/ml之间;过滤除菌:将上一步混配后的病毒液经0.22μm滤膜过滤除菌后即得到流感病毒亚...
【专利技术属性】
技术研发人员:高辉,
申请(专利权)人:中逸安科生物技术股份有限公司,
类型:发明
国别省市:天津,12
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