抗FGFR2-IIIc单克隆抗体、杂交瘤细胞株和应用制造技术

本发明专利技术提供了FGFR2‑IIIc异构体的单克隆抗体，对SEQ ID NO:4所示的FGFR2IIIc异构体能特异性结合，可由保藏号为CGMCC No.6905的杂交瘤细胞株产生。还提供了相关的杂交瘤细胞株以及抗体的应用技术，用以检测生物标志物，特别是肿瘤细胞特异性表达的FGFR2‑IIIc受体蛋白。本发明专利技术的单克隆抗体能特异性检测FGFR2IIIc异构体，可以作为特异性检测癌细胞，或扩散性癌症的检测试剂。此抗体能特异性结合FGFR2IIIc异构体转化的癌症细胞，可以用于进行癌症治疗的研究，开发靶向治疗药物。

Anti FGFR2-IIIc monoclonal antibody, hybridoma cell line and its application

The present invention provides monoclonal antibody FGFR2 IIIc isomers, with specific physical FGFR2IIIc heterogeneous shown on SEQ ID NO:4, the preservation number of hybridoma cell strain CGMCC No.6905 production. Also provides application of hybridoma cell lines and antibodies, used to detect biomarkers, especially tumor cell specific expression of the IIIc receptor protein FGFR2. The monoclonal antibody of the present invention can detect the FGFR2IIIc isomer specifically, and can be used as a detection reagent for detecting cancer cells and diffusing cancer specifically. This antibody can be specifically combined with cancer cells transformed by FGFR2IIIc isomers, and can be used for cancer treatment and targeted drugs.

【技术实现步骤摘要】
抗FGFR2-IIIc单克隆抗体、杂交瘤细胞株和应用
本专利技术涉及基因工程和免疫学
，更具体地，涉及单克隆抗体
，特别是指一种抗FGFR2-IIIc单克隆抗体、相关杂交瘤细胞株和应用。
技术介绍
成纤维细胞生长因子受体2(FibroblastGrowthFactorReceptors2，FGFRs)是一类跨膜的酪氨酸激酶受体，由胞外区、跨膜区和胞浆区三部分组成。FGFR2介导成纤维细胞生长因子家族(FibroblastGrowthFactors，FGFs)信号传递入胞内。FGFs信号通路对多种细胞的增殖、分化以及凋亡具有强烈调节作用。前列腺癌、乳腺癌、肺癌、肝癌、胃癌、黑色素瘤等多种肿瘤细胞均可表达FGF。FGFR2基因由于编码胞外第三个Ig样环(loop-III)的内含子-外显子区域的选择性剪接产生FGFR2-IIIb(SEQIDNO.5)和FGFR2-IIIc(SEQIDNO.4)两种蛋白异构体，因此loop-III决定了这两种蛋白异构体的配体结合特异性。前列腺癌(ProstatecancerCaP)是男性生殖系统常见的一种恶性肿瘤，在40岁之后其发病率随着年龄增长而增加。因此随着人类平均寿命的延长、诊断技术的不断提高，前列腺癌的发病率也在不断上升。前列腺癌从雄性激素敏感到雄性激素不敏感肿瘤的演变过程在大鼠模型中伴随着FGFR2可变剪接体的改变。这个改变导致FGFR2-IIIb异构体的丢失，而存在大量的FGFR2-IIIc异构体。FGFR2-IIIc异构体在前列腺癌中表达的临床相关性已经在几个研究中揭示。Leung(LeungHY,MehtaP,GrayLB,CollinsAT,RobsonCNandNealDE.1997.Oncogene15(9):1115-20.Keratinocytegrowthfactorexpressioninhormoneinsensitiveprostatecancer.)等报道65％的CaP都有FGFR2-IIIc的表达，但是在良性前列腺增生(BPH)中并未检测到其表达。相反，IIIb在大多数良性肿瘤(76％)包括BPH中都有表达。Kwabi-Addo(Kwabi-AddoB,OzenMandIttmannM2004.Endocrine-RelatedCancer11709-724.Theroleoffibroblastfactorsandtheirreceptorsinprostatecancer.)等通过免疫组化采用一种多克隆抗体检测到了FGFR2-IIIc在前列腺癌组织间质细胞中的表达。Sahadevan(SahadevanK,DarbyS,LeungHY,MathersME,RobsonCNandGnanapragasamVJ.2007.JPathol.213(1):82-90.Selectiveover-expressionoffibroblastgrowthfactorreceptors1and4inclinicalprostatecancer.)等通过激光捕获显微切割138列恶性CaP的组织微阵列前列腺上皮细胞。这些分析表明在在恶化的上皮细胞中主要表达的异构体由FGFR2-IIIb向FGFR2-IIIc转变。这些新的临床数据与先前的研究结果是一致的，FGFR2异构体由IIIb向IIIc转变是前列腺癌演变的一个标志。FGFR2异构体由IIIb向IIIc转变所伴随着的表型改变定义为上皮间质转化(EMT)。EMT提高了细胞的迁移和侵入，方便了多个癌瘤类型的转移。以FGFR2-IIIc异构体作为治疗靶标阻断肿瘤的演变，该研究通过在小鼠膀胱癌模型中对FGFR2-IIIc基因进行基因沉默和基因敲除。利用反义RNA下调IIIc的表达使小鼠存活率从0％上升到50％(持续50天)，并且下调了肿瘤向肺和骨的转移。先前的研究表明FGFR2-IIIc在上皮癌中表达，FGFR2-IIIc在前列腺癌的EMT中起着决定和驱动的作用(ChafferCL,BrennanJP,SlavinJL,BlickT,ThompsonEWWilliamsED.2006.CancerRes.66:11271-11279Mesenchymal-to-EpithelialTransitionFacilitatesBladderCancerMetastasis:RoleofFibroblastGrowthFactorReceptor-2.)。肿瘤细胞通过血液或淋巴转移为“循环肿瘤细胞(CTC)”，CTC在患有良性疾病的病人中较为罕见而在多种转移癌症中频繁出现(Allardetal.(2004)ClinCancerRes.10:6897-6904)。一些临床研究表明CTC能够辅助医生检测和预知癌症进程，评估转移性癌症的治疗效果(Berrepootetal.,(2004)AnnOncol.15:139-145；Aquinoetal.,(2002)J.Chemother.14:412-416；Katohetal.,(2004)AnticancerRes.24:1421-1425)。目前的CTC检测主要基于上皮肿瘤标记，例如Ep-CAM，这将会遗漏FGFR2-IIIc阳性的CTC，因为前列腺癌细胞中FGFR2-IIIc的表达伴随着上皮肿瘤标记的减少并获得间质肿瘤标志(MoffaandEthier(2007)JCellPhysiol.210(3):720-31)。因此，需要提供一种抗FGFR2-IIIc异构体特异性单克隆抗体及分泌抗FGFR2-IIIc单克隆抗体的杂交瘤细胞，该杂交瘤细胞能稳定分泌抗FGFR2-IIIc异构体，尤其是特异性的针对FGFR2-IIIc蛋白中loop-III区域的单克隆抗体，能够特异性的用于治疗前列腺癌相关的转移癌的CTC检测，并为进一步研究FGFR2-IIIc的功能，用于其他癌症治疗癌症检测和的研究奠定基础。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种抗FGFR2-IIIc单克隆抗体、杂交瘤细胞株和应用。本专利技术的第一方面，提供了一种抗FGFR2-IIIc单克隆抗体，所述抗FGFR2-IIIc单克隆抗体特异性识别和结合SEQIDNO:4所示的蛋白。在另一优选例中，所述抗FGFR2-IIIc单克隆抗体与参照抗体竞争性结合SEQIDNO:4所示的蛋白；所述参照抗体为保藏号为CGMCCNo.6905杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体。在另一优选例中，所述抗FGFR2-IIIc单克隆抗体不与SEQIDNO:5所示的蛋白结合。在另一优选例中，所述抗FGFR2-IIIc单克隆抗体具有选自下组的一种或多种特性：(1)所述抗FGFR2-IIIc单克隆抗体的重链可变区的三个CDR区与所述参照抗体的重链可变区的三个CDR区相同；(2)所述抗FGFR2-IIIc单克隆抗体的轻链可变区的三个CDR区与所述参照抗体的轻链可变区的三个CDR区相同；(3)所述抗FGFR2-IIIc单克隆抗体的重链可变区与所述参照抗体的重链可变区相同；和(4)所述抗FGFR2-IIIc单克隆抗体的轻链可变区与所述参照抗体的轻链可变区相同。在另一优选例中，所述抗FGFR2-IIIc单克隆抗体为保藏号为CGMC本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗FGFR2‑IIIc单克隆抗体，其特征是，所述抗FGFR2‑IIIc单克隆抗体特异性识别和结合SEQ ID NO:4所示的蛋白，并且所述抗FGFR2‑IIIc单克隆抗体不与SEQ ID NO:5所示的蛋白结合。

【技术特征摘要】
1.一种抗FGFR2-IIIc单克隆抗体，其特征是，所述抗FGFR2-IIIc单克隆抗体特异性识别和结合SEQIDNO:4所示的蛋白，并且所述抗FGFR2-IIIc单克隆抗体不与SEQIDNO:5所示的蛋白结合。2.如权利要求1所述的抗FGFR2-IIIc单克隆抗体，其特征在于，所述抗FGFR2-IIIc单克隆抗体与保藏号为CGMCCNo.6905杂交瘤细胞株产生的参照抗体相比，具有选自下组的一种或多种特性：(1)所述抗FGFR2-IIIc单克隆抗体的重链可变区的三个CDR区与所述参照抗体的重链可变区的三个CDR区相同；(2)所述抗FGFR2-IIIc单克隆抗体的轻链可变区的三个CDR区与所述参照抗体的轻链可变区的三个CDR区相同；(3)所述抗FGFR2-IIIc单克隆抗体的重链可变区与所述参照抗体的重链可变区相同；和(4)所述抗FGFR2-IIIc单克隆抗体的轻链可变区与所述参照抗体的轻链可变区相同。3.如权利要求1所述的抗FGFR2-IIIc单克隆抗体，其特征在于，所述抗FGFR2-IIIc单克隆抗体为保藏号为CGMCCNo.6905杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体。4.一种杂交瘤细胞株，保藏编号：CGMCCNo.6905；所述杂交瘤细胞株能够产生抗FGFR2-IIIc单克隆抗体，该抗FGFR2-IIIc单克隆抗体是对SEQIDNO:4所示的蛋白能特异性结合的单克隆抗体。5.一种重组蛋白，其特征在于，所述的重组蛋白具有：(i)如权利要求1所述的单克隆抗体；以及(ii)任选的协助表达和/或纯化的标签序列。6.一种免疫偶联物，其特征在于，该免疫偶联物含有：(a)如权利要求1所述的单克隆抗体；和(b)选自下组的偶联部分：可检测标记物、药物、毒素、细胞因子、放射性核素、或酶。7.一种药物组合物，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：常小迦，施丽君，
申请(专利权)人：艾托金生物医药苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32