同时检测多种食源性致病菌的试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种同时检测多种食源性致病菌的试剂盒及其应用，属于食源性致病菌检测技术领域。本发明专利技术由固定有19种致病菌特异性探针的食源性致病菌并行检测基因芯片、特异性引物和通用引物组成。本发明专利技术可以一次反应同时对结肠弯曲菌、空肠弯曲菌、阪崎肠杆菌等19种食品典型致病菌进行快速、灵敏的检测。提供传统方法无法提供的多重扩增、多重检测相结合的检测数据，该检测方法从样品处理到检测结果仅需1‑2小时左右，准确率为100%，操作步骤简单，检测时间短，特异性强，灵敏度高，重复性好；可对引起食源性疾病的19种病原体进行准确的分型检测，用作食源性致病菌的快速筛查。

【技术实现步骤摘要】
同时检测多种食源性致病菌的试剂盒及其应用
本专利技术涉及食源性病菌检测
，特别涉及一种同时检测多种食源性致病菌的试剂盒及其应用。
技术介绍
由食源性致病菌引起的食源性疾病已成为当今世界上最关注的公共卫生问题之一。WHO将大肠杆菌O157、沙门氏菌、志贺氏菌及单核细胞增生李斯特菌依次列为四种重要的食源性致病菌，并且列为中国进出口产品的必检项目。在我国，沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌为食物中最常见病原菌。据我国2013年卫生部的全国食物中毒事件情况通报显示，微生物性食物中毒人数最多，占食物中毒事件总中毒人数的60.4％，主要是由沙门氏菌、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、志贺氏菌等引起的细菌性食物中毒。这些致病菌的存在严重威胁着人类健康，快速检测食品中的致病菌是保障食品质量安全，预防食源性疾病暴发的有效手段。目前对于食源性病原菌的检测大多仍沿用细菌培养及生化鉴定方法，检验步骤繁琐复杂，检测周期较长，而且无法对难以培养的病原菌进行检测；而一些简单的分子生物学和免疫学方法存在着假阳性率较高以及一次只能检测一种或几种致病菌等缺点和不足，不能满足食品安全快速检测需求，也不本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种同时检测多种食源性致病菌的试剂盒，其特征在于：由固定有19种致病菌特异性探针的食源性致病菌并行检测基因芯片、特异性引物和通用引物组成；其中所述19种致病菌为结肠弯曲菌、空肠弯曲菌、阪崎肠杆菌、大肠杆菌O157、肠集聚性大肠杆菌、肠出血性大肠杆菌、肠致病性大肠杆菌、肠产毒性大肠杆菌、产志贺毒素大肠杆菌、出血性大肠杆菌、单核增生性李斯特菌、沙门氏菌、志贺菌、金黄色葡萄球菌、霍乱弧菌CTX型、霍乱弧菌OMPW型、副溶血弧菌、小肠结肠炎耶尔森菌‑yst型、小肠结肠炎耶尔森菌‑ail型；所述特异性引物为能对所述19种致病菌靶基因进行特异性扩增的引物；所述通用引物为与所述19种致病菌靶基因无关的核酸序...

【技术特征摘要】
1.一种同时检测多种食源性致病菌的试剂盒，其特征在于：由固定有19种致病菌特异性探针的食源性致病菌并行检测基因芯片、特异性引物和通用引物组成；其中所述19种致病菌为结肠弯曲菌、空肠弯曲菌、阪崎肠杆菌、大肠杆菌O157、肠集聚性大肠杆菌、肠出血性大肠杆菌、肠致病性大肠杆菌、肠产毒性大肠杆菌、产志贺毒素大肠杆菌、出血性大肠杆菌、单核增生性李斯特菌、沙门氏菌、志贺菌、金黄色葡萄球菌、霍乱弧菌CTX型、霍乱弧菌OMPW型、副溶血弧菌、小肠结肠炎耶尔森菌-yst型、小肠结肠炎耶尔森菌-ail型；所述特异性引物为能对所述19种致病菌靶基因进行特异性扩增的引物；所述通用引物为与所述19种致病菌靶基因无关的核酸序列；其中所述通用引物中的反向通用引物5’端带有荧光标记。2.如权利要求1所述同时检测多种食源性致病菌的试剂盒，其特征在于，所述食源性致病菌并行检测基因芯片中19种致病菌特异性探针为：结肠弯曲菌：5’—ACCTTTGACGGCATTATCTC—3’；空肠弯曲菌：5’—ATCCATCTTCTATCATTGCC—3’；阪崎肠杆菌：5’—AACTGGGACCAACCCAGTTT—3’；大肠杆菌O157：5’—ACGGGTCAACGTTAGAACAT—3’；肠集聚性大肠杆菌：5’—ATTCCGTATATTATCATCAG—3’；肠出血性大肠杆菌：5’—AACTGCTCTGGATGCATCTC—3’；肠致病性大肠杆菌：5’—CACCATTGCAGATTCAATCA—3’；肠产毒性大肠杆菌：5’—CAATACATATAATATAGAGG—3’；产志贺毒素大肠杆菌：5’—ATGCATCTCTGGTCATTGTA—3’；出血性大肠杆菌：5’—CACCTTCACCTGTAGTAATA—3’；单核增生性李斯特菌：5’—TTCAAGCTATTATTTACAGC—3’；沙门氏菌：5’—CGATCAAATATCTGCGGCGT—3’；志贺菌：5’—ACGGAATCCGGAGGTATTGC—3’；金黄色葡萄球菌：5’—TAACCGTATCACCATCAACT—3’；霍乱弧菌CTX型：5’—ACCTGGTACTTCTACTTGAA—3’；霍乱弧菌OMPW型：5’—TGCATTATTAGTACCCGTAC—3’；副溶血弧菌：5’—TTGTAACCTTGCGCTTTGTA—3’；小肠结肠炎耶尔森菌-yst型：5’—TTGAAGCCGTCTCTTGGCCT—3’；小肠结肠炎耶尔森菌-ail：5’—CCTGATGAGTATAAGCAAAC—3’。3.如权利要求1或2所述同时检测多种食源性致病菌的试剂盒，其特征在于，所述特异性引物的序列如下：结肠弯曲菌：5’—CCACCTGTAATCACTCCTAATACC5’—GCCCACATTGTTAAAGATGCTC空肠弯曲菌：5’—TGCTGAAGAGGGTTTGGGTG5’—AGAAGCCATCATCGCACCT阪崎肠杆菌：5’—CCGCACCGAAAGATAACAC5’—CCAGCCAGTCGTAGCCCATT大肠杆菌O157：5’—AGCCGACCTTGAAATACCACCC5’—CCTTCGTGCTCCTCCGTTACTC肠集聚性大肠杆菌：5’—TCCATTTATCGCAATCAGAT5’—AGAATCGTCAGCATCAGC肠出血性大肠杆菌：5’—ATCTGGCGTTAATGGAGT5’—TCATCGTATAAACAGGAGC肠致病性大肠杆菌：5’—AATCATGAATAAGAAATACG5’—ACCATTAATTGCAGACGTTGC肠产毒性大肠杆菌：5’—...

【专利技术属性】
技术研发人员：李艳艳，靖相密，邱盟轩，张通，尚小云，
申请(专利权)人：山东艾克韦生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37