表没食子儿茶素没食子酸酯制备靶向药物的应用制造技术

本发明专利技术提供一种表没食子儿茶素没食子酸酯在制备靶向抑制雌激素受体ER‑α36药物中的应用。本发明专利技术经生物学实验验证，表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)可显著抑制ER‑α36高表达肿瘤细胞的增殖，引起细胞周期G1期阻滞，抑制细胞迁移、侵袭能力，诱导凋亡发生。靶点作用明确，尤其对ER‑α36的异常表达的肿瘤细胞的抑制效果明显。可以作为一种ER‑α36特异性靶向抑制剂对由于ER‑α36异常表达细胞发挥抑制作用。本发明专利技术为临床靶向ER‑α36异常的个性化治疗的开展提供了一种新的有效药物。

The application of epigallocatechin gallate to the preparation of targeted drugs

The present invention provides a kind of EGCG in the preparation of targeted inhibition of estrogen receptor alpha 36 ER drug application. The present invention by biological experiments, epigallocatechin gallate (EGCG) ER can significantly inhibit the proliferation of tumor cells alpha 36 expression, cause G1 cell cycle arrest, inhibit cell migration, invasion, apoptosis induction. Target clear, especially the inhibitory effect of abnormal expression of ER alpha 36 tumor cells significantly. Can be used as a ER alpha 36 specific targeting inhibitors of ER alpha 36 due to abnormal expression of cell inhibition. Provides a new and effective drug for clinical individualized treatment of the present invention targeting ER alpha 36 anomalies of the.

【技术实现步骤摘要】
表没食子儿茶素没食子酸酯制备靶向药物的应用
本专利技术属于生物医药领域，涉及表没食子儿茶素没食子酸酯(EpigallocatechinGallate,EGCG)在制备靶向抑制雌激素受体ER-α36药物中的应用。
技术介绍
雌激素受体是一种重要的受体蛋白，在很多种不同类型的细胞中均有表达并发挥相应的作用。在经典雌激素调节模式中，雌激素通过与雌激素受体(estrogenreceptor,ER)结合，改变受体构象作为转录因子转至胞核中，直接调控靶基因表达，这种机制被称作核启动的雌激素信号传导(即基因组调节)。雌激素还可以与质膜定位的雌激素受体结合，通过蛋白磷酸化激活下游信号通路的级联反应从而间接调控某些基因的表达，这种机制被称作膜启动的雌激素信号传导(即非基因组调节)。与雌激素受体基因组调控相比，非基因组调节能调控更多基因，参与细胞增殖、存活、凋亡及分化。雌激素受体有ER-α和ER-β两种类型，ER-α又有ER-α66、ER-α46和ER-α36三种亚型。ER-α66和ER-β具有类似的蛋白质结构，都是由3个独立但相互作用的功能结构域组成：A/B区为转录激活结构域(包括AF-1和AF-2)，C区为DNA结合域，D/E/F区为配体结合结构域，主要分布于细胞核和胞浆，介导核启动的雌激素信号传导途径。ER-α36是2005年克隆并发现的分子量为36kD的一种雌激素受体-α亚型。与ER-α66相比，ER-α36缺少2个转录激活域(AF-1和AF-2)，但仍保留DNA结合域和部分二聚体化以及配体结合结构域，主要定位于细胞膜(50％)与胞浆(40％)。ER-α36配体范围更为广泛，可被E2α、E2β、E3、E4活化，通过膜雌激素受体介导快速非基因组信号转导通路，激活下游MEK1/2和ERK1/2信号通路，产生各种生物学效应，与细胞的分化、增殖有密切关系。ER-α36在恶性肿瘤等多种病理状态下的表达均有明显的异常升高的现象。胃印戒细胞癌肿瘤组织中的表达明显高于正常组织。在三阴性乳腺癌中，高表达的ER-α36可不被抗雌激素药物三苯氧胺抑制，从而使肿瘤耐药。ER-α36在肺腺癌、肾细胞癌中也呈高表达，与晚期局部淋巴结转移相关，与总生存期和无病生存期呈负相关。正常肝脏组织中，ER-α36表达阴性，但在肝癌组织中，ER-α36却呈现异常高表达，这可能与肝癌的发生及进展相关。在喉癌细胞系及病人标本中也发现ER-α36表达与淋巴结转移相关。雌激素作用于ER-α36后血管新生及转移因子表达均发生上调，喉癌细胞耐药能力增强。综上所述，针对各类ER-α36相关的细胞异常增殖疾病进行靶向治疗，具有重要的临床意义。EGCG是从绿茶中提取的一种水溶性成份，是儿茶素中含量最高的组分，有研究显示其具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗血管增生、抗炎等多方面作用，但确切的作用机制尚不完全清楚。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种表没食子儿茶素没食子酸酯在制备靶向抑制雌激素受体ER-α36药物中的应用。本专利技术提供的是一种新的靶向抑制雌激素受体ER-α36的抗肿瘤药物，可以特异性地与雌激素受体ER-α36结合并抑制其活性，研究表明，表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)通过氢键与ER-α36的Lys79、Arg87、Lys130、Asn131连接，实现抗肿瘤目的。EGCG结构式如下：表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)可通过特异性地靶向结合ER-α36，进而抑制其活性，从而显著抑制ER-α36高表达胃印戒细胞癌细胞的增殖，引起细胞周期G1期阻滞，抑制细胞迁移、侵袭能力，诱导凋亡发生。本专利技术提供的表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG还可抑制ER-α36高表达乳腺癌细胞。表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)与ER-α36作用参见图1。本专利技术同现有技术相比具有以下优点及效果：目前针对由于ER-α36的异常表达引起的疾病的治疗药物较为缺乏，而表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG作为一种多功能的天然提取的化合物，其发挥作用的靶点分子并不明确。因此，本专利技术通过相关研究来寻找ER-α36特异性靶向抑制剂，明确了表没食子儿茶素没食子酸酯(EpigallocatechinGallate,EGCG)可以通过特异性靶向结合并抑制雌激素受体ER-α36的功能，作用靶点明确，尤其对ER-α36的异常表达的肿瘤细胞的抑制效果明显：表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG通过特异性靶向雌激素受体ER-α36后，可明显抑制ER-α36高表达的肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭能力，诱导细胞凋亡发生。可以作为一种ER-α36特异性靶向抑制剂对由于ER-α36异常表达细胞发挥抑制作用。本专利技术为临床靶向ER-α36异常的个性化治疗的开展提供了一种新的有效药物。附图说明图1为通过分子对接软件MOE预测出靶向ER-α36的药物表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG，通过氢键与ER-α36的Lys79,Arg87,Lys130,Asn131连接的示意图。图2为表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG可显著抑制ER-α36高表达胃印戒细胞癌细胞增殖。图3为表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG可显著抑制ER-α36高表达乳腺癌细胞增殖。图4为划痕实验证明表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG可显著抑制ER-α36高表达胃印戒细胞癌细胞GCSR-1-6迁移能力。图5为穿膜实验证明表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG可显著抑制ER-α36高表达胃印戒细胞癌细胞GCSR-1-6迁移能力。图6为表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG可显著抑制ER-α36高表达胃印戒细胞癌细胞GCSR-1-6侵袭能力。图7A和图7B为表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG作用于ER-α36高表达胃印戒细胞癌细胞GCSR-1-6后细胞周期发生G1期阻滞。图8为表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG作用于ER-α36高表达胃印戒细胞癌细胞GCSR-1-6后增殖相关蛋白表达发生改变。图9为表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG抑制ER-α36高表达胃印戒细胞癌细胞GCSR-1-6下游PI3K/Akt,MAPK/ERK信号通路。图10为表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG作用于ER-α36高表达胃印戒细胞癌细胞GCSR-1-6后，活性氧簇(ReactiveOxygenSpecies,ROS)增加。图11为表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG作用于ER-α36高表达胃印戒细胞癌细胞GCSR-1-6后细胞凋亡流式检测图。图12为表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG作用于ER-α36高表达胃印戒细胞癌细胞GCSR-1-6后细胞凋亡结果柱状分析图。图13表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG作用于ER-α36高表达胃印戒细胞癌细胞GCSR-1-6后，凋亡相关蛋白表达发生改变。具体实施方式本专利技术结合附图和具体实施例作进一步说明。这些实施例仅用于说明，但不限制本专利技术。实施例1：MPD3药用植物数据库中ER-α36靶向药物筛选MPD3药用植物数据库中包含2295种植物化学物，通过蛋白-配体对接预测软件MOEv2014.0901，在2.4GHz操作系统，8GBRAM(x86)操作平台条件下，根据分子对接S评分，筛选可能靶向ER-α36的植物化学物质。根据筛选结果，我们选取排名前6药物进行后续分析，均为类黄酮类物质，见表1所示。表1：MOE蛋白-配体本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种表没食子儿茶素没食子酸酯在制备靶向抑制雌激素受体ER‑α36药物中的应用，所述表没食子儿茶素没食子酸酯的结构式为：

【技术特征摘要】
1.一种表没食子儿茶素没食子酸酯在制备靶向抑制雌激素受体ER-α36药物中的应用，所述表没食子儿茶素没食子酸酯的结构式为：2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述表没食子儿茶素没食子酸酯通...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹江，穆罕默德·赛义夫·拉赫曼，穆罕默德·萧艾布，谢雨琼，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33