一种检测沙门氏菌磁共振成像试剂盒的制备方法技术

一种检测沙门氏菌磁共振成像试剂盒的制备方法，属于免疫学检测领域。本发明专利技术将沙门氏菌检测抗体修饰磁纳米粒子，利用沙门氏菌检测抗体和捕获抗体对沙门氏菌的识别形成双抗体夹心结构，磁纳米粒子随着检测抗体与沙门氏菌的识别保留在酶标板中，并且磁纳米粒子的保留量随着沙门氏菌含量的增加而增加，T2弛豫时间相应变长，成像颜色变深，根据成像颜色的深浅可以实现沙门氏菌的定性检测，根据T2弛豫时间可以实现沙门氏菌的定量检测。本发明专利技术方法以磁共振成像代替底物显色作为酶联免疫方法的检测信号，大幅提高了检测灵敏度，简化了酶联免疫方法的试剂种类，检测结果可以用肉眼进行观察，为沙门氏菌实际样本的高灵敏检测提供了一种重要的检测手段。

A method for the preparation of the magnetic resonance imaging kit for Salmonella

A preparation method for detecting Salmonella magnetic resonance imaging kit belongs to the field of immunology detection. The detection of Salmonella antibody modified magnetic nanoparticles, identification of Salmonella using Salmonella antibody detection and capture antibody forming double antibody sandwich structure, magnetic nanoparticles with antibody detection and identification of Salmonella retained in microtiter plates, and retention of magnetic nano particles with increasing content of Salmonella with the increase of the T2 relaxation time of the corresponding variable length imaging, color depth, according to the imaging depth of color can achieve the qualitative detection of Salmonella, according to the T2 relaxation time can achieve quantitative detection of salmonella. Signal detection method of the invention adopts magnetic resonance imaging instead of chromogenic substrate as ELISA method, greatly improve the detection sensitivity, simplify the reagent type ELISA method, the test results can be observed with the naked eye, provides an important means for the detection of Salmonella sample high sensitive detection.

【技术实现步骤摘要】
一种检测沙门氏菌磁共振成像试剂盒的制备方法
本专利技术属于免疫学检测领域，具体涉及一种检测沙门氏菌磁共振成像试剂盒的制备方法。
技术介绍
沙门氏菌是细胞内寄生的一种革兰氏阴性肠道菌，也是一种常见的人畜共患病原菌。该菌广泛存在于自然界中，极易污染食品、水源及畜产品，不但能引发家畜家禽等动物发生急性、慢性或隐性感染，还能导致人体感染产生沙门氏菌病，对人类造成很大的威胁。自1885年Salmon和Smith分离到猪霍乱沙门氏菌以来，对沙门氏菌病的研究已有百余年。沙门氏菌不但能引起沙门氏菌病，而且与人类多种疾病密切相关。在我国沙门氏菌感染率很高，在细菌性食物中毒中70~80%是由沙门氏菌引起的，因此沙门氏菌的检测一直是沙门氏菌研究的核心问题。检测沙门氏菌的传统方法是将食物样品分步增菌法，这种方法需要预增菌、选择性增菌和分离三个不同的阶段，检测周期长，并且检测灵敏度低。通过聚合酶链式反应（PCR）进行体外DNA扩增的分子生物学方法是一种快速、高灵敏、简便、高特异性的检测方法，然而用PCR检测沙门氏菌的特异性较差，在扩增沙门氏菌DNA的同时许多其他的肠道杆菌能同时被扩增出来，因此特异性引物的设计本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测沙门氏菌磁共振成像试剂盒的制备方法，其特征在于包括如下步骤：（1）沙门氏菌检测抗体修饰磁纳米粒子将沙门氏菌检测抗体修饰生物素分子，磁纳米粒子修饰链霉亲和素，通过生物素和链霉亲和素的亲和识别与结合将沙门氏菌检测抗体修饰到磁纳米粒子上；（2）沙门氏菌磁共振成像试剂盒的制备将沙门氏菌捕获抗体包被酶标板，加入沙门氏菌被酶标板上的捕获抗体捕获，再加入检测抗体修饰的磁纳米粒子形成捕获抗体—沙门氏菌—检测抗体—磁纳米粒子的复合物，通过磁共振成像进行检测。

【技术特征摘要】
1.一种检测沙门氏菌磁共振成像试剂盒的制备方法，其特征在于包括如下步骤：（1）沙门氏菌检测抗体修饰磁纳米粒子将沙门氏菌检测抗体修饰生物素分子，磁纳米粒子修饰链霉亲和素，通过生物素和链霉亲和素的亲和识别与结合将沙门氏菌检测抗体修饰到磁纳米粒子上；（2）沙门氏菌磁共振成像试剂盒的制备将沙门氏菌捕获抗体包被酶标板，加入沙门氏菌被酶标板上的捕获抗体捕获，再加入检测抗体修饰的磁纳米粒子形成捕获抗体—沙门氏菌—检测抗体—磁纳米粒子的复合物，通过磁共振成像进行检测。2.根据权利要求1所述的一种检测沙门氏菌磁共振成像试剂盒的制备方法，其特征在于沙门氏菌检测抗体修饰磁纳米粒子的步骤为：（1）沙门氏菌检测抗体修饰生物素将沙门氏菌检测抗体用pH8.60.05M的醋酸盐缓冲液透析3次，然后再用pH8.60.05M的醋酸盐缓冲液将抗体稀释到1mg/mL，取1mL抗体在其中加入150μL浓度为1mg/mL的生物素-N-琥珀酰亚胺基酯，在37℃条件下振荡反应3h，然后加入20μL1M的NH4Cl溶液，置于室温条件下放置20min使得反应终止，再将抗体用pH7.40.01M的PBS缓冲液透析3次，以除去多余的生物素分子；（2）磁纳米粒子修饰链霉亲和素将1mg/mL的15nm羧基基团修饰的磁纳米粒子用pH6.5的MES缓冲液稀释20倍，取5mL磁纳米粒子溶液，加入35mgN-羟基琥珀酰亚胺和55mg碳二亚胺，在缓慢振荡的条件下进行羧基活化，活化1~4h后，外加磁场吸附磁纳米粒子，并去除上清用等体积的pH7.40.01M的PBS缓冲液将磁纳米粒子进行重悬，然后加入1mg链霉亲和素溶液，在室温条件下继续振荡反应2~4h，最后外加磁场吸附磁纳米粒子，除去上清再用等体积的PBS磁纳米粒子进行重悬；（3）沙门氏菌检测抗体修饰的磁纳米粒子将步骤（1）和...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨蕾，
申请(专利权)人：杨蕾，
类型：发明
国别省市：浙江,33