用于肺炎致病菌耐药基因快速检测的试剂盒制造技术

本申请涉及用于肺炎致病菌耐药基因快速检测的试剂盒，其包括能检测24个肺炎致病菌主要耐药基因的基因芯片和用于多重不对称PCR反应的反应体系。24个耐药基因来自氨基糖苷类、喹诺酮类、超广谱β内酰胺酶类(ESBLs)、头孢菌素类(AmpC)、碳青霉烯类、耐万古霉素、耐甲氧西林和导致膜通透性改变的耐药基因。该试剂盒可直接检测临床标本中肺炎致病菌的耐药基因，操作简单快捷，无需培养和药敏试验，在很大程度上为抗生素的合理使用争取了宝贵的时间，值得临床推广应用。

【技术实现步骤摘要】
用于肺炎致病菌耐药基因快速检测的试剂盒
本专利技术涉及基因芯片技术，尤其涉及用于肺炎致病菌耐药基因快速检测的试剂盒。
技术介绍
近年来，由于空气污染的加剧及公共卫生事件的发生，呼吸道疾病引起越来越多的关注。肺炎是指包括终末气道，肺泡和肺间质等在内的肺实质性炎症，是全球感染性疾病死亡的首要原因[1]。据世界卫生组织(WHO)统计，每年约有350万人死于下呼吸道感染，居所有死亡原因的第三位[2]。在美国,肺炎和流行性感冒位于所有死因的第九位，2010年和2011均有5万多人死于肺炎[3-5]，而且该统计没有将肺炎导致的败血症以及死于肺炎并发症的癌症、帕金森等病例纳入肺炎组，所以实际因肺炎死亡的人数比这个数还要高[2]。在我国，每年至少有250万人罹患肺炎，农村多于城市，其中5岁以下儿童肺炎死亡率为184/10万—1223万/10万[6]，老年肺炎病死率没有确切的数据，但据黄华瑞报道[7]老年肺炎明显高于其他年龄段。可见，肺炎严重威胁着人类的生命健康。肺炎的致病原有很多，包括细菌、病毒、真菌、寄生虫等，其中最重要最常见的是细菌。众所周知，肺炎按照发病环境可分为社区获得性肺炎(CAP)和医院本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于肺炎致病菌耐药基因快速检测的试剂盒，其包括基因芯片和用于多重不对称PCR反应的反应体系；所述基因芯片包括对应于肺炎致病菌耐药基因的探针；其中，所述肺炎致病菌耐药基因至少包括金属β内酰胺类耐药基因，所述金属β内酰胺类耐药基因包括NDM1、IMP、VIM中的至少一种；其中，对应于NDM1的探针的序列为：ATGGAAACTGGCGACCAACGGTTTGGCGATCTTTTTTTTTTTT；对应于IMP的探针的序列为：AGATAACGTAGTGGTTTGGTTTTTTTTTTTT；对应于VIM的探针的序列为：TCTAGAAGGACTCTCATCGATTTTTTTTTTTT；所述肺炎致病菌耐药...

【技术特征摘要】
2017.09.08 CN 20171080336661.一种用于肺炎致病菌耐药基因快速检测的试剂盒，其包括基因芯片和用于多重不对称PCR反应的反应体系；所述基因芯片包括对应于肺炎致病菌耐药基因的探针；其中，所述肺炎致病菌耐药基因至少包括金属β内酰胺类耐药基因，所述金属β内酰胺类耐药基因包括NDM1、IMP、VIM中的至少一种；其中，对应于NDM1的探针的序列为：ATGGAAACTGGCGACCAACGGTTTGGCGATCTTTTTTTTTTTT；对应于IMP的探针的序列为：AGATAACGTAGTGGTTTGGTTTTTTTTTTTT；对应于VIM的探针的序列为：TCTAGAAGGACTCTCATCGATTTTTTTTTTTT；所述肺炎致病菌耐药基因还包括碳青霉烯类耐药基因，所述碳青霉烯类耐药基因包括OXA2、OXA10、OXA23、OXA48、KPC中的至少一种；其中，对应于OXA2的探针的序列为：TTGCAGGCCACAATCAAGACCAAGATTTTTTTTTTTTT；对应于OXA10的探针的序列为：TCAAATGGGACGGAAAGCCAAGAGCCATGAATTTTTTTTTTTT；对应于OXA23的探针的序列为：GAGAGTAATGGCTACAAAATTTTTTTTTTTTTTT；对应于OXA48的探针的序列为：AGTTTCTGGCTCGACGGTGGTATTCTTTTTTTTTTTT；对应于KPC的探针的序列为：TGACGGCCTTCATGCGCTCTATCGGCGATACTTTTTTTTTTTT；所述肺炎致病菌耐药基因还包括氨基糖苷类耐药基因，所述氨基糖苷类耐药基因包括aac(3)-II、aac(6')-I、ant(2")-I、ant(3")-I中的至少一种；其中，对应于aac(3)-II的探针的序列为：GTGGGTTCGGCCTGCTGAATCAATTTCTGGTTTTTTTTTTTT；对应于aac(6')-I的探针的序列为：AGGTCACCAAGATCCAAACGGACTTTTTTTTTTTT；对应于ant(2")-I的探针的序列为：CACGCAAGCACGATGATATTGATCTGACGTTTTTTTTTTTT；对应于ant(3")-I的探针的序列为：TCTCCGCGCTGTAGAAGTCACCATTGTTTTTTTTTTTTTT；所述肺炎致病菌耐药基因还包括喹诺酮类耐药基因，喹诺酮类耐药基因包括qnrA、qnrB、qnrS中的至少一种；其中，对应于qnrA的探针的序列为：ATGTACTTCTGCTCGGCTTATATCTCAGGTTTTTTTTTTTTT；对应于qnrB的探针的序列为：GTAGCGCATATATCACGAATACCAATCTAAGCTACGCCTTTTTTTTTTTT；对应于qnrS的探针的序列为：TCGCTGGATAGGAACGAACCTAGCTTTTTTTTTTTT；所述肺炎致病菌耐药基因还包括ESBLs类耐药基因，所述ESBLs类耐药基因包括CTX-M-14、CTX-M-15、SHV、TEM中的至少一种；其中，对应于CTX-M-14的探针的序列为：CAGCCTGTCGAGATCAAGCCTGTTTTTTTTTTTT；对应于CTX-M-15的探针的序列为：AGACTGGGTGTGGCATTGATTATTTTTTTTTTTT；对应于SHV的探针的序列为：CTCCAGCTGTTCGTCACCGGCATTTTTTTTTTTT；对应于TEM的探针的序列为：GTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACTTTTTTTTTTTT；所述肺炎致病菌耐药基因还包括头孢菌素类耐药基因，所述头孢菌素类耐药基因为DHA；其中，对应于DHA的探针的序列为：GCTTGATGCGGAATCTTACGGTTTTTTTTTTTT；所述肺炎致病菌耐药基因还包括耐万古霉素类耐药基因，所述耐万古霉素类耐药基因包括vanA、vanB中的至少一种；其中，对应于vanA的探针的序列为：CCGCATTGTACTGAACGAAGTCTTTTTTTTTTTT；对应于vanB的探针的序列为：GCTTACCTACCCTGTCTTTGTGATTTTTTTTTTTT；所述肺炎致病菌耐药基因还包括耐甲氧西林类耐药基因，所述耐甲氧西林类耐药基因为mecA；其中，对应于mecA的探针的序列为：GTAAGCACACCTTCATATGACGTCTATCCTTTTTTTTTTTT；所述肺炎致病菌耐药基因还包括膜孔蛋白类耐药基因，所述膜孔蛋白类耐药基因为oprD2；其中对应于oprD2的探针的序列为：TGTTCCCGCAGACCGCGATTTTTTTTTTTT；其中，所述用于多重不对称PCR反应的反应体系包括：对应于NDM1的正向引物序列NDM1-F为：GCATTAGCCGCTGCATTGAT，反向引物序列NDM1-R为：CGGCATGTCGAGATAGGAAGT；对应于IMP的正向引物序列IMP-F为：CCACGTATGCATCTGAAT，反向引物序列IMP-R：ACTTTGGCCAAGCTTCTA；对应于VIM的正向引物序列VIM-F为：CAGTCTCCACGCACTTTCA，反向引物序列VIM-R为：GCAGCACCAGGATAGAAGA；对应于OXA2的正向引物序列OXA2-F为：CGCTGTTCGTGATGAGTTC，反向引物序列OXA2-R为：GCTGCCTTCTATCCAGTAATC；对应于OXA10的正向引物序列OXA10-F为：TCAATGGTGTCTTCGTGCT，反向引物序列OXA10-R为：CTTACTTCGCCAACTTCTCTG；对应于OXA23的正向引物序列OXA23-F为：CAGTCTATCAGGAACTTGCG，反向引物序列OXA23-R为：CATTGCCCAACCAGTCTT；对应于OXA48的正向引物序列OXA48-F为：TAAGTGGGATGGACAGACG，反向引物序列OXA48-R为：TTGACAATACGCTGGCTG；对应于KPC的正向引物序列KPC-F为：GGCCGCCGTGCAATACAGTGATAA...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈良安，马秀清，王升启，刘琪琦，李春笋，梁志欣，杨震，赵微，
申请(专利权)人：中国人民解放军总医院，
类型：发明
国别省市：北京,11