在细胞中迅速产生单一或多重报告基因的方法和组合物技术

提供了利用iPSCS以及其他祖细胞、多能和专能干细胞和分化细胞中的安全位点以及多个Lox位点快速开发报告细胞系的方法和组合物。

A method and composition for the rapid production of a single or multiple reporting gene in a cell

Methods and compositions for rapid development of cell lines by using iPSCS and other ancestral cells, pluripotent and specific stem cells, and safety sites in differentiated cells and multiple Lox loci are provided.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】在细胞中迅速产生单一或多重报告基因的方法和组合物本专利申请要求2014年12月15日提交的美国临时申请序号62/091,792的优先权，其全部内容通过引用并入本申请。专利
本专利技术涉及利用iPSCS以及其他祖细胞、多能和专能干细胞和分化细胞中的安全位点快速开发报告细胞系的方法。还提供了一种主细胞系，该主细胞系使用Cre-重组酶诱导的表达盒交换策略以迅速交换报告表达盒，以便以较高效率在相同的同基因型背景下开发新报告细胞系。用于产生这些细胞系的载体构建体以及所选择的启动子和报告基因可以是多重的以提供比度量测量和定量分析以及在体外和体内监测谱系特异性分化。
技术介绍
诱导的多能干细胞(iPSC)正在迅速成为用于毒理学和药物发现的在体外基于人细胞的测定的支柱。这之所以成为可能得益于在该领域中的一连串进展，包括使用转录激活子样效应物核酸酶(TALEN)、锌指核酸酶(ZFN)或成簇规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)/cas9系统进行高效同源重组的技术(Mali等，Science2013339:823-826；Boch等，Science2009326:1509-1512；Urnov等，Na本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于开发主细胞系的方法，所述方法包括将报告表达盒在安全位点整合进入细胞，其中所述报告表达盒包含由组成型活性启动子驱动的报告基因和多个Lox位点。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.12.15 US 62/091,7921.一种用于开发主细胞系的方法，所述方法包括将报告表达盒在安全位点整合进入细胞，其中所述报告表达盒包含由组成型活性启动子驱动的报告基因和多个Lox位点。2.根据权利要求1所述的方法，其中使用Cre-重组酶诱导的表达盒交换策略将所述主细胞系中的所述报告表达盒交换成新的报告表达盒，从而产生具有相同的同基因型背景的新报告细胞系。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中将驱动所述报告基因的启动子插入两个Lox位点之间。4.根据权利要求3所述的方法，其中将所述启动子插入lox2272和lox511之间。5.根据权利要求1-4中任意一项所述的方法，其中所述细胞是祖细胞。6.根据权利要求1-4中任意一项所述的方法，其中所述细胞是多能或专能干细胞。7.根据权利要求6所述的方法，其中所述细胞是诱导的多能干细胞。8.根据权利要求6所述的方法，其中所述细胞是神经干细胞。9.根据权利要求1-4中任意一项所述的方法，其中所述细胞是分化细胞。10.一种主细胞系，其在细胞中的安全位点整合了报告表达盒，所述报告表达盒包含由组成型活性...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾宪民，M·S·拉奥，
申请(专利权)人：应用干细胞有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US