用于抑制血管生成的肽制造技术

本发明专利技术涉及用于抑制血管生成的肽。本发明专利技术还涉及使用本发明专利技术的肽抑制血管生成的方法、以及治疗与VEGF诱导的血管通透性相关的病症的方法。

Peptides used to inhibit angiogenesis

The present invention relates to a peptide for inhibiting angiogenesis. The invention also relates to a method of using the peptide to inhibit angiogenesis and to treat a disease associated with VEGF induced vascular permeability.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于抑制血管生成的肽本专利申请要求2015年3月2日提交的美国临时专利申请号62/126,968的优先权，所述美国临时专利申请以引用的方式全文并入本文。
本专利技术涉及用于抑制血管生成的肽。本专利技术还涉及使用本专利技术的肽抑制血管生成的方法、以及治疗与VEGF诱导的血管通透性相关的病症的方法。
技术介绍
微管(MT)细胞骨架提供了内皮屏障调控的重要控制点；然而，这一关键细胞骨架元素的作用尚未得到很好的研究。MT稳定药物紫杉醇已显示减轻小鼠肺部炎症模型中的内皮血管渗漏，提示MT在介导肺血管通透性增加中可能是重要的。然而，紫杉醇展示一般毒性，使其成为对于医生及其患者不方便的药物。微管末端结合蛋白是高度保守的微管加上末端跟踪辅助因子，其与生长中的微管(MT)结合并且抑制MT灾难性事件。两种这样的末端结合蛋白EB1和EB3在调节内皮细胞骨架动力学和细胞形态变化中发挥作用，所述内皮细胞骨架动力学和细胞形态变化是内皮屏障通透性的主要决定因素。Ca2+是调节内皮通透性和血管稳态的高度通用的第二信使。在促炎介质下游的磷脂酶Cβ(PLCβ)活化促进磷脂酰肌醇二磷酸(PIP2)水解成肌醇1,4,5-三磷酸(IP3)和二酰基甘油(DAG)。IP3刺激来自IP3敏感的细胞内储库即内质网(ER)的Ca2+释放。来自ER储库的Ca2+耗尽由ER膜上的IP3R活化介导，并且导致细胞内Ca2+的瞬时增加。Ca2+进入或“流入”由对各种阳离子(包括Ca2+和Mg2+)可渗透的经典瞬时受体电位(TRPC)通道介导。TRPC1和4是通过ER耗尽活化的内皮肺微血管细胞中的储库操作的Ca2+通道(SOC)。Ca2+的细胞内浓度中的增加上调蛋白激酶Cα(PKCα)的活性。PKCα是对多种介质包括血管内皮生长因子(VEGF)的内皮通透性应答的关键调节剂。PKCα使p120-连环蛋白磷酸化并且介导其与VE-钙粘蛋白的解离，因此导致VE-钙粘蛋白内化。PKCα还通过使p115RhoGEF和GDI-1磷酸化而在RhoA活化的上游起作用。RhoA依次又通过活化Rho激酶(ROCK)来促进磷酸化诱导的肌球蛋白轻链磷酸酶(MLCP)的抑制。MLCP的抑制伴随着MLCK的Ca2+/钙调蛋白依赖性活化，这导致MLC的磷酸化，并且响应于促炎介质如凝血酶和组胺以及生长因子而诱导肌动球蛋白的收缩。MT细胞骨架的完整性是IP3诱导的来自ER储库的Ca2+释放所必需的。通过MT去稳定化或MT稳定剂(诺考达唑、秋水仙素和紫杉醇)改变MT动力学抑制IP3门控的Ca2+释放，提示MT动力学是IP3R完全活化所必需的。MT细胞骨架涉及ER的重塑，因此确保响应于外部刺激的Ca2+波的组构和传播。通过EB1和EB3与基质相互作用分子1(STIM1)的直接相互作用，ER与MT生长末端附着并且连同MT生长末端一起延长。HeLa中的EB1耗尽(HeLa细胞不表达EB3)减少ER突出事件，然而，不抑制通过毒胡萝卜素的SOC活化，提示一些其他机制涉及在上皮细胞中的SOC活化和钙信号传导的传播。在内皮细胞中，IP3R在细胞质膜微囊中的定位对于ERCa2+储库耗尽和SOC活化两者均至关重要。这指示IP3R的活化和/或其对IP3的应答性是钙信号传导的重要元素。与以前的发现一致，我们发现MT细胞骨架响应于IP3正面调节IP3R活化，并且因此在细胞各处传递细胞外信号，引发生理应答。EB3而不是EB1与IP3R直接相互作用，并且这种相互作用提供了用于内皮细胞中的钙信号组构的关键控制点。血管内皮生长因子(VEGF)已知经由直接和间接方法促进血管生成。已知VEGF致使微血管内皮细胞具有高通透性，使得血浆蛋白质溢出到血管外空间内，导致由于纤维蛋白凝胶沉积的外渗性纤维蛋白原凝固。血管外纤维蛋白充当支撑新血管和其他间充质细胞向内生长的基质，其他间充质细胞生成成熟的血管化基质。因此，VEGF诱导的血管通透性的抑制将导致血管生成的抑制。需要新型疗法来预防VEGF诱导的血管通透性并且抑制血管生成。肿瘤的血管网络的形成，即新生血管形成，通过帮助肿瘤生长和转移，在肿瘤发展自始至终起重要作用。一旦肿瘤病变直径超过几毫米，缺氧和营养剥夺就触发“血管生成开关”。肿瘤细胞释放血管内皮生长因子(VEGF)，其刺激内皮细胞的发芽和增殖。目前FDA批准了用于癌症的几种抗血管生成疗法，包括针对VEGF-A的人源化功能阻断抗体片段、阿瓦斯汀(贝伐珠单抗)和酪氨酸激酶抑制剂、索拉非尼和舒尼替尼，其靶向几种生长受体。因此，控制肿瘤相关血管生成的治疗是限制癌症进展和转移的有希望的策略。内部内皮血液-视网膜屏障的丧失和由此导致的黄斑水肿和损伤是老年人中的眼病症和失明的主要原因。目前，这些状况也称为年龄相关性黄斑变性(AMD)是无法治愈的。另外，AMD的新生血管形式的特征在于来自脉络膜的血管生长，其穿过布鲁赫膜进入视网膜下区域。阻止新生血管性AMD的常见根本原因的一些有效疗法是有限的，目的是通过破坏在脉络膜中产生的新血管来阻碍视力丧失。尽管使用玻璃体内注射皮质类固醇和抗VEGF剂的目前治疗有效延缓了眼病的进展，但它们无法完全消除失明的风险。因此，需要用于治疗眼病症和预防视力丧失的新型和更有力的疗法或组合治疗方法。
技术实现思路
本文提供了经分离的肽。该肽可包含KFARLWTEIPTAIT(SEQIDNO:1)、FTEIPTI(SEQIDNO:3)、其片段或其变体。该肽还可由KFARLWTEIPTAIT(SEQIDNO:1)、FTEIPTI(SEQIDNO:3)、其片段或其变体组成。变体可包含保守取代。变体可包含含有Ser/Thr-x-Ile-Pro序列(SEQIDNO:5)(最小EB结合共有基序序列)的任何肽序列。肽可与脂肪酸缀合，即肉豆蔻酰化，或与载体肽连接。载体肽可为触角足肽(AP)、触角足肽、穿膜肽、TAT、转运素或聚精氨酸。肽可为药物制剂的部分，所述药物制剂可包括药学可接受的赋形剂。本专利技术提供了抑制血管生成的方法，所述方法包括向有此需要的患者施用包含KFARLWTEIPTAIT(SEQIDNO:1)、FTEIPTI(SEQIDNO:3)的氨基酸序列或其片段的经分离的肽。该方法包括施用治疗有效量的本专利技术的肽，例如有效抑制血管生成的量。另外，该方法包括施用包含治疗有效量的本专利技术的肽的药物组合物。本专利技术提供了治疗方法，其中有需要的患者患有癌症或与VEGF诱导的通透性相关的病症，例如视力损害或视力丧失(失明)、黄斑变性、视网膜中央静脉阻塞、视网膜分支静脉阻塞增殖性糖尿病视网膜病变、新生血管性年龄相关性黄斑变性(AMD)、早产儿视网膜病变、缺血性视网膜病变、眼内新生血管形成、角膜新生血管形成、视网膜新生血管形成、脉络膜新生血管形成、糖尿病性黄斑水肿、糖尿病性视网膜缺血、糖尿病性视网膜水肿和增殖性糖尿病视网膜病变、虹膜红变、新生血管性青光眼、视网膜母细胞瘤、葡萄膜炎和角膜移植物新生血管形成。本专利技术还提供了治疗与VEGF诱导的血管通透性相关的病症的方法，所述方法包括向有此需要的患者施用包含KFARLWTEIPTAIT(SEQIDNO:1)、FTEIPTI(SEQIDNO:3)的氨基酸序列或其片段的经分离的肽。该方法包括施用治疗有效量的本专利技术的肽，例如有效抑制本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抑制血管生成的方法，所述方法包括向有此需要的患者施用包含KFARLWTEIPTAIT(SEQ ID NO:1)、FTEIPTI(SEQ ID NO:3)的氨基酸序列或其片段的经分离的肽。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.03.02 US 62/126,9681.一种抑制血管生成的方法，所述方法包括向有此需要的患者施用包含KFARLWTEIPTAIT(SEQIDNO:1)、FTEIPTI(SEQIDNO:3)的氨基酸序列或其片段的经分离的肽。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述患者患有与VEGF诱导的通透性相关的病症或癌症。3.一种治疗与VEGF诱导的血管通透性相关的病症的方法，所述方法包括向有此需要的患者施用包含KFARLWTEIPTAIT(SEQIDNO:1)、FTEIPTI(SEQIDNO:3)的氨基酸序列或其片段的经分离的肽。4.根据权利要求2或3所述的方法，其中所述与VEGF诱导的血管通透性相关的病症是损伤、视力丧失(失明)、黄斑变性、视网膜中央静脉阻塞、视网膜分支静脉阻塞增殖性糖尿病视网膜病变、新生血管性年龄相关性黄斑变性(AMD)、早产儿视网膜病变、缺血性视网膜病变、眼内新生血管形成、角膜新生血管形成、视网膜新生血管形成、脉络膜新生血管形成、糖尿病性黄斑水肿、糖尿病性视网膜缺血、糖尿病性视网膜水肿和增殖性糖尿病视网膜病变、虹膜红变、新生血管性青光眼、视网膜母细胞瘤、葡萄膜炎和角膜移植物新生血管形成。5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述肽与载体肽连接。6.根据权利要求5所述的方法，其中所述载体肽是触角足肽(AP)、触角足肽、穿膜肽、TAT、转运素或聚精氨酸。7.根据权利要求1-6所述的方法，其中所述肽与脂肪酸缀合。8.根据权利要求7所述的方法，其中所述肽是肉豆蔻酰化的。9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述经分离的肽或其片段与一种或多种VEGF抑制剂组合施用。10.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述经分离的肽或其片段与眼病的激光治疗组合施用。11.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述经分离的肽或其片段与类固醇组合施用。12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述经分离的肽、VEGF抑制剂或类固醇经由玻璃体内注射或局部进行递送。13.经分离的肽用于制备用于抑制有需要的患者中的血管生成的药剂的用途，其中所述肽包含KFARLWTEIPTAIT(SEQIDNO:1)、FTEIPTI(SEQIDNO:3)的氨基酸序列或其片段。14.根据权利要求13所述的用途，其中所述患者患有与VEGF诱导的通透性相关的病症或癌症。15.经分离的肽用于制备用于治疗与VEGF诱导的血管通透性相关的病症的药剂的用途，其中所述经分离的肽包含KFARLWTEIPTAIT(SEQIDNO:1)、FTEIPTI(SEQIDNO:3)的氨基酸序列或其片段。16.根据权利要求15所述的用途，其中所述VEGF相关血管病症是视力损害或视力丧失(失明)、黄斑变性、视网膜中央静脉阻塞、视网膜分支静脉阻塞增殖性糖尿病视网膜病变、新生血管性年龄相关性黄斑变性(AMD)、早产儿视网膜病变、缺血性视网膜病变、眼内新生...

【专利技术属性】
技术研发人员：YA科马洛娃，M罗森布拉特，AB马利克，
申请(专利权)人：伊利诺伊大学受托管理委员会，
类型：发明
国别省市：美国,US