用于高通量聚糖分析的装置、方法、计算机程序产品和试剂盒制造方法及图纸

本申请涉及用于高通量聚糖分析的装置、方法、计算机程序产品和试剂盒。公开了用于聚糖分析的装置。所述装置包括适合接收多个样品的多个上样孔；与上样孔对应排列的多个毛细管，每个毛细管包括包含成层胶的第一部分和包含分离胶的第二部分；和与毛细管对应排列且适合接收已穿过毛细管的样品部分的多个洗脱孔。

Devices, methods, computer program products and kits for high throughput analysis of glycans

The application relates to devices, methods, computer program products and kits for high - throughput analysis of glycans. A device for the analysis of chitosan is disclosed. The device includes a plurality of samples for receiving a plurality of sample holes; a plurality of capillaries and corresponding sample holes are arranged, each capillary comprises a first part and the second part contains the glue layer separating gel containing; and a plurality of holes and arranged corresponding elution capillary and suitable for receiving the samples through the capillary.

【技术实现步骤摘要】
用于高通量聚糖分析的装置、方法、计算机程序产品和试剂盒本申请是申请号为201280050173.3母案的分案申请。该母案的申请日为2012年8月10日；专利技术名称为“用于高通量聚糖分析的装置、方法、计算机程序产品和试剂盒”。背景1.
本申请主要涉及用于高通量聚糖分析的装置、方法和计算机程序产品。2.
技术介绍
与蛋白质表面相连的碳水化合物或聚糖在确保正确的细胞和蛋白功能以及介导蛋白折叠、信号传导和其它重要细胞系统中发挥重要作用。然而，聚糖分析是富有挑战性的，涉及耗时的样品制备和复杂的低通量分析技术。存在对有效和简单允许实施聚糖高通量分析同时保持足够的分辨率和灵敏度的新的和改进的装置、方法和计算机程序产品的需求。这样的需求特别适用于多个领域，包括例如其中需要快速有效分析大量聚糖的学术研究和工业研究以及生物生产和制药工业。
技术实现思路
提供用于高通量聚糖分析的装置、系统、方法和计算机程序产品。在一个方面，提供用于聚糖分析的装置。所述装置包括：(1)适合接收多个样品的多个上样孔；(2)与上样孔对应排列的多个毛细管，每个毛细管包括包含成层胶的第一部分和包含分离胶的第二部分；和(3)与毛细管对应排列且适合接收已穿过毛细管的样品部分的多个洗脱孔。在一个方面，提供用于聚糖分析的毛细管阵列。该毛细管阵列包括：(1)至少五个基本上相互平行排列的毛细管，每个毛细管包括排列在毛细管第一部分的预灌注成层胶和排列在毛细管第二部分的预灌注分离胶，和(2)排列在至少五个毛细管的对侧使得该至少五个毛细管形成单一单元的第一和第二支撑结构。在一个方面，提供了存储在计算机可读媒体中的信息元素文库。所述信息文库包括：(1)当毛细管经受电场时迁移穿过毛细管(包括包含成层胶的第一部分和包含分离胶的第二部分)的多个单个带电、荧光标记聚糖所对应的多个由实验得出的毛细管迁移时间；和(2)葡聚糖阶梯所对应的迁移时间。在一个方面，提供用于高通量聚糖分析的方法。所述方法包括：(1)将多个糖蛋白样品加入多个上样孔中；(2)使用变性溶液变性上样孔中的糖蛋白样品；(3)使用聚糖裂解酶从上样孔中的每个变性糖蛋白样品上裂解聚糖；(4)用带电荧光标签标记所裂解的聚糖；和(5)施用电场，该电场配置为使标记聚糖从上样孔穿过离子渗透膜并进入且沿着与上样孔对应排列的多个毛细管中的一个迁移，每个毛细管包括包含成层胶的第一部分和包含分离胶的第二部分；(6)用适合导致标记聚糖发射荧光辐射的光源激发沿着毛细管迁移的标记聚糖；(7)检测标记聚糖所发射的荧光辐射；和(8)基于所检测的荧光辐射分析标记聚糖。在一个方面，提供制造用于高通量聚糖分析的毛细管阵列的方法。所述方法包括：(1)提供多个毛细管；(2)向每个毛细管中预灌注第一部分的成层胶和第二部分的分离胶；和(3)在对侧将毛细管结构性连接，使得毛细管基本上相互平行排列并形成单一单元。在一个方面，提供用于产生聚糖数据库的方法。所述方法包括：(1)通过实验获得当毛细管经受电场时已迁移穿过毛细管(包括包含成层胶的第一部分和包含分离胶的第二部分)的多个单个带电、荧光标记聚糖所对应的多个由实验得出的迁移时间；和(2)将所收集的与已迁移穿过毛细管的多个单个带电、荧光标记聚糖中的每一个的识别信息相对应的多个由实验得出的迁移时间排列进入配置为计算机可访问的数据库。在一个方面，提供用于鉴定多个聚糖的方法。所述方法包括：(1)用带电荧光标签标记聚糖；(2)使标记聚糖沿着多个毛细管(沿基本平行的方向进入电场)迁移，每个毛细管包括包含成层胶的第一部分和包含分离胶的第二部分；(3)基于检测的标记聚糖所发射的荧光辐射，确定每种标记聚糖相对于荧光标记葡糖糖标准阶梯的迁移时间；和(4)比较相对迁移时间与当毛细管经受电场时已迁移穿过毛细管(包括包含成层胶的第一部分和包含分离胶的第二部分)的多个单个带电、荧光标记聚糖所对应的由实验得出的迁移时间的数据库。在一个方面，提供用于聚糖分析的试剂盒。所述试剂盒包括：(1)用于聚糖分析的毛细管阵列，包括至少五个基本上相互平行排列的毛细管，每个毛细管包括排列在毛细管第一部分的预灌注成层胶和排列在毛细管第二部分的预灌注分离胶，和排列在至少五个毛细管的对侧使得该至少五个毛细管形成单一单元的第一和第二支撑结构；(2)适于变性糖蛋白的变性溶液；(3)适于裂解聚糖的聚糖裂解酶溶液；和(4)适于标记所裂解聚糖的荧光标记溶液。在一个方面，提供用于聚糖分析的试剂盒。所述试剂盒包括：(1)适于变性糖蛋白的变性溶液；(2)适于裂解聚糖的聚糖裂解酶溶液；和(3)适于标记所裂解聚糖的荧光标记溶液。上述概括描述和下列详细描述仅为示例性的，并且不以任何方式限制本专利技术的范围。可从下列详细描述中认识到或可通过实践本专利技术了解到本文所具体论述的其它实施方案或实施方案的变化，包括本文所论述的实施方案的特征的各种组合。附图说明附图阐明了本文所公开的各种示例性实施方案。这些附图仅为示例性的，并且不以任何方式限制本专利技术的范围。图1说明了用于聚糖制备和分析的示例性装置。图2说明了用于聚糖制备和分析的示例性系统。图3说明了示例性聚糖制备和分析工作流。图4A-4D说明了示例性毛细管阵列和相关的聚糖分辨率和灵敏度数据。图5说明了七种碳水化合物的毛细管凝胶电泳和聚糖分辨率及灵敏度数据。图6说明了用于聚糖制备和分析的示例性装置。图7说明了示例性系统及相关的聚糖分析数据。图8-10说明了关于在毛细管阵列系统上低聚麦芽糖标准和来自IgG及其它糖蛋白的聚糖的分离的各种数据和电泳图谱；AppliedBiosystems3130GeneticAnalyzer。具体实施方式如本文所使用的，术语“抗体”指(a)免疫球蛋白多肽和免疫球蛋白多肽的免疫活性部分，即，免疫球蛋白家族多肽，或其片段，其包含与特异性抗原(例如CD70)免疫特异性结合的抗原结合部位和包含复杂的N-糖苷-连接糖链的Fc结构域，或(b)这些免疫球蛋白多肽或与抗原(例如CD70)免疫特异性结合的片段的保守取代衍生物。抗体在例如，Harlow&Lane,Antibodies:ALaboratoryManual(抗体：实验室手册)(冷泉港实验室出版社，1988)中概述。除非另外在上下文中显而易见，提到抗体还包括如下文中更详细描述的抗体衍生物。如本文所使用的，“抗体衍生物”意指如上所定义的抗体(包括抗体片段)或包含复杂的N-糖苷连接糖链的抗体Fc结构域或区域，其通过共价连接异源分子修饰，例如通过连接异源多肽(例如异源蛋白的配体结合结构域)，或通过糖基化(核心岩藻糖基化除外)、去糖基化(非核心岩藻糖基化除外)、乙酰化、磷酸化或通常与抗体或Fc结构域或区域无关的其它修饰。如本文所使用的，术语“单克隆抗体”指从单细胞克隆(包括任何真核或原核细胞克隆)或噬菌体克隆衍生的抗体，而非其生产方法。因此，术语“单克隆抗体”不限于通过杂交瘤技术生产的抗体。如本文所使用的，术语“Fc区域”指抗体的恒定区，例如，CH1-铰链-CH2-CH3结构域，任选具有CH4结构域，或这样的Fc区域的保守取代衍生物。如本文所使用的，术语“Fc结构域”指抗体的恒定区结构域，例如，CH1、铰链、CH2、CH3或CH4结构域，或这样的Fc结构域的保守取代衍生物。如本文所本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于高通量聚糖分析的方法，包括：将多个糖蛋白样品加入多个上样孔中；使用变性溶液变性上样孔中的糖蛋白样品；使用聚糖裂解酶从上样孔中的每个变性糖蛋白样品上裂解聚糖；用带电的荧光标签标记所裂解的聚糖；施用配置为使标记聚糖从上样孔穿过离子渗透膜进入并沿着与上样孔对应排列的多个毛细管中的一个迁移的电场，每个毛细管包括包含成层胶的第一部分和包含分离胶的第二部分；用适合导致标记聚糖发射荧光辐射的光源激发沿着毛细管迁移的标记聚糖；检测由标记聚糖所发射的荧光辐射；和基于所检测的荧光辐射分析标记聚糖。

【技术特征摘要】
2011.08.12 US 61/5231841.用于高通量聚糖分析的方法，包括：将多个糖蛋白样品加入多个上样孔中；使用变性溶液变性上样孔中的糖蛋白样品；使用聚糖裂解酶从上样孔中的每个变性糖蛋白样品上裂解聚糖；用带电的荧光标签标记所裂解的聚糖；施用配置为使标记聚糖从上样孔穿过离子渗透膜进入并沿着与上样孔对应排列的多个毛细管中的一个迁移的电场，每个毛细管包括包含成层胶的第一部分和包含分离胶的第二部分；用适合导致标记聚糖发射荧光辐射的光源激发沿着毛细管迁移的标记聚糖；检测由标记聚糖所发射的荧光辐射；和基于所检测的荧光辐射分析标记聚糖。2.权利要求1的方法，其中变性上样孔中的糖蛋白样品包括使用SDS变性糖蛋白样品。3.权利要求1的方法，还包括将每个糖蛋白样品与TBE缓冲溶液混合。4.权利要求1的方法，其中从每个变性糖蛋白样品裂解聚糖包括使用PNGaseF裂解聚糖。5.权利要求1的方法，其中从每个变性糖蛋白样品裂解聚糖包括使用内切糖苷酶H裂解聚糖。6.权利要求1的方法，其中从每个变性糖蛋白样品裂解聚糖包括使用EndoD、EndoFl、EndoF2和EndoF3中的一种或多种裂解聚糖。7.权利要求1的方法，其中从每个变性糖蛋白样品裂解聚糖包括使用ABS(产脲节杆菌唾液酸酶)、NAN1(重组唾液酸酶)、AMF(杏仁粉α-岩藻糖苷酶)、BKF(牛肾α-岩藻糖苷酶)、BTG(牛睾丸β-半乳糖苷酶)、SPG(肺炎链球菌β-半乳糖苷酶)、GUH(肺炎链球菌己糖胺酶，大肠杆菌重组体)和JBM(刀豆甘露糖苷酶)中的一种或多种裂解聚糖。8.权利要求1的方法，其中从每个变性糖蛋白样品裂解聚糖包括使用肽-N-(N-乙酰基-β-葡萄糖胺基)天冬酰胺酰胺酶裂解聚糖。9.权利要求1的方法，其中使用肽-N-(N-乙酰基-β-葡萄糖胺基)天冬酰胺酰胺酶裂解聚糖包括裂解N-连接聚糖。10.权利要求1的方法，其中用带电荧光标签标记所裂解的聚糖包括用8-氨基萘-1,3,6-三磺酸二钠在聚糖的还原末端标记所裂解的聚糖。11.权利要求1的方法，其中用带电荧光标签标记所裂解的聚糖包括用7-氨基-1,3-萘二磺酸钾在聚糖的还原末端标记所裂解的聚糖。12.权利要求1的方法，其中用带电荧光标签标记所裂解的聚糖包括用4-氨基-萘磺酸钠在聚糖的还原末端标记所裂解的聚糖。13.权利要求1的方法，其中用带电荧光标签标记所裂解的聚糖包括用包含酰肼官能团的带电荧光标签在聚糖的还原末端标记所裂解的聚糖。14.权利要求1的方法，其中用带电荧光标签标记所裂解的聚糖包括用包含ALEXAFLUOR350酰肼、ALEXAFLUOR488酰肼、ALEXAFLUOR647酰肼、ALEXAFLUOR594酰肼和ALEXAFLUOR555酰肼中的一种或多种的带电荧光标签在聚糖的还原末端标记所裂解的聚糖。15.权利要求1的方法，其中用带电荧光标签标记所裂解的聚糖包括用包含ALEXAFLUOR350羟胺、ALEXAFLUOR488羟胺和ALEXAFLUOR647羟胺中的一种或多...

【专利技术属性】
技术研发人员：P斯莱德，
申请(专利权)人：生命科技公司，
类型：发明
国别省市：美国,US