用于指导RNA/CAS内切核酸酶复合物的调节型表达的组合物和方法技术

提供了用于在植物细胞、植物和种子中进行指导RNA/Cas内切核酸酶系统的调节型表达的组合物和方法。还提供了用于在植物或植物细胞的基因组中进行靶序列的基因组修饰的组合物和方法。这些方法和组合物采用调节型指导RNA/Cas内切核酸酶系统，以提供用于修饰或改变植物、植物细胞或种子的基因组内的靶位点的有效系统。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于指导RNA/CAS内切核酸酶复合物的调节型表达的组合物和方法本申请要求于2015年2月25日提交的美国临时申请号62/120421的权益，该申请通过引用以其全文结合在此。
本披露涉及植物分子生物学领域，具体涉及用于改变植物细胞的基因组的方法。以电子方式提交的序列表的引用该序列表的官方副本经由EFS-Web作为ASCII格式的序列表以电子方式提交，文件名为“20160129_BB2393PCT_ST25_SeqLst.txt”，创建于2016年1月29日，且具有76千字节大小，并与本说明书同时提交。包含在该ASCII格式的文件中的序列表是说明书的一部分并通过引用以其全文结合在此。
技术介绍
重组DNA技术使得能够将DNA序列插入生物体的基因组中，由此改变生物体的表型。最常用的植物转化方法是农杆菌感染和生物射弹粒子轰击，其中基因以随机方式并以不可预测的拷贝数整合到植物基因组中。因此，为控制植物中的基因整合进行了大量的工作。一种用于插入或修饰DNA序列的方法涉及通过引入侧翼是与基因组靶标同源的序列的转基因DNA序列来进行的同源DNA重组。美国专利号5,527,695描述了用靶向真核生物本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于在植物细胞中进行指导RNA/Cas内切核酸酶复合物的调节型表达的方法，该方法包括：a.向植物细胞提供指导RNA，该植物细胞具有稳定并入其基因组中的重组DNA构建体，该重组DNA构建体包含有效地连接至Cas内切核酸酶的诱导型启动子，其中所述指导RNA和Cas内切核酸酶能够形成复合物，该复合物使得该Cas内切核酸酶能够在所述植物细胞的基因组中的靶位点处引入双链断裂；并且，b.通过对该植物细胞进行化学或胁迫处理来诱导该诱导型启动子，其中所述诱导导致该Cas内切核酸酶的表达。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.02.25 US 62/1204211.一种用于在植物细胞中进行指导RNA/Cas内切核酸酶复合物的调节型表达的方法，该方法包括：a.向植物细胞提供指导RNA，该植物细胞具有稳定并入其基因组中的重组DNA构建体，该重组DNA构建体包含有效地连接至Cas内切核酸酶的诱导型启动子，其中所述指导RNA和Cas内切核酸酶能够形成复合物，该复合物使得该Cas内切核酸酶能够在所述植物细胞的基因组中的靶位点处引入双链断裂；并且，b.通过对该植物细胞进行化学或胁迫处理来诱导该诱导型启动子，其中所述诱导导致该Cas内切核酸酶的表达。2.如权利要求1所述的方法，其中该诱导型启动子是通过热处理诱导的。3.如权利要求2所述的方法，其中所述热处理包括高于26℃的温度。4.如权利要求1所述的方法，其中该植物细胞来源于单子叶植物或双子叶植物。5.如权利要求1所述的方法，其中该植物细胞是体细胞胚细胞。6.如权利要求1所述的方法，其中经由能够表达该指导RNA的DNA表达盒提供该指导RNA。7.如权利要求1所述的方法，其中该指导RNA作为单链RNA分子抑或双链RNA分子被直接提供至该细胞。8.如权利要求1所述的方法，其中该植物细胞进一步包括可选择标记表达盒。9.如权利要求8所述的方法，其中该可选择标记盒包含中断的可见标记盒，该中断的可见标记盒包含中断可见标记基因的间隔子核苷酸序列，其中所述可见标记基因可以通过表达该Cas内切核酸酶进行恢复。10.如权利要求9所述的方法，该方法进一步包括c)对表达所恢复的可见标记基因的植物细胞进行选择。11.如权利要求10所述的方法，该方法进一步包括d)使c)的植物细胞生长成植物。12.由权利要求11所述的方法产生的植物或植物细胞，其中所述植物具有稳定并入其基因组中的所述诱导型启动子。13.由权利要求12所述的植物产生的种子，其中所述种子具有稳定并入其基因组中的所述诱导型启动子。14.如权利要求1所述的方法，其中该诱导型启动子包括：d)包含SEQIDNO：17或SEQID...

【专利技术属性】
技术研发人员：AM斯甘，S斯维塔舍夫，
申请(专利权)人：先锋国际良种公司，
类型：发明
国别省市：美国,US