新的内切葡聚糖酶制造技术

一种酶制剂，该制剂实质上由具有溶纤活性的酶组成，所述酶包含具有以下序列的由１４个氨基酸残基组成的第一氨基酸序列 Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｘａａ Ｘａａ Ａｓｐ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｘａａ Ｘａａ Ｘａａ Ｃｙｓ Ｘａａ Ｔｒｐ Ｘａａ １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ １０ １１ １２ １３ １４ 和具有以下序列的由５个氨基酸残基组成的第二氨基酸序列 Ｔｒｐ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｘａａ Ｃｙｓ １ ２ ３ ４ ５ 其中， 在第一序列的３号位置上，氨基酸是Ｔｒｐ、Ｔｙｒ或Ｐｈｅ； 在第一序列的４号位置上，氨基酸是Ｔｒｐ、Ｔｙｒ或Ｐｈｅ； 在第一序列的８号位置上，氨基酸是Ａｒｇ、Ｌｙｓ或Ｈｉｓ； 在第一序列９、１０、１２和１４号的各位置上，在第二序列的４号位置上，氨基酸是２０个天然氨基酸残基中的任何一个，其条件是在第一氨基酸序列中，（ｉ）当１２号位置上的氨基酸残基是Ｓｅｒ时，１４号位置上的氨基酸残基不是Ｓｅｒ，和（ｉｉ）当１２号位置上的氨基酸残基是Ｇｌｙ时，１４号位置上的氨基酸残基不是Ａｌａ。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及新的酶制剂，该酶制剂包含显示内切葡聚糖酶活性的酶，其在工业应用(如洗衣组合物、生物抛光(biopolishing)新制造的织物、提供纤维素织物或衣物磨损的外观和处理纸浆)中性能良好。此外，本专利技术涉及编码这种酶的DNA构建体、提供编码这种酶的基因的方法、产生所述酶的方法、包含这种酶的酶制剂以及这些酶在许多工业应用中的用途。专利技术背景纤维素酶或溶纤酶是涉及纤维素水解的酶。在天然纤维素的水解中，已知涉及三种主要类型的纤维素酶，即纤维二糖水解酶(1，4-β-D-葡聚糖纤维二糖水解酶EC 3.2.1.91)、内切-β-1，4-葡聚糖酶(内切1，4-β-D-葡聚糖4-葡聚糖水解酶EC 3.2.1.4)和β-葡萄糖苷酶(EC 3.2.1.21)。纤维素酶由大量微生物(包括真菌，放线菌，粘细菌和真细菌)合成，也由植物合成。已鉴别了各种特异性的特定的内切葡聚糖酶。溶纤酶的一种十分重要的工业用途是用来处理纤维素织物原料或织物，例如作为洗涤剂组合物或织物软化剂组合物中的组分、用于生物-抛光新织物(衣物修饰)和用于获得含纤维素织物(尤其斜纹粗棉布)的＂石洗(stone-washing)＂外观。在例如下列文献中提出了几种这样的处理方法GB-A-1368599，EP-A-0307564和EP-A-0435876，WO 91/172431 WO91/10732，WO 91/17244，PCT/DK95/000108和PCT/DK95/00132。溶纤酶的另一个重要的工业用途是用于纸浆处理，例如为了改善导液(drainage)或使再利用纸脱墨。尤其是，对所论及的工业用途而言，内切葡聚糖酶(EC 3.2.1.4)构成了有意义的一组水解酶。内切葡聚糖酶催化下列键的内切水解纤维素、纤维素衍生物(如羧基甲基纤维素和羟乙基纤维素)、地衣淀粉中的1，4-β-D-配糖键；混合的β-1，3葡聚糖(如谷类β-D-葡聚糖或木糖葡聚糖)和其它含纤维素部分的植物材料中的β-1，4键。公认的名称是内切-1，4-β-D-葡聚糖4-葡聚糖基(glucano)水解酶，本专利技术中使用缩写术语内切葡聚糖酶(endoglucanase)。可以参见T.-M.Enveri，＂微生物纤维素酶＂W.M.Fogarty，微生物酶和生物技术，应用科学出版社，p.183-224(1983)；酶学方法，(1988)Vol.160，p.200-391(Wood，W.A.和Kellogg，S.T.编)；Béguin，P.，＂纤维素降解的分子生物学，微生物学年评(1990)，Vol.44，pp.219-248；Béguin，P.和Aubert，J-P.，＂纤维素的生物降解＂，FEMS微生物学回顾13(1994)p.25-58；Henrissat，B.，＂纤维素酶和它们与纤维素的相互作用＂，纤维素(1994)，Vol.1，pp.169-196。许多出版物中已描述了真菌内切葡聚糖酶，特别是来源于例如尖镰孢、Trichoderma reesei，Trichoderma longibrachiatum，棘孢曲霉，Neocallimastix patriciarum和例如Piromyces、腐质霉属，毁丝霉属，Geotricum，青霉属，耙菌属，鬼伞属的种的那些内切葡聚糖酶。例如，真菌内切葡聚糖酶已由下列文献描述Sheppard P.O.，等，用保守纤维素酶家族-特异性的序列从尖镰孢克隆纤维素酶同系物cDNA，基因，(1994)，vol.15，pp.163-167；Saloheimo，A.，等，＂在酵母中表达的Trichoderma reesei的新小内切葡聚糖酶基因egI5＂，分子微生物学，(1994)vol.13(2)，pp.219-228；van Arsdell，J.N.等，(1987)，Trichoderma reesei在啤酒糖酵母内切葡聚糖酶I的克隆，特征确定和表达，生物/技术560-64；Penttil_，M.等，(1986)，＂Trichoderma reesei纤维素酶基因之间的同源性内切葡聚糖酶I基因的完整的核苷酸序列＂，基因45253 263；Saloheimo，M.等，(1988)，＂EGIII，一种新的Trichoderma reesei内切葡聚糖酶基因和酶两者的鉴定＂，基因63112l；Gonzales，R.等.，＂Trichoderma longibrachiatum egll基因的克隆、序列分析和酵母表达＂，应用微生物学和生物技术，(1992)，vol.38，pp.370-375；Ooi，T.等棘孢曲霉纤维素酶(FI-CMCase)cDNA的克隆和序列分析＂，Curr.Genet.，(1990)，vol.18，pp.217222；Ooi，T.等，编码棘孢曲霉纤维素酶(FI-CMCase)的基因的完整的核苷酸序列＂，核酸研究，(1990)，vol.18，No.19，P.5884；Xue，G.等，＂多种厌氧瘤胃真菌Neocallimastix patriciarum纤维素酶cDNA在大肠杆菌中的克隆和表达＂，J.Gen.Microbiol.，(1992)，vol.138，pp.1413-1420；Xue G.等，＂编码具有高内切葡聚糖酶、纤维二糖水解酶和木聚糖酶活性的三个多功能催化区的Neocallimastix patriciarum的新的多糖类水解酶cDNA(celD)＂，J.Gen.Microbiol.，(1992)，vol.138，pp.2397-2403；Zhou，L.等，＂来源于厌氧真菌Neocallimastix patriciarum的编码模式家族内切葡聚糖酶的无内含子celB″，生物化学杂志，(1994)，vol.297，pp.359 364；Dalbφge，H.和Heldt-Hansen，H.P.，＂有效表达克隆真菌酶基因的新方法＂，Mol.Gen.Genet.，(1994)，vol.243，pp.253260；Ali，B.R.S.等，＂厌氧真菌Piromyces纤维素酶和半纤维素酶构成多蛋白纤维素-结合复合物和由多基因族编码＂，FEMS微生物学通讯，(1995)，vol.125，No，1，pp.15′-21。此外，日本DNA数据库(公众可从Internet上获得的DDBJ数据库)包括从微紫青霉克隆的编码内切葡聚糖酶的两个DNA序列(分别由A.Koch和G.Mernitz克隆)和从灰腐质霉变种thermoidea克隆的编码内切葡聚糖酶DNA序列(由T.Uozumi克隆)。两种Macrophomina phaseolina的内切葡聚糖酶已被克隆和测序，参见Wang，H.Y.和Jones，R.W.＂植物致病真菌Macrophomina phaseolina的内切葡聚糖酶-编码基因的克隆，特征确定和功能性表达＂，基因，158125 128，1995；和Wang，H.Y.和Jones，R.W.＂从植物致病真菌Macrophomina phaseolina克隆的单一内切葡聚糖酶-编码基因＂，应用和环境微生物学，612004-2006，1995。这些内切葡聚糖酶中的一个显示与真菌Trichoderma reesei eg13内切葡聚糖酶本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：M·肖莱恩，L·N·安德森，S·F·拉森，M·S·考皮宁，L·朗厄，R·I·尼尔森，M·伊哈拉，S·塔卡基，
申请(专利权)人：诺沃奇梅兹有限公司，
类型：发明
国别省市：