一种叶酸修饰的二硫化钼包裹周期性介孔有机硅纳米载药复合物的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种叶酸修饰的二硫化钼包裹周期性介孔有机硅纳米载药复合物的制备方法，包括：将十六烷基三甲基溴化铵分散在溶剂中，加入TEOS和TESPTS到上述混合液中反应形成PMOs，在其表面修饰巯基得到PMOs‑SH；将所得的产物与阿霉素DOX混合得到PMOs‑DOX；制备LA‑PEI，并将其修饰到二硫化钼上得到MoS2‑LA‑PEI，将所得的产物与PMOs‑DOX混合并超声，再将产物与叶酸修饰的牛血清白蛋白BSA反应，即得产物PMOs‑DOX@MoS2‑PEI‑BSA‑FA。本发明专利技术方法简单，产物具有pH及光照双响应输送，具有较好生物相容性，具有应用于肿瘤靶向及协同治疗的前景。

Preparation method of folic acid modified molybdenum disulfide encapsulated periodic mesoporous silica nano drug loading composite

The invention relates to a method for preparing drug loaded molybdenum disulfide coated periodic mesoporous organosilica nanoparticle modified a folic acid compound includes: Sixteen alkyl three methyl bromide dispersed in a solvent, adding TEOS and TESPTS to form the PMOs reaction mixture, the surface modification of PMOs thiol SH; the resulting product is mixed with DOX PMOs DOX adriamycin; preparation of LA PEI, and used to modify the MoS2 LA MoS2 on PEI, the resulting product with PMOs and DOX mixed ultrasound, then the product with folic acid modified bovine serum albumin BSA reaction, the product of PMOs DOX@MoS2 PEI BSA FA. The method of the invention is simple, the product is pH and light responsive transportation, has good compatibility with biological, application in tumor treatment and to the prospect of collaboration.

【技术实现步骤摘要】
一种叶酸修饰的二硫化钼包裹周期性介孔有机硅纳米载药复合物的制备方法
本专利技术属于靶向纳米材料领域，特别涉及一种叶酸修饰的二硫化钼包裹周期性介孔有机硅纳米载药复合物的制备方法。
技术介绍
恶性肿瘤严重威胁人类健康和生命，近年来肿瘤的发病率和死亡率不断增加，肿瘤治疗已经成为当前医学研究领域所面临的一个重大挑战。目前，肿瘤的治疗手段主要以手术切除、放射性治疗以及化学药物治疗为主，某些肿瘤也利用基因、生物治疗等方法作为辅助治疗。化疗药物作为一种全身治疗的手段，可以有效的对抗肿瘤细胞的侵袭和转移，因此化疗在肿瘤的综合治疗中占主导地位。但是传统的化疗药物依然存在一定的局限性，例如水溶性差、缓解期短、排泄缓慢、明显的毒副作用和交叉耐药等缺点。因此这类化学药物的治疗效果仍有待改进。纳米技术的出现为抗肿瘤药物设计提供了新思路。纳米技术融合多学科交叉协作，在肿瘤成像、肿瘤诊断和肿瘤靶向治疗等方面展现出了广阔的应用前景。纳米载药系统由于其易于表面靶向修饰、循环和滞留时间长、易渗透进入细胞、可实现缓释和控制释放等优势，可以克服现有小分子药物制剂所存在的生物选择性差、利用率低、稳定性差、药物作用时间短、不良反应严重等缺陷。周期性介孔有机硅凭借其独有的特性，如规则的介孔孔道、比表面积和内孔容积大、孔径分布较窄而且可调、表面易修饰等，在催化、吸附、材料和药物载体等领域有着广泛的应用。目前，介孔硅材料的纳米响应载体的制备已经发展到一个新阶段，纳米载体中响应基团的引入使得纳米载体逐步实现智能化，从而实现包封物质的装载和可控释放。目前基于介孔二氧化硅响应的控释体系的研究对药物靶向输送和刺激响应控释相结合的研究中，加强靶向输送和刺激响应控释相结合，更好地将药物输送至靶向部位，实现刺激响应控释，提高治疗效果、减小毒副作用的相关研究逐步引起学者们广泛的关注。此外，对于构建介孔硅靶向输送和刺激响应控释系统中另一个重要的因素是获得理想的封孔物质及封孔方法。过渡金属硫化物具有强的近红外吸收，其具有较高的光和热灵敏度、良好的生物相容性、大的比表面积和易于修饰等特点被用于构建药物载体及光热治疗。有研究表明二硫化钼纳米片在一定的条件下，可以成为一种很好的封孔剂封闭孔道，达到不占用介孔二氧化硅的孔道内部，从而不影响药物的加载与释放。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种叶酸修饰的二硫化钼包裹周期性介孔有机硅纳米载药复合物的制备方法，该方法简单，反应条件温和，易于操作，具有产业化实施的前景，本专利技术得到的纳米颗粒具有较好的水分散性，及生物相容性，具有应用于肿瘤靶向及协同治疗的前景。本专利技术的一种叶酸修饰的二硫化钼包裹周期性介孔有机硅纳米载药复合物的制备方法，包括：(1)将十六烷基三甲基溴化铵分散在溶剂中，在30-50℃下搅拌至溶解，加入正硅酸乙酯TEOS和双(三乙氧基硅基)-烷基多硫化物TESPTS到上述混合液中，继续搅拌1-4h，离心，取沉淀，提纯后得到周期性介孔有机硅纳米粒子PMOs；(2)将PMOs溶于乙醇中，加入(3-氨基丙基)二甲基乙氧基硅烷MPTMS，在50-80℃油浴中回流3-5h，离心收集得到巯基修饰的周期性介孔有机硅PMOs-SH；(3)将上述所得的PMOs-SH分散在缓冲溶液中，加入含阿霉素DOX的缓冲溶液，混合后透析，冷冻干燥得到载药周期性介孔有机硅纳米载药体系PMOs-DOX，其中PMOs-SH、阿霉素DOX的质量比为1:0.5-3；(4)将聚乙烯亚胺PEI溶解在水中，调节pH，得聚乙烯亚胺溶液，然后将α-硫辛酸溶解在乙腈中，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐EDC和N-羟基丁二酰亚胺NHS搅拌均匀后，加入到聚乙烯亚胺溶液中搅拌过夜后透析、冷冻干燥得到LA-PEI；将LA-PEI加入到二硫化钼分散液中，超声得到产物MoS2-LA-PEI；(5)将步骤(4)所得的产物MoS2-LA-PEI与步骤(3)制备的PMOs-DOX混合并超声制备得到二硫化钼包裹的载药周期性有机硅PMOs-DOX@MoS2-LA-PEI；随后将所得产物与叶酸修饰的牛血清白蛋白BSA-FA混合，加入EDC和NHS，搅拌，离心后透析即得叶酸修饰的二硫化钼包裹周期性介孔有机硅纳米载药复合物PMOs-DOX@MoS2-PEI-BSA-FA。所述步骤(1)中溶剂为水/乙醇/氨水混合溶剂，水/乙醇/氨水的体积比为1:0.2-3：0.02-0.05，十六烷基三甲基溴化铵与溶剂的质量体积比为1g:10-40mL，TEOS和TESPTS的摩尔比为1:0.15-0.4，十六烷基三甲基溴化铵与TEOS质量体积比1g：0.2-0.6mL。所述步骤(2)中PMOs、乙醇、MPTMS质量体积比为1mg：2-3mL：0.01-0.04mL。所述步骤(3)中缓冲溶液为PBS溶液，pH为7.4，PMOs-SH分散在缓冲溶液中浓度为0.5-1mg/mL，含阿霉素DOX的缓冲溶液浓度为0.5-1mg/mL。所述步骤(4)中聚乙烯亚胺PEI分子量为1.8KDa，聚乙烯亚胺PEI溶解在水中浓度为12.5mg/mL，调节pH为7.0-7.5，α-硫辛酸溶解在乙腈中浓度为4mg/mL，聚乙烯亚胺和α-硫辛酸的摩尔比为1:1-3，EDC和NHS的摩尔比为1：1，α-硫辛酸和EDC的质量比为0.4-2：1，二硫化钼水分散液浓度为0.3mg/mL，LA-PEI与二硫化钼分散液质量体积比为1mg：0.3-0.5mL，超声时间为30min-90min。所述步骤(5)中MoS2-LA-PEI和PMOs-DOX体积比1：3-1，PMOs-DOX@MoS2-LA-PEI和BSA-FA的质量比为3:1-1:3，PMOs-DOX@MoS2-LA-PEI和EDC质量比为1:1-3，EDC和NHS的摩尔比为1:1。所述步骤(5)中超声时间为2-10min，叶酸修饰的牛血清白蛋白中BSA分子量为66.43KDa。所制备的PMOs-DOX@MoS2-PEI-BSA-FA用于肿瘤治疗的pH/光多重刺激响应型药物载体。本专利技术的PMOs-DOX@MoS2-PEI-BSA-FA载药复合物进行药物释放实验的方法：(1)配制pH值为7.4的DOX磷酸缓冲溶液及pH值为5.0的DOX醋酸盐缓冲溶液，于紫外分光光度计中检测最大吸收值，并拟合两种pH环境下的DOX标准曲线，DOX浓度为0.0025～0.08mg/mL；(2)将0.5-5mgPMOs-DOX@MoS2-PEI-BSA-FA载药复合材料溶于PBS缓冲溶液中，置于两个透析袋中，然后分别将透析袋放入10-15mLpH值为7.4的磷酸缓冲溶液、10-15mLpH值为5.0的醋酸盐缓冲溶液中振荡24h-72h，于不同时间点取样，并补充缓冲液，得到pH响应药物释放曲线。(3)将0.5-5mgPMOs-DOX@MoS2-PEI-BSA-FA载药复合材料分别溶于10-15mLpH值为7.4的磷酸缓冲溶液和10-15mLpH值为5.0的醋酸盐缓冲溶液中，置于透析袋中，然后分别用808nm,照射功率1.0-3.0W/cm2的激光照射1-5min，随后置于摇床中振荡24h-72h，于不同时间点取样，并补充缓冲液，得到光热响应药物释放曲线。本专利技术的一种叶酸修饰的二硫化钼包裹周期性本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种叶酸修饰的二硫化钼包裹周期性介孔有机硅纳米载药复合物的制备方法，包括：(1)将十六烷基三甲基溴化铵分散在溶剂中，在30‑50℃下搅拌至溶解，加入正硅酸乙酯TEOS和双(三乙氧基硅基)‑烷基多硫化物TESPTS到上述混合液中，继续搅拌1‑4h，离心，取沉淀，提纯后得到周期性介孔有机硅纳米粒子PMOs；(2)将PMOs溶于乙醇中，加入(3‑氨基丙基)二甲基乙氧基硅烷MPTMS，在50‑80℃油浴中回流3‑5h，离心收集得到巯基修饰的周期性介孔有机硅PMOs‑SH；(3)将上述所得的PMOs‑SH分散在缓冲溶液中，加入含阿霉素DOX的缓冲溶液，混合后透析，冷冻干燥得到载药周期性介孔有机硅纳米载药体系PMOs‑DOX，其中PMOs‑SH、阿霉素DOX的质量比为1:0.5‑3；(4)将聚乙烯亚胺PEI溶解在水中，调节pH，得聚乙烯亚胺溶液，然后将α‑硫辛酸溶解在乙腈中，加入1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐EDC和N‑羟基丁二酰亚胺NHS搅拌均匀后，加入到聚乙烯亚胺溶液中搅拌过夜后透析、冷冻干燥得到LA‑PEI；将LA‑PEI加入到二硫化钼分散液中，超声得到产物MoS2‑LA‑PEI；(5)将步骤(4)所得的产物MoS2‑LA‑PEI与步骤(3)制备的PMOs‑DOX混合并超声制备得到二硫化钼包裹的载药周期性有机硅PMOs‑DOX@MoS2‑LA‑PEI；随后将所得产物与叶酸修饰的牛血清白蛋白BSA‑FA混合，加入EDC和NHS，搅拌，离心后透析即得叶酸修饰的二硫化钼包裹周期性介孔有机硅纳米载药复合物PMOs‑DOX@MoS2‑PEI‑BSA‑FA。...

【技术特征摘要】
1.一种叶酸修饰的二硫化钼包裹周期性介孔有机硅纳米载药复合物的制备方法，包括：(1)将十六烷基三甲基溴化铵分散在溶剂中，在30-50℃下搅拌至溶解，加入正硅酸乙酯TEOS和双(三乙氧基硅基)-烷基多硫化物TESPTS到上述混合液中，继续搅拌1-4h，离心，取沉淀，提纯后得到周期性介孔有机硅纳米粒子PMOs；(2)将PMOs溶于乙醇中，加入(3-氨基丙基)二甲基乙氧基硅烷MPTMS，在50-80℃油浴中回流3-5h，离心收集得到巯基修饰的周期性介孔有机硅PMOs-SH；(3)将上述所得的PMOs-SH分散在缓冲溶液中，加入含阿霉素DOX的缓冲溶液，混合后透析，冷冻干燥得到载药周期性介孔有机硅纳米载药体系PMOs-DOX，其中PMOs-SH、阿霉素DOX的质量比为1:0.5-3；(4)将聚乙烯亚胺PEI溶解在水中，调节pH，得聚乙烯亚胺溶液，然后将α-硫辛酸溶解在乙腈中，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐EDC和N-羟基丁二酰亚胺NHS搅拌均匀后，加入到聚乙烯亚胺溶液中搅拌过夜后透析、冷冻干燥得到LA-PEI；将LA-PEI加入到二硫化钼分散液中，超声得到产物MoS2-LA-PEI；(5)将步骤(4)所得的产物MoS2-LA-PEI与步骤(3)制备的PMOs-DOX混合并超声制备得到二硫化钼包裹的载药周期性有机硅PMOs-DOX@MoS2-LA-PEI；随后将所得产物与叶酸修饰的牛血清白蛋白BSA-FA混合，加入EDC和NHS，搅拌，离心后透析即得叶酸修饰的二硫化钼包裹周期性介孔有机硅纳米载药复合物PMOs-DOX@MoS2-PEI-BSA-FA。2.根据权利要求1所述的一种叶酸修饰的二硫化钼包裹周期性介孔有机硅纳米载药复合物的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中溶剂为水/乙醇/氨水混合溶剂，水/乙醇/氨水的体积比为1:0.2-3:0.02-0.05，十六烷基三甲基溴化铵与溶剂的质量体积比为1g:10-40mL，TEOS和TESPTS的摩尔比为1:0.15-0.4，十六烷基三甲基溴化铵与TEOS质量体积比1g:0.2-0.6mL。...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱利民，吴建荣，
申请(专利权)人：东华大学，
类型：发明
国别省市：上海,31