本发明专利技术公开了一株植物乳杆菌ZN‑3及应用，本发明专利技术提供的植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）ZN‑3，保藏在中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏编号为：CCTCC NO：M 2017286。本发明专利技术提供的植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）ZN‑3具有耐酸、耐胆盐特性，能够通过胃定植于肠道，对动物源致病菌有抑菌作用，既包括革兰氏阴性菌：大肠杆菌、沙门氏菌、多杀性巴士杆菌、猪丹毒丝菌、副猪嗜血杆菌、猪传染性胸膜肺炎，也包括革兰氏阳性菌：猪链球菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌。与抗生素相比较，对耐药性较强的病原菌有很好的抑菌效果。
A strain of Lactobacillus plantarum ZN 3 and its application
The invention discloses a Lactobacillus plantarum ZN 3 and application, the invention provides Lactobacillus plantarum (Lactobacillus plantarum ZN) 3, preservation of culture collection in China typical (CCTCC), the preservation number is: CCTCC NO:M 2017286. The present invention provides Lactobacillus plantarum (Lactobacillus plantarum ZN) 3 with acid and bile salt tolerance characteristics through gastric colonization in the intestine of animal pathogenic bacteria have antibacterial effect, including gram negative bacteria: Escherichia coli, Salmonella, bacillus, multocide bus Erysipelothrix rhusiopathiae, vice Haemophilus influenzae, Actinobacillus pleuropneumoniae, including gram positive bacteria: Streptococcus, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis. Compared with antibiotics, it has a good antibacterial effect on pathogenic bacteria with strong resistance.
【技术实现步骤摘要】
一株植物乳杆菌ZN-3及应用
本专利技术涉及生物
，特别是涉及一株分离自中草药发酵饲料中的植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)ZN-3，还涉及所述植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)ZN-3对致病性动物源病原菌的抑制作用，以及作为预防和治疗动物肠道疾病的益生菌在畜禽养殖中的应用。
技术介绍
饲用抗生素是一种保障动物健康、提高畜禽生产性能的抗生素类药物，抗生素作为饲料添加剂在畜禽颜值业中得到了广泛应用，但随着饲用抗生素耐药性、药物残留及其对人类健康影响等问题的出现，许多国家已对畜牧业饲料添加剂用抗生素的使用作出限制，力图避免饲用抗生素的危害，尤其是近十年来，限制尤为严格。我国饲料添加剂管理条例也对抗生素添加剂的使用及其添加量做出了新的规定和限制。我国在2015年底在食品动物中停用洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星4中喹诺酮类兽药，2016年11月停止硫酸粘杆菌素的饲料添加剂用途等规定出台，在饲料中限抗、无抗已成为一种趋势。益生菌微生态制剂是近年发展起来的新型添加剂，不但能防治病害，提高饲料转化率和养殖动物生产性能，还能降低养殖环境及粪便中氨气、硫化氢等有害物质的含量，减少畜禽养殖业对周边环境的污染，而且由于其具有无毒副作用、无耐药性、无残留、绿色安全、生产效果显著等特点逐渐受到重视，是一种绿色饲料添加剂，是国际公认的减少或替代抗生素的良好选择。乳酸菌作为益生菌的重要种类之一，在微生物饲料添加剂和微生物发酵饲料方面有着广阔的应用空间，具有无污染、无残留、不产生耐药性等特点，同时还可以改善饲料风味，促进畜禽生长，提高免疫力，增加动物对疾病的抵抗力，在目前畜牧业生产中有深入研究、发展的趋势。植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)是乳酸菌的一种，大部分分离自发酵类食品中，具有可食用植物源性，充分保证了其在食品和动物饲料中应用的安全性。植物乳杆菌可以通过胃定植于肠道，能大量的产生酸性物质，而且产生的酸性物质能够降低肠道pH值，激活蛋白酶等消化酶活性，促进胃肠蠕动，帮助食物消化吸收。植物乳杆菌在繁殖过程中还能产出特有的乳酸杆菌素，乳酸杆菌素能够抑制病原菌的生长繁殖，植物乳杆菌也可以通过与病原菌对限制性营养素能力竞争，来抑制病原菌的生长，调节肠道微生态组成，形成生物学屏障。同时其发酵产物对动物机体的生理功能和应激反应等也起到积极的促进作用，刺激免疫系统，提高机体免疫力，增强肠组织对细菌侵袭的抵抗能力。中国农业大学张日俊老师研究证明植物乳杆菌对大肠杆菌和沙门氏菌有抑菌作用。Suo等研究发现，植物乳杆菌ZJ316能显著抑制大肠杆菌和沙门氏菌生长，减少腹泻发生。Guerra-Ordaz等报道，断奶仔猪饲喂7天植物乳杆菌后，肠道乳酸杆菌数上升，腹泻减少。Pipper等研究报道，植物乳杆菌通过调节肠道微生物菌群的结构和种类，促进断奶仔猪健康。但也有研究发现，不同菌种特性不尽相同，相同菌种不同菌株其作用也不尽相同，对于植物乳杆菌的抑菌作用，目前主要研究是针对大肠杆菌和沙门氏菌，对猪链球菌、猪丹毒丝菌、副猪嗜血杆菌、猪传染性胸膜肺炎和巴士杆菌的抑菌作用还未增报道。本专利技术筛选获得的植物乳杆菌对多种病原菌均有明显抑菌作用，包括大肠杆菌、沙门氏菌、猪链球菌、多杀性巴士杆菌、猪丹毒丝菌、副猪嗜血杆菌、猪传染性胸膜肺炎、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌，本专利技术旨在通过研究以期获得能够替代饲料中抗生素预防动物疾病的高效功能益生菌，为畜禽微生态制剂提供高效微生物菌株。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供了一种植物乳杆菌，命名为植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)ZN-3，所述植物乳杆菌分离自中草药发酵饲料，该菌株已于2017年5月25日保藏与中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，分类命名：植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)ZN-3，保藏编号为CCTCCNO：M2017286，地址：中国武汉武汉大学。本专利技术的另一个目的在于提供了一种植物乳杆菌的发酵方法，方法简单，易行。本专利技术的最后一个目的在于提供了植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)ZN-3的应用，所述的应用包括用于动物饲料添加剂，或者用于制备致病性动物源病原菌抑菌剂。为实现上述目的，本专利技术所采用的技术方案是：植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)ZN-3，通过以下步骤筛选得到：从广西某生态养殖猪场采取中草药发酵饲料，适当稀释涂布于乳酸菌选择性培养基MRS培养基，35℃厌氧培养48-72h,挑取平板上单菌落，在MRS培养基平板上多次划线纯化，35℃有氧培养，得到纯的菌落。经过大量分选，生理生化及16S鉴定，分离筛选获得一株植物乳杆菌，申请人将其命名为植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)ZN-3，该菌株已于2017年5月25日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，分类命名：植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)ZN-3，保藏编号为CCTCCNO：M2017286，地址：中国武汉武汉大学。分离获得的植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)ZN-3具有如下生物学特性：该菌株为革兰氏阳性，圆端直杆状、单个、成对或短链状，不产生芽孢、不运动。在MRS培养基上菌落直径1-2mm,乳白色，凸起，呈圆形，表面光滑，兼性厌氧。接触酶阴性，无致病性。最适生长温度30-37℃，最适生长pH6-7。将其16SrRNA基因测序，结果在NCBI进行blastn比对，发现其16SrRNA与植物乳杆菌(KC422318.1)的序列同源性最高，相似性为99％。本专利技术菌株耐受性强，在酸性和高胆盐环境中具有较高的存活率，在pH2.0条件下，37℃孵育2h，活菌数高达7.23×108CFU/mL；在0.3％胆盐浓度条件下，37℃孵育2h，活菌数高达1.33×109CFU/mL。本专利技术菌株对多种肠道致病菌有明显抑菌作用，包括大肠杆菌、沙门氏菌、猪链球菌、多杀性巴士杆菌、猪丹毒丝菌、副猪嗜血杆菌、猪胸膜肺炎放线杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌。在大肠杆菌和金黄色葡萄球菌对部分抗生素表现出耐药性的同时，植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)ZN-3对这两种菌具有明显的抑菌作用。植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)ZN-3的发酵方法，包括：MRS液体培养基中，35℃100rpm培养12-24h。植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)ZN-3的应用，包括用于制备动物饲料添加剂，用于制备调节畜禽肠道疾病的调节剂、用于制备动物抗生素替代品、或者用于制备致病性动物源病原菌抑菌剂；所述的致病性动物源病原菌包括但不限于：大肠杆菌、沙门氏菌、猪链球菌、多杀性巴士杆菌、猪丹毒丝菌、副猪嗜血杆菌、猪胸膜肺炎放线杆菌、金黄色葡萄球菌或表皮葡萄球菌。本专利技术的保护内容还包括：植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)ZN-3在制备耐药性金黄色葡萄球菌抑制剂中的应用；植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)ZN-3在制备耐药性大肠杆菌抑制剂中的应本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种分离的植物乳杆菌，其特征在于，所述的植物乳杆菌为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）ZN‑3，保藏编号为CCTCC NO：M 2017286。
【技术特征摘要】
1.一种分离的植物乳杆菌，其特征在于，所述的植物乳杆菌为植物乳杆菌（Lactobacillusplantarum）ZN-3，保藏编号为CCTCCNO：M2017286。2.权利要求1所述的植物乳杆菌在制备动物饲料添加剂中的应用。3.权利要求1所述的植物乳杆菌在制备调节畜禽肠道疾病的调节剂中的应用。4.权利要求1所述的植物乳杆菌在制备动物抗生素替代剂中的应用。5.权利要求1...
【专利技术属性】
技术研发人员：金梅林，杨丽，康超，滑亚锋，王杨波，马海军，
申请(专利权)人：武汉科缘生物发展有限责任公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42
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