用于急性髓系白血病精准诊疗的检测试剂盒及TSEN34临床应用制造技术

本发明专利技术公开了一种患者预后风险标记物及其应用，该标记物可用于诊断、检测及临床预后评估来自血液系统恶性肿瘤、白血病、特别是急性髓系白血病，本发明专利技术还公开了该标记物的检测物，以及用于诊断、检测及临床预后评估来自血液系统恶性肿瘤、白血病、特别是急性髓系白血病的方法、试剂盒及其应用。本发明专利技术通过计算机算法及生物学实验验证，TSEN34基因是血液系统恶性肿瘤、白血病，特别是急性髓系白血病的独立危险因素，可以用于单独或与其他标记物一起在分层诊断和预后评估中发挥重大作用，也可为临床治疗提供决策支持，为选择或确定治疗方案提供依据。

Detection kit for accurate diagnosis and treatment of acute myeloid leukemia and clinical application of TSEN34

The invention discloses a prognostic risk marker and its application, this marker can be used for diagnosis, detection and clinical prognosis from blood system malignant tumor, leukemia, especially acute myeloid leukemia, the detection of the present invention also discloses the markers, as well as for diagnosis, detection and prognostic evaluation of blood from malignant tumor and leukemia, especially acute myeloid leukemia, kit and application thereof. The present invention by computer algorithms and biological experiments, TSEN34 gene is a malignant hematologic disease, leukemia, especially the independent risk factors of acute myeloid leukemia, can be used alone or with other markers in diagnosis and prognosis evaluation of hierarchical play a major role, but also can provide decision support for clinical treatment, provide the basis for selection or to determine the treatment plan.

【技术实现步骤摘要】
用于急性髓系白血病精准诊疗的检测试剂盒及TSEN34临床应用
本专利技术属于生物
，涉及血液系统白血病、急性髓系白血病基因的检测、急性髓系白血病危险度分层或临床预后评估，特别是涉及成人急性髓系白血病基因的检测、基因芯片和试剂盒。
技术介绍
白血病也称作血癌，是常见的全球性恶性疾病，起源于髓系或淋巴系造血祖细胞的一组遗传异质性疾病，主要表现为丧失正常功能的白血病细胞的异常分化与增生，根据白血病细胞的成熟程度和自然病程可分为急性白血病(acuteleukemia,AL)和慢性白血病(chronicleukemia,CL)两大类。急性白血病分为急性髓系白血病(acutemyeloidleukemia,AML)和急性淋巴系白血病(acutemyeloidleukemia,ALL)。急性髓系白血病是一种异质性极强的恶性血液病，占成人急性白血病的80％左右，它包括许多具有不同遗传异常状况和临床特征的实体，主要特征为骨髓与外周血中原始和幼稚髓性细胞异常增生。在美国国立综合癌症网络(NationalComprehensiveCancerNetwork，NCCN)危险度分层指南中，约有一半以上的急性髓系白血病被分在中危组(包括全部的正常核型急性髓系白血病CytogeneticallyNormalAML,正常核型急性髓系白血病)。美国食品与药品监督管理局(FDA)已经将生物标志定义为分子特征，它被客观测量和评价并且指示正常生物过程、致病过程或对治疗干预的药理学响应。这样的生物标志可以由肿瘤自身或身体对正常细胞转化成癌症的恶性压力作出响应而产生。根据美国国立癌症研究所(NCI)，生物标志可以用于癌症筛查、风险度评估、疾病的早期诊断、监测、预后评价、作出治疗决定和预测对疗法的响应。现有技术中缺乏用于危险度分层和临床预后评估的有效标志物，所以，目前临床上AML的分层诊断及个体化治疗非常困难，亟待找到有效的预后标志物来确定此类患者治疗的强度，以实现精准的个体化治疗。虽然，现有技术中公开了急性髓系白血病的一些致病相关的基因突变，这些基因突变可能作为患者危险度分层和临床预后评估的标志物，但仍需通过大量的计算机算法及生物学实验才能验证。现有技术WHITMANSP,MAHARRYK,RADMACHERMD,etal.FLT3internaltandemduplicationassociateswithadverseoutcomeandgene-andmicroRNA-expressionsignaturesinpatients60yearsofageorolderwithprimarycytogeneticallynormalacutemyeloidleukemia:aCancerandLeukemiaGroupBstudy[J].Blood,2010,116(18):3622-6中将携带FLT3-ITD基因的正常核型急性髓系白血病患者定义为高危组；现有技术DOHNERK,SCHLENKRF,HABDANKM,etal.Mutantnucleophosmin(NPM1)predictsfavorableprognosisinyoungeradultswithacutemyeloidleukemiaandnormalcytogenetics:interactionwithothergenemutation[J].Blood,2005,106(12):3740-6将携带NPM1基因突变的患者定义为相对较低的危险度和较好预后；现有技术PASTOREF,KLINGD,HOSTERE,etal.Long-termfollow-upofcytogeneticallynormalCEBPA-mutatedAML[J].Journalofhematology&oncology,2014,7.将携带CEBPA基因双突变的患者定义为相对较低的危险度和较好预后；现有技术CN104508143A公开了用于诊断、预测、治疗和处理急性髓系白血病的方法，该方法分析从所述患者分离的遗传样品中是否存在细胞遗传学异常，以及在基因FLT3、NPMI、DNMT3A、NRAS、CEBPA、TET2、WTI、IDHI、IDH2、KIT、RUNXI、MLL-PTD、ASXLI、PHF6、KRAS、PTEN、P53、HRAS和EZH2中的至少一者中是否存在突变，以此来预测患有急性髓系白血病患者的生存率。为了实现精准化医疗的目的，临床医学上亟待找到有效的急性髓系白血病患者预后标志物来对患者进行精准的治疗，而这些标志物的发现和验证将为更加有效的治疗急性髓系白血病及预后评估提供帮助。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种敏感性高，通用性好，特异性强的标志物，来检测成人(<60岁)急性髓系白血病细胞或组织样品，来辅助判断成人AML患者的危险度分层或异基因造血干细胞移植前评估或临床预后评估，是基于以下的考虑：(1)基因突变不能覆盖所有的AML，而基因表达可以覆盖所有的AML患者；(2)AML发生、发展的分子机理目前仍不清楚，寻求新的临床预后标志物有助于理解AML的发病机理，并且能为AML的精准靶向治疗奠定基础。本专利技术人发现TSEN34基因高表达的AML患者具有较高的危险度分层和较差的临床预后，TSEN34基因低表达的AML患者具有较低的危险度分层和较好的临床预后。因此，本专利技术提供TSEN34基因作为标志物，用来诊断成人急性髓系白血病患病与否或患病风险度或检测成人急性髓系白血病危险度分层或成人急性髓系白血病异基因造血干细胞移植前评估或成人急性髓系白血病预后评估，其敏感性高，通用性好，特异性强，因此能用来制备用于诊断成人急性髓系白血病患病与否或成人急性髓系白血病危险度分层或异基因造血干细胞移植前评估或临床预后评估的基因芯片或试剂盒，帮助诊断是否患有成人急性髓系白血病或成人急性髓系白血病患者的危险度分层或异基因造血干细胞移植前评估或临床预后评估。在本专利技术中“成人”指年龄小于60岁的成人。一方面，本专利技术提供一种用于诊断成人急性髓系白血病患病与否或患病风险度或检测成人急性髓系白血病危险度分层或成人急性髓系白血病异基因造血干细胞移植前评估或成人急性髓系白血病预后评估或为临床治疗提供决策支持的试剂盒。进一步的，所述试剂盒中包含TSEN34基因的检测物。更进一步的，所述的TSEN34基因的检测物为TSEN34基因的引物对和/或探针，所述的引物对和/或探针的序列为以下任一项所示：(1)SEQIDNO：2和SEQIDNO：3；(2)SEQIDNO：4和SEQIDNO：5；(3)SEQIDNO：6和SEQIDNO：7；(4)SEQIDNO：8和SEQIDNO：9；(5)SEQIDNO：10或其互补序列；(6)序列为SEQIDNO：11或其互补序列；(7)序列为SEQIDNO：12或其互补序列。本专利技术所提供的试剂盒还包括实现如下功能的模块：(1)在成人急性髓系白血病患者的样本组中检测TSEN34基因的表达量，取样本组表达量中位值，将患者分为TSEN34基因低表达组和TSEN34基因高表达组；(2)将TSEN34基因低表达组定义为急性髓系白血病预后低风险组，将TSEN34基因高表达组定义为急性本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于诊断成人急性髓系白血病患病与否或患病风险度或检测成人急性髓系白血病危险度分层或成人急性髓系白血病异基因造血干细胞移植前评估或成人急性髓系白血病预后评估或为临床治疗提供决策支持的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包含TSEN34基因的检测物；优选的，所述试剂盒中包含TSEN34基因表达量多少的检测物。

【技术特征摘要】
1.一种用于诊断成人急性髓系白血病患病与否或患病风险度或检测成人急性髓系白血病危险度分层或成人急性髓系白血病异基因造血干细胞移植前评估或成人急性髓系白血病预后评估或为临床治疗提供决策支持的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包含TSEN34基因的检测物；优选的，所述试剂盒中包含TSEN34基因表达量多少的检测物。2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的TSEN34基因的检测物为TSEN34基因的引物对和/或探针，其序列为以下任一项所示：(1)SEQIDNO：2和SEQIDNO：3；(2)SEQIDNO：4和SEQIDNO：5；(3)SEQIDNO：6和SEQIDNO：7；(4)SEQIDNO：8和SEQIDNO：9；(5)SEQIDNO：10或其互补序列；(6)SEQIDNO：11或其互补序列；(7)SEQIDNO：12或其互补序列。3.如权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括实现如下功能的模块：(1)在成人急性髓系白血病患者的样本组中检测TSEN34基因的表达量，取样本组表达量中位值，将患者分为TSEN34基因低表达组和TSEN34基因高表达组；(2)将TSEN34基因低表达组定义为急性髓系白血病预后低风险组，将TSEN34基因高表达组定义为急性髓系白血病预后中高风险组。4.一种用于诊断成人急性髓系白血病患病与否或患病风险度或检测成人急性髓系白血病危险度分层或成人急性髓系白血病异基因造血干细胞移植前评估或成人急性髓系白血病预后评估或为临床治疗提供决策支持的芯片，其特征在于，所述芯片固定有TSEN34基因的检测物；优选的，所述芯片固定有TSEN34基因表达量多少的检测物。5.如权利要求4所述的芯片，其特征在于，所述的TSEN34基因的检测物为TSEN34基因的引物对和/或探针，其序列为以下任一项所示：(1)SEQIDNO：2和SEQIDNO：3；(2)SEQIDNO：4和SEQIDNO：5；(3)SEQIDNO：6和SEQIDNO：7；(4)SEQIDNO：8和SEQIDNO：9；(5)SEQIDNO：10或其互补序列；(6)SEQIDNO：11或其互补序列；(7)SEQIDNO：12或其互补序列。6.如权利要求4或5所述的芯片，其特征在于，所述芯片还包括实现如下功能的模块：(1...

【专利技术属性】
技术研发人员：石金龙，付林，王卫东，付华平，
申请(专利权)人：中国人民解放军总医院，
类型：发明
国别省市：北京,11