本发明专利技术公开一种ORP4L在制备治疗急性髓性白血病产品中的应用。本发明专利技术从ORP4L基因在白血病干细胞中的特异表达出发，发现白血病干细胞特殊的能量维持机制，即氧化磷酸化依赖于ORP4L基因的存在。本发明专利技术提供了ORP4L基因的新用途，即作为选择性杀灭白血病干细胞的靶点应用于急性髓性白血病新产品开发和治疗中的应用。筛选新的ORP4L的抑制剂，通过阻断LSC的能量供应，在治疗白血病中具有较大的实际意义和广阔的应用前景。本发明专利技术的小干扰RNA对ORP4L基因表达具有显著的抑制作用，通过沉默ORP4L基因，可抑制LSC的能量产生和细胞的生存能力，表明ORP4L基因可作为治疗白血病及抗白血病药物的新靶点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及氧化固醇结合蛋白相关蛋白4L(0xsterol binding protein-related protein 4L，0RP4L)的新用途，特别是涉及以0RP4L作为靶点在制备治疗急性髓性白血病 产品中的应用。
技术介绍
白血病是一类起源于造血干细胞的克隆性恶性疾病 (Mandavilli, A, Nature, 2013)，据统计，目前全球每年大约有35万人死于白血病。因此， 白血病已成为目前威胁人类健康的主要恶性肿瘤。白血病干细胞（leukemia stem cells， LSC)是白血病患者体内存在一群极微量的细胞群，约占所有白血病细胞的0. 1%~1%。 LSC最早发现于急性髓性白血病（AML)并已得到广泛的认可（Bonnet, D.，et al. Nature medicine, 1997)。无论在长期的细胞培养中还是动物模型体内，LSC均可引起并维持白 血病（Bonnet，D.，et al.Nature medicine, 1997);同时，与白血病细胞不同，95%以上的 LSC处于G0期的"休眠"状态（Guzman, M. L.，et al. Blood, 2001)，这些细胞对传统的细胞 周期性化疗药物不敏感，留存的LSC通过自我复制（Renewal)使白血病患者的复发率升高 (Ravandi，F.，et al.Clin Cancer Res，2006)。因此，寻找LSC独特的自我保护机制，革巴向 杀灭LSC是彻底治愈白血病的重要途径。 (1) LSC通过氧化磷酸化获取能量 肿瘤细胞需要大量的能量供应来满足快速增殖的需求（Moreno-Sanchez, R.，et al. The FEBS journal，2007)。哺乳动物细胞的能量供应主要源于线粒体的氧化磷酸化。 肿瘤细胞通过基因重新编程，具有独特地代谢方式，即使在血氧充足条件下，实体肿瘤细 胞也主要通过有氧糖酵解获得所需能量，这就是著名的"Warburg effect"（Warburg, 0. Science，1956)。然而，与大多数肿瘤细胞不同，最新研究发现LSC仅仅依赖线粒体氧 化磷酸化获取细胞所需的所有能量，靶向抑制LSC线粒体的能量供应能有效地杀灭 LSC(Lagadinou，E.D.，et al. Cell stem cell, 2013)。结果提供了人们理解 LSC 能量代谢 和平衡的重要途径。因此，寻找独特地调控LSC氧化磷酸化代谢的关键分子，通过阻断LSC 细胞的能量供应是目前靶向杀灭LSC细胞、治疗白血病的新的有效途径。然而，调节并控制 LSC氧化磷酸化、维持其正常能量供应的蛋白分子还需要进一步研究发掘。 (2) 0RP4L选择性高表达于LSC，并控制LSC细胞氧化磷酸化 氧化固醇结合蛋白相关蛋白（Oxsterol binding protein-related proteins， ORPs)是一类能够结合氧化固醇的蛋白家族，在哺乳动物有12个成员。0RP4L是ORPs 蛋白家族中的一员，研究发现，生理情况下，其高选择地仅仅表达在脑、睾丸和心脏 组织。但是，相对于正常淋巴细胞的阴性表达，0RP4L在白血病患者外周血淋巴细胞 中高表达(Fournier, M. V. , et al. Cancer research, 1999 ；Henriques Silva, N. , et al. International journal of molecular medicine, 2003)，并被认为是肿瘤转移和较差 愈后的潜在标志（Fournier, M. V.，et al. Cancer research, 1999)。哈佛大学 Shair 等的 研究工作发现，0RP4L作为0SW-1的靶点介导其对肿瘤细胞的细胞毒性（Burgett，A. W.，et al. Nature chemical biology, 2011)。然而，0RP4L在肿瘤细胞，特别是白血病细胞中的功 能至今未知，0SW-1如何通过靶向0RP4L杀灭肿瘤细胞的药理机制也有待更深入的研究。
技术实现思路
为了克服现有技术的缺点与不足，本专利技术的首要目的在于提供一种以0RP4L作为 靶点在开发和制备治疗急性髓性白血病产品中的应用。该产品用于抑制或杀灭白血病干细 胞来达到治疗急性髓性白血病的目的。 尽管LSC在白血病病理过程中的作用已经确定，LSC独特的能量供应方式，即氧化 磷酸化也已经被证实。但至今为止还没有通过阻断LSC能量供应，从而达到杀灭LSC的产 品。本专利技术的目的是提供0RP4L基因的新用途，即以0RP4L为靶点，通过抑制0RP4L基因的 功能，阻断LSC细胞的能量供应途径，开发杀灭LSC细胞、治疗白血病的产品中的应用。 本专利技术的另一个目的在于提供以0RP4L作为靶点进行筛选特异抑制0RP4L蛋白功 能的化合物小分子。该化合物小分子用于抑制或杀灭白血病干细胞来达到治疗急性髓性白 血病的目的。 本专利技术的另一个目的在于提供以0RP4L作为靶点对天然抗肿瘤化合物0SW-1进行 改构。该0SW-1或改构的0SW-1用于抑制或杀灭白血病干细胞来达到治疗急性髓性白血病 的目的。 本专利技术的另一目的在于提供抑制0RP4L基因表达的小干扰RNA。 本专利技术的目的通过下述技术方案实现： 本专利技术提供一种以0RP4L作为靶点在开发和制备治疗急性髓性白血病产品中的 应用。 0RP4L作为抑制或灭杀白血病干细胞的蛋白靶点，以0RP4L为靶点可以进行包括 特异抑制0RP4L蛋白功能的化合物小分子和基因药物的筛选并应用于治疗急性髓性白血 病。 -种用于治疗急性髓性白血病产品，含有能够抑制LSC中0RP4L基因的组分。 所述的组分包括特异抑制0RP4L蛋白功能的化合物小分子或基因药物； 所述的特异抑制0RP4L蛋白功能的化合物小分子通过化合物库筛选获得； 所述的化合物库包括多样性化合物库、靶点化合物库、已知活性化合物库、已经上 市药物库、天然产物化合物库、片段库/Fragment库、Building block和热点库等。 所述的特异抑制0RP4L蛋白功能的化合物小分子更优选为0SW-1或以0RP4L为靶 点进行改构的0SW-1等。 天然抗肿瘤化合物0SW-1在细胞内的作用靶点是0RP4L和0SBP(氧化固醇结合 蛋白）已经被证实，但至今为止还没有关于0SW-1的药理机制，即0SW-1如何通过作用于 0RP4L蛋白发挥抗肿瘤活性的研究。我们首次发现0SW-1通过抑制0RP4L的功能，阻断白血 病干细胞的能量供应发挥杀灭白血病细胞。0SW-1在杀灭肿瘤细胞的同时对正常细胞也有 毒性，降低对正常细胞的毒性是发展并使0SW-1走向临床用药的关键。本专利技术提供了 0SW-1 改构的新思路：即以0RP4L的蛋白结构为基础，通过优化0SW-1的化学结构，使其特异结合 0RP4L而不结合0SBP。通过同源建模获得0RP4L的三维结构，分析保持0SW-1活性所必须 的药效基团，找出可以通过修饰达到更高活性的结构基团，结合0RP4L与0SW-1的形状与性 质的匹配性对0SW-1分子进行结构改造和修饰也属于本专利技术的保护范围。 所述的基因药物优选为小干扰RNA(本文档来自技高网...
【技术保护点】
以ORP4L作为靶点在开发和制备治疗急性髓性白血病产品中的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：闫道广，钟文彬，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：广东;44
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