一种促进蛋白多肽药物口服吸收的酵母细胞壁微粒制剂制造技术

本发明专利技术属药物制剂领域，具体涉及一种促进蛋白多肽药物口服吸收的酵母细胞壁微粒制剂。本发明专利技术将蛋白质或多肽药物包载于酵母细胞壁微粒中，并通过内部凝胶化进一步增加蛋白质或多肽药物在胃肠道中的稳定性，确保其在胃肠道中不会被快速泄露而降解。本发明专利技术的酵母细胞壁微粒可以特异性的靶向肠道中派尔氏结的M细胞，通过M细胞转运进入淋巴循环提高蛋白多肽药物的口服生物利用度，经动物实验结果表明，所述的酵母细胞壁微粒制剂能显著提高胰岛素的口服生物利用度，在蛋白质或多肽口服领域具有较明显的应用前景。

Yeast cell wall microparticle preparation for promoting oral absorption of protein polypeptide medicine

The invention belongs to the field of pharmaceutical preparation, in particular to a yeast cell wall granule preparation for promoting the absorption of protein polypeptide medicine orally. In the invention, protein or polypeptide drugs encapsulated in the yeast cell wall particles, and through internal gelation further increase the stability of protein or polypeptide drugs in the gastrointestinal tract in the gastrointestinal tract, to ensure its rapid degradation will not be leaked. Yeast cell wall particles of the invention can be specifically targeted in the gut payr's node M cells, M cells through transport into lymph circulation to improve oral bioavailability of protein and peptide drug availability, the animal experiments show that yeast cell wall particle preparation can significantly improve the oral bioavailability of insulin, with application the prospect of more obvious in the field of oral protein or polypeptide.

【技术实现步骤摘要】
一种促进蛋白多肽药物口服吸收的酵母细胞壁微粒制剂
本专利技术属药物制剂领域，具体涉及一种能促进蛋白质或多肽口服吸收的酵母细胞壁微粒制剂及其制备方法。
技术介绍
近年来，越来越多的蛋白质多肽药物进入临床实验或临床治疗阶段，其主要给药方式为注射途径，但实践显示，由于大多数蛋白质和多肽药物体内生物半衰期短，需要频繁给药，病人顺应性极差；所以开发非注射途径的蛋白质多肽制剂成为目前药剂学领域研究的热点，也是有关领域需要重点突破的课题。临床实践表明，口服给药是最方便也最为安全的临床用药途径，但是蛋白质和多肽药物存在以下几个问题，导致口服生物利用度很低，无法起到较好的治疗效果：1.胃液中不稳定，易被胃蛋白酶快速降解；2.可受肠道内的蛋白酶的降解；3.蛋白质和多肽药物亲水性强，细胞膜通透性差；4.蛋白质分子量大，是导致膜通透性差的一个原因。目前提高蛋白质多肽药物口服吸收的研究已非常广泛，主要包括以下几种方法：1.采用渗透促进和蛋白酶抑制剂可在一定程度上提高其生物利用度，但是由于其存在较为严重的毒性，其发展前景尚不可预知；2.采用转铁蛋白(Tf)、细胞穿膜肽TAT等修饰提高细胞的通透性；3.采用微粒给药系统提高胰岛素的口服生物利用度是目前研究最为热门的方面，微粒给药系统可以在一定程度上保护药物免受酶的降解，同时可以提高药物跨膜的能力，目前主要的有纳米粒、脂质体、微乳以及复乳等；但是目前的微粒给药系统仍然不能显著的提高其生物利用度，主要原因在于粒子无法大量跨过肠细胞膜而转运药物。研究显示，肠道内存在一种特殊的结构-派尔氏结(Peyer’sPatch)，派尔氏结可以吞噬较大的颗粒，并将其运送至淋巴循环，从而进入体循环而发挥药物疗效；而酵母细胞壁颗粒中富含β-葡聚糖，可特异性的靶向于M细胞，从而增加其转运效果。本申请的专利技术人基于上述现有技术的依据，以及酵母细胞壁价廉易得，可直接使用面包酵母制得，且具有较好的安全性，适合作为药物给药系统的材料的优势，拟提供一种促进蛋白多肽药物口服吸收的酵母细胞壁微粒制剂，借助酵母细胞壁具有较大的空腔，和具有很高的载药量的特点，通过增加M细胞的靶向作用增加体内的生物利用度。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对现有技术的缺陷，提供一种促进蛋白多肽药物口服吸收的酵母细胞壁微粒制剂，通过酵母细胞壁颗粒载蛋白质或多肽提高其口服生物利用度。本专利技术制剂生物利用度且效果可维持较长的时间，使用方便，重现性好。基于现有技术中，由于蛋白质多肽药物在胃肠道中不稳定，易受到胃肠道中各种蛋白酶的降解作用，且跨膜能力很差，导致生物利用度极低，酵母细胞壁颗粒可直接靶向于派尔氏结的M细胞，而M细胞具有很强的转运微粒的能力，且药物包裹在酵母细胞壁颗粒中也可避开胃肠道中蛋白酶的破坏，从而可以增加其在胃肠道中的稳定性；但是如果将蛋白质或多肽药物直接包载在酵母细胞壁微粒中，在胃肠道中极易从细胞壁孔道中泄露的缺陷，本专利技术通过对其在酵母细胞壁微粒内部进行凝胶化作用而使蛋白质或多肽药物能保留在内部，从而通过M细胞大量转运酵母细胞壁颗粒，而增加蛋白质多肽进入体循环内的浓度，进而增加蛋白多肽药物的口服生物利用度。本专利技术提供如下技术方案解决现有技术存在的问题：本专利技术的一种促进蛋白质和多肽药物口服吸收的酵母细胞壁微粒制剂，其特征在于，由蛋白质或多肽药物、药物辅料和酵母细胞壁颗粒组成，所述的蛋白质或多肽药物或与辅料共同被包裹于酵母细胞壁中，在一定温度下实现内部凝胶化。本专利技术中，所述的酵母细胞壁颗粒通过面包酵母制得。本专利技术中，所述的辅料选自泊洛沙姆、海藻酸钠或壳聚糖。本专利技术中，所述的泊洛沙姆是泊洛沙姆407或188，或二者的混合物。本专利技术中，所述的泊洛沙姆407的浓度为10-50％，泊洛沙姆188的浓度为10-50％，泊洛沙姆407与188的比例为5:1-4。本专利技术中，所述的海藻酸钠与钙离子或壳聚糖配合使用，其中海藻酸钠与钙离子的比例为1:0.1-5，海藻酸钠与壳聚糖的比例为1:0.1-5。本专利技术中，所述的蛋白质或多肽药物为其水溶液，pH为1.0-8.0，浓度为0.1-10mg/mL。本专利技术中，所述的含蛋白质或多肽药物的酵母细胞壁微粒制剂通过两步法制备，其包括，首先制备蛋白质或多肽的水溶液，然后将酵母细胞壁粉末分散在该溶液中，所述蛋白质或多肽扩散进入酵母细胞壁内部，最后通过调节pH至蛋白质多肽的等电点附近，将其沉淀，离心，洗涤，加入辅料溶液，进行内部凝胶化。所述的制备方法中，当辅料使用海藻酸钠时，需在除掉外相蛋白质或多肽以及辅料后，再加入钙离子或壳聚糖对内部海藻酸钠进行交联；当辅料使用泊洛沙姆时，需在低温下操作使其为溶液态，在除掉外相蛋白质或多肽以及辅料后，升高温度使其内部凝胶化。本专利技术的一个实施例中，首先以胰岛素为模型药物，制备载胰岛素的内部凝胶化酵母细胞壁微粒，并进一步对其进行体内外评价。其中，提供了一种促进胰岛素口服生物利用度的酵母细胞壁微粒，其由胰岛素、辅料和酵母细胞壁颗粒组成，其中活性成分胰岛素被包载于酵母细胞壁内部，所述辅料为可凝胶化的材料；所述的胰岛素的浓度优选为0.1-100mg/mL；所述的酵母细胞壁微粒由面包酵母制得，面包酵母通过酸碱处理，干燥得酵母细胞壁微粒。所述的凝胶化材料包括泊洛沙姆188、407以及海藻酸钠中的一种或几种。本专利技术中，通过下述方法制备所述的载胰岛素酵母细胞壁微粒：称取一定量的酵母细胞壁粉末分散在胰岛素溶液中，涡旋混合均匀，用1M的盐酸调节pH至2，然后在4℃条件下200rpm磁力搅拌2h，用1M的氢氧化钠调节pH至5.6(胰岛素的等电点附近)，使胰岛素大量析出沉淀，使孵育在酵母细胞壁内腔和孔道中的胰岛素沉积在这些腔道内部；重复上述操作3次，通过反复调节pH增加在酵母细胞壁内部沉积的胰岛素的量，提高载药量；然后2000g离心10min，弃上清的胰岛素，加入特定浓度的pH7.0的凝胶化材料溶液，在室温条件下孵育4h；最后2000g离心10min收集沉淀，改变条件实现内部凝胶化，在滤纸上用热水洗去残留的辅料溶液和胰岛素。所述的凝胶化材料选自泊洛沙姆407、188以及海藻酸钠中的一种或几种，其中优选泊洛沙姆407.本专利技术制得的载胰岛素的内部凝胶化的酵母细胞壁微粒(以下简称为P-INS-GMs)，用马尔文测定粒径和电位，用扫描电子显微镜观察其形态如图1所示。本专利技术通过体外稳定性和体内降糖实验的比较，结果表明，本专利技术通过酵母细胞壁微粒包载胰岛素，并对其进行内部凝胶化，提高了胰岛素在胃肠道内的稳定性，并且通过靶向M细胞增加了胰岛素的口服生物利用度。附图说明图1显示了：空白酵母细胞壁微粒(GMs)(A)和它的横切面(B)，胰岛素凝胶化酵母细胞壁微粒(P-INS-GMs)(C)以及横切面(D)的扫描电镜图；空白GMs和P-INS-GMs粒径图(E)。图2.为凝胶化(INS-GMs)和凝胶化(P-INS-GMs)酵母细胞壁微粒在不含酶的SGF(A)和SIF(B)中的释放，其中显示了胰岛素在含酶的SGF(C)和SIF(D)中的降解曲线。图3.为口服给予不同胰岛素制剂在正常大鼠(A)和糖尿病大鼠(B)体内的降血糖曲线(n＝4)，其中显示，正常大鼠和糖尿病大鼠降糖曲线上面积与剂量的相关性(C)。具体实施方式本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种促进蛋白质和多肽药物口服吸收的酵母细胞壁微粒制剂，其特征在于，由蛋白质或多肽药物、药物辅料和酵母细胞壁颗粒组成，所述的蛋白质或多肽药物或与辅料共同被包裹于酵母细胞壁中，在一定温度下实现内部凝胶化。

【技术特征摘要】
1.一种促进蛋白质和多肽药物口服吸收的酵母细胞壁微粒制剂，其特征在于，由蛋白质或多肽药物、药物辅料和酵母细胞壁颗粒组成，所述的蛋白质或多肽药物或与辅料共同被包裹于酵母细胞壁中，在一定温度下实现内部凝胶化。2.按权利要求1所述的促进蛋白质和多肽药物口服吸收的酵母细胞壁微粒制剂，其特征在于，所述的酵母细胞壁颗粒通过面包酵母制得。3.按权利要求1所述的促进蛋白质和多肽药物口服吸收的酵母细胞壁微粒制剂，其特征在于，所述的辅料选自泊洛沙姆、海藻酸钠或壳聚糖。4.按权利要求3所述的促进蛋白质和多肽药物口服吸收的酵母细胞壁微粒制剂，其特征在于，所述的泊洛沙姆是泊洛沙姆407或188，或二者的混合物。5.按权利要求4所述的促进蛋白质和多肽药物口服吸收的酵母细胞壁微粒制剂，其特征在于，所述的泊洛沙姆407的浓度为10-50％，泊洛沙姆188的浓度为10-50％，泊洛沙姆407与188的比例为5:1-4。6.按权利要求3所述的促进蛋白质和多肽药物口服吸收的酵母细胞壁微粒制剂，其特征在于，所述的海藻酸钠与钙离子或壳聚糖配合使用，其中海藻酸钠与钙离子的比例为1:0.1-5，海藻酸钠与...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢允昌，吴伟，戚建平，卢懿，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：上海,31