微型碱基编辑器及其构建方法与应用技术

本发明专利技术涉及基因编辑技术领域，涉及一种微型碱基编辑器及其构建方法与应用。本发明专利技术通过对核酸酶OgeIscB的向导RNA(gRNA)的改造，降低了gRNA的长度并提升了OgeIscB的基因编辑活性。本发明专利技术通过将胞苷脱氨酶及其突变体融合于OgeIscB为代表的突变型核酸酶末端，得到的新融合蛋白能对位于前间隔序列不同位置的胞嘧啶实现有效的C‑T碱基突变，通过将脱氧腺苷脱氨酶及变体融合于OgeIscB为代表的突变型核酸酶末端，得到的新融合蛋白能对位于前间隔序列不同位置的腺嘌呤和/或胞嘧啶实现有效的A‑G和/或C‑T碱基突变。本发明专利技术的碱基编辑器体积更小，且活性窗口多样化，可实现更广范围、更精细且安全性更高的C‑T单碱基替换和A‑G单碱基替换，能有效拓宽单碱基编辑工具的应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因编辑，尤其是涉及一种微型碱基编辑器及其构建方法与应用。

技术介绍

1、crispr/cas9为代表的新型基因编辑技术具有编辑效率高等优势，极大的推动了基因编辑技术的进步。2016年以来，研究者在crispr/cas9、crispr/cas12a(cpf1)的基础上开发出多种dna碱基编辑工具，可在dna水平介导高效精准的点突变，且此过程中不会产生dna双链断裂。目前报道的碱基编辑器主要有两种：胞嘧啶碱基编辑器(cbe，可介导c·g--t·a突变)和腺嘌呤碱基编辑器(abe，可介导a·t--g·c突变)。其中，cbe是将特定的胞嘧啶核苷脱氨酶(cytidine deaminase)与突变型核酸酶(如携带有d10a或突变的spcas9，称为nspcas9；或是功能失活型cas12a，称为dcas12a)以及尿嘧啶糖基化酶抑制因子(ugi)融合，得到的融合蛋白可在sgrna的引导下，介导c·g--t·a突变。abe则是将定向演化后的大肠杆菌来源的腺苷脱氨酶(ectada*)二聚体或单体与突变型核酸酶(如携带有d10a或突变的spcas9，称为n本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种改造的OgeIscB的gRNA，其特征在于，改造的OgeIscB的gRNA选自以下中的一种：

2.一种碱基编辑器，其特征在于，为将胞苷脱氨酶或脱氧腺苷脱氨酶置于突变型核酸酶nOgeIscB的C-末端融合位点形成的融合蛋白OgeBEs；

3.根据权利要求2所述的一种碱基编辑器，其特征在于，所述脱氧腺苷脱氨酶选择为TadA-8e或TadA-8e突变体，所述碱基编辑器为在nOgeIscB的C-末端融合一个或多个TadA-8e或TadA-8e突变体后形成的融合蛋白；

4.根据权利要求2所述的一种碱基编辑器，其特征在于，所述脱氧腺苷脱氨酶选择为TadA*...

【技术特征摘要】

1.一种改造的ogeiscb的grna，其特征在于，改造的ogeiscb的grna选自以下中的一种：

2.一种碱基编辑器，其特征在于，为将胞苷脱氨酶或脱氧腺苷脱氨酶置于突变型核酸酶nogeiscb的c-末端融合位点形成的融合蛋白ogebes；

3.根据权利要求2所述的一种碱基编辑器，其特征在于，所述脱氧腺苷脱氨酶选择为tada-8e或tada-8e突变体，所述碱基编辑器为在nogeiscb的c-末端融合一个或多个tada-8e或tada-8e突变体后形成的融合蛋白；

4.根据权利要求2所述的一种碱基编辑器，其特征在于，所述脱氧腺苷脱氨酶选择为tada*或tada*突变体，所述碱基编辑器选择以下中的一种：

5.根据权利要求2所述的一种碱基编辑器，...

【专利技术属性】
技术研发人员：程田林，张淑倩，张成，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：