取代的卟啉制造技术

总的来说，本发明专利技术涉及调节生理过程和病理过程的方法，具体来说涉及调节细胞的氧化剂水平并因此调节其中这样的氧化剂为参与者之过程的方法。本发明专利技术也涉及适用于这样的方法中的化合物和组合物。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

总的来说，本专利技术涉及调节生理过程和病理过程的方法，具体来说涉及调节细胞的氧化剂水平并因此调节其中这样的氧化剂为参与者之过程的方法。本专利技术也涉及适用于这样的方法中的化合物和组合物。背景氧化剂作为所有细胞的正常代谢部分而被产生，但它们也是许多疾病过程的重要的致病组分。例如，活性氧种类是肺病、心血管系统疾病、胃肠道系统疾病、中枢神经系统疾病和骨骼肌疾病发病的关键性要素。氧自由基也在调节一氧化氮(NO·)的效应方面起作用。在这种环境中，它们对血管疾病、炎症和衰老过程的发病机理起重要作用。为了保持正常细胞和器官的功能，需要关键的针对氧化剂的防御酶的平衡。超氧化物歧化酶(SOD)是金属酶的一个家族，它们催化细胞内和细胞外的O2-转化成H2O2加O2，且是对超氧化物自由基损害作用的第一道防线。哺乳动物产生三种性质不同的超氧化物歧化酶。一种是在所有细胞的细胞溶胶中发现的、含有铜和锌的二聚体酶(CuZn SOD)。第二种是在线粒体中发现的、包含锰的四聚体超氧化物歧化酶(Mn SOD)；而第三种是在细胞外液中发现的、结合到胞外基质上的、糖基化的、含有铜和锌的四聚体酶(EC-SOD)。已知存在于细胞内的几种其它重要的抗氧化剂酶，包括过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶。虽然细胞外液和细胞外基质仅包含少量的这些酶，但也知道了存在其它的细胞外抗氧化剂，包括自由基清除剂和脂质过氧化作用的抑制剂，例如，维生素C、尿酸、以及α-生育酚酚(Halliwell等，Arch.Biochem.Biophys.2801(1990))。本专利技术总的来讲涉及适用于调节超氧化物自由基或其它氧化剂为参与者的细胞内过程和细胞外过程的低分子量卟啉化合物，所述其它氧化剂例如过氧化氢或过氧亚硝酸盐。本专利技术的化合物和方法可应用于在氧化胁迫(stress)起作用的各种各样的生理过程和病理过程。专利技术概述本专利技术涉及调节氧化剂的细胞内水平和细胞外水平的方法；所述氧化剂例如超氧化物自由基、过氧化氢、过氧化亚硝酸盐、脂类过氧化物、羟基自由基和含硫游离基。更详细地，本专利技术涉及用低分子量抗氧化剂来调节与超氧化物自由基、过氧化氢、一氧化氮或过氧化亚硝酸盐有关的正常过程或病理过程的方法，且涉及适合于用于这样的方法中的次甲基(即中位)取代的卟啉。根据下面接着的描述，本专利技术的目的和优点将是清楚的。附图简述附图说明图1A-C显示了本专利技术某些化合物的结构。运用McCord和Fridovich(J.Biol.Chem.2446049(1969))的方法，测定所述SOD的活性值。用Day等(Arch.Biochem.Biophys.347256(1997))的方法，测定过氧化物酶的值。如下得到TBARS值匀浆在5倍体积的pH 7.4的50mM冰冷磷酸钾中，用Polytron(TurraxT25，德国)将冰冻的成年Sprague-Dawley大鼠脑、肝以及小鼠肺(Pel-Freez，Rogers，AR)匀浆。运用牛血清白蛋白作为标准，用Coomassie Plus蛋白分析(Pierce Rockford，IL)测定匀浆蛋白的浓度。用缓冲液调节匀浆的体积，产生10mg/ml的最终蛋白浓度；且在-80℃将其作为等分试样而冷冻。匀浆的氧化在37℃，将含有0.2ml匀浆(0.2mg蛋白)和不同浓度抗氧化剂的微量离心管(1.5ml)保温15分钟。通过添加0.1ml新鲜制备的、包含氯化亚铁(0 25mM)和抗坏血酸盐(1mM)的厌氧贮存溶液，开始大鼠脑匀浆的氧化。将样品放置在37℃振荡水浴中达30分钟(终体积1ml)。通过添加0.1μl溶于乙醇的2，6-二叔丁基对甲酚贮存溶液(60mM)，来终止该反应。脂质过氧化的测定把大鼠脑匀浆中的硫代巴比土酸活性物质(TBARS)的浓度用作脂质过氧化的指标。通过加入10ml 0.01N HCl中的8.2μ1，1，3，3-四甲氧基丙烷，并在室温混合10分钟，获得丙二醛标准。用水进一步稀释这种原液，以产生在0.25μM至25μM范围内变动的标准。在塞住了的1.5ml微量离心管中，用200μl的0.2M磷酸原液来酸化样品或标准(200μl)。通过添加25μl硫代巴比土酸的贮存溶液(0.11M)并将其混合，来起始颜色反应，然后放置于90℃的加热装置中达30分钟。用0.5μl正丁醇，通过涡旋3分钟并在冰上冷冻1分钟，来抽提TBARS。然后，以12,000xg离心该样品3分钟，并将150μl正丁醇相的等分试样放置于一块96孔板的每个孔中；且在25℃，配有一台Thermomax平板读出器(MolecularDevices，Sunnydale，CA)于535nm进行读数。用根据MDA标准曲线的外推法，将样品的吸光度变换成MDA相当量(μM)。抗氧化剂之中没有一种在用于这些研究的浓度下影响MDA标准品与反应硫代巴比土酸。统计分析将数据以其平均值±SE的形式表示。通过使具有不同斜率的S形曲线与所述数据拟合，来测定将脂质过氧化程度减少50％的抗氧化剂的抑制浓度(IC50)以及相应的95％的置信区间(CI)(Prim，GraphPad，SanDiego，CA)。(也参见Braughler等，J.Biol.Chem.26210438(1987)；Kikugawa等，Anal.Biochem.202249(1992).)图2显示了得自与用Aeol-V治疗支气管肺发育不良有关的研究的数据。专利技术详述本专利技术涉及防止氧化剂有害效应的方法，尤其是涉及防止氧化剂超氧化物自由基、过氧化氢和过氧亚硝酸盐的有害效应的方法，并且涉及预防与治疗与氧化剂胁迫有关的、或由氧化剂胁迫引起的疾病和障碍的方法。本专利技术也涉及调节与氧化剂有关的生物学过程的方法，所述氧化剂包括超氧化物自由基、过氧化氢、一氧化氮和过氧亚硝酸盐。此外，本专利技术涉及适用于这样的方法中的化合物和组合物，包括低分子量抗氧化剂(例如活性氧种类清除剂包括超氧化物歧化酶、过氧化氢酶以及过氧化物酶的模拟物(mimetics))及其制剂。适合于供本专利技术方法之用的活性氧种类清除剂的模拟物(mimetics)包括次甲基(即中位)取代的卟吩、或其药学上可接受的盐(例如氯化物或溴化物的盐)。本专利技术既包括不含金属的卟吩，又包括结合金属的卟吩。就结合金属的卟吩来说，优选次甲基(中位)取代卟吩的锰衍生物，但是也可以用非锰的金属，例如铁(II或III)、铜(I或II)、钴(II或III)、或者镍(I或II)。人们会意识到所选择的金属可以有不同的价态，例如，可以用II价、III价或V价的锰。同样，可以用锌(II)，尽管它不经历化合价的变化且因此将不直接清除超氧化物。所述金属的选择可影响所清除的氧种类的选择性。例如，可用结合铁的卟吩来清除NO·，而结合锰的卟吩则对NO·的清除不太好。本专利技术的模拟物为式I的化合物或其药学上可接受的盐， 其中R1和R3是相同的基团且为-H，-CF3，-CO2-X 或 R2和R4是相同的基团且为 或 Y为卤或-CO2X，每个X相同或不同，并且为烷基；且每个R5相同或不同(最好相同)，并且为H或烷基。最好是R1和R3为相同的基团且为-H，CF3，-CO2-X， 或 R2和R4是相同的基团且为 或 Y为-F或-CO2X，每个X相同或不同，并且本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种下式的化合物或其药学上可接受的盐， ＊＊＊ 其中： Ｒ↓［１］和Ｒ↓［３］是相同的基团且为： －Ｈ，－ＣＦ↓［３］，－ＣＯ↓［２］－Ｘ，＊＊＊ Ｒ↓［２］和Ｒ↓［４］是相同的基团且为： ＊＊＊ Ｙ为卤或－ＣＯ↓［２］Ｘ，且 Ｘ相同或不同，并且为烷基；且每个Ｒ↓［５］相同或不同，并且为Ｈ或烷基； 其中，如果Ｒ↓［１］和Ｒ↓［３］为－Ｈ，则Ｒ↓［２］和Ｒ↓［４］不是＊，或者 如果Ｒ↓［１］和Ｒ↓［３］为－Ｈ，且Ｒ↓［２］和Ｒ↓［４］为＊，则使所述化合物与一种选自锰、铁、铜、钴或镍的金属络合。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：JD克拉波，BJ戴，MP特罗瓦，PJF戈安，DB基钦，I弗里多维奇，I贝丁尼哈伯利，
申请(专利权)人：国家犹太医疗及研究中心，埃俄罗斯药品公司，杜克大学，
类型：发明
国别省市：US[美国]