抗牙龈卟啉单胞菌卵黄免疫球蛋白疫苗的制备方法技术

本发明专利技术涉及抗牙龈卟啉单胞菌卵黄免疫球蛋白疫苗的制备方法。其包括以下操作步骤：（１）用牙龈卟啉单胞菌国际标准菌株培养分离取得牙龈卟啉单胞菌；（２）获取牙龈卟啉单胞菌菌体蛋白；（３）以牙龈卟啉单胞菌全菌可溶性蛋白抗原与福氏不完全佐剂混匀成静脉注射剂，对产蛋母鸡鸡翅下静脉注射，收集所产鸡蛋；（４）提取鸡蛋中的抗牙龈卟啉单胞菌卵黄免疫球蛋白。本发明专利技术生产成本低，产出率高，一个鸡蛋可以获得１００毫克的卵黄免疫球蛋白；该方法操作简便快捷，并具有耐热、耐酸、稳定性好等优点。在温度不高于７５℃和在ｐＨ４以上的酸性环境中，仍能很好地保持其生物学活性，常温下可以储存３个月左右，４℃可以保存６－１２个月而抗体活性不下降。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
抗牙龈卟啉单胞菌卵黄免疫球蛋白疫苗的制备方法，其特征在于包括以下操作步骤：（１）牙龈卟啉单胞菌的培养和鉴定用牙龈卟啉单胞菌国际标准菌株培养分离取得牙龈卟啉单胞菌备用；（２）获取牙龈卟啉单胞菌菌体蛋白将分离出的牙龈卟啉单胞菌在牛脑心浸液（ＢＨＩ）羊血液体培养基中３７℃，８０％氮气（Ｎ↓［２］）、１０％二氧化碳（ＣＯ↓［２］）、１０％氢气（Ｈ２）增菌厌氧培养４８ｈ，收集细菌，超声震碎至９０％细胞完全破碎，４０００ｒ／ｍｉｎ×１０ｍｉｎ离心，收集上清液，即为牙龈卟啉单胞菌全菌可溶性蛋白抗原，温度４℃保存备用；（３）蛋鸡免疫选５个月龄的未免疫的健康罗曼产蛋母鸡，隔离饲养；以１ｍｇ／ｍｌ牙龈卟啉单胞菌全菌可溶性蛋白抗原１ｍｌ与福氏不完全佐剂１ｍｌ吹打混匀成油包水状静脉注射剂，对上述产蛋母鸡鸡翅下静脉注射，每只鸡注射量为０．５ｍｇ；每周注射免疫一次，共注射免疫４次；同时，收集每天产下的鸡蛋，温度４℃保存；（４）提纯抗牙龈卟啉单胞菌卵黄免疫球蛋白（抗Ｐｇ－ＩｇＹ）用卵黄免疫球蛋白纯化系统试剂盒（ＥＧＧｓｔｒａｃｔ↑［ＴＭ］ＩｇＹＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎＳｙｓｔｅｍ，Ｐｒｏｍｅｇａ公司，美国）提纯每天产下鸡蛋的卵黄免疫球蛋白，所述试剂盒包括试剂盒Ａ液和试剂盒Ｂ液，具体操作如下：ａ、将蛋黄和蛋清分开，收集蛋黄，缓慢加入蛋黄３倍体积的试剂盒Ａ液，搅拌５ｍｉｎ，冷冻离心机４℃条件下离心１００００ｒ／ｍｉｎ×１５ｍｉｎ，收集上清液；ｂ、在上清液的中加入１／３体积的试剂盒Ｂ液，搅拌５ｍｉｎ，冷冻离心机４℃条件下离心１００００ｒ／ｍｉｎ×１５ｍｉｎ，弃上清液，用无菌ＰＨ值７．２的磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）重悬沉淀处理，取得沉淀物；ｃ、在沉淀物中加入１／３体积的试剂盒Ｂ液，搅拌５ｍｉｎ，冷冻离心机４℃条件下离心１００００ｒ／ｍｉｎ×１５ｍｉｎ，弃上清，用无菌ＰＨ值７．２的磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）重悬沉淀，获得高纯度的抗牙龈卟啉单胞菌卵黄免疫球蛋白，４℃保存；抗牙龈卟啉单胞菌卵黄免疫球蛋白的相对分子质量约为１８０，所含的２个亚单位即６５～７０的重链和２２～３０的轻链。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：徐燕，沈继龙，姜大川，罗庆礼，
申请(专利权)人：安徽医科大学，
类型：发明
国别省市：34[中国|安徽]