超临界流体技术制备软组织去细胞基质的方法技术

本发明专利技术公开一种软组织去细胞基质的制备方法，涉及临床医学、生物医学与再生医学技术领域，本发明专利技术提供的一种软组织去细胞基质的制备方法，使用超临界流体技术制备天然软组织去细胞基质，其中，天然软组织包括小肠组织，血管组织，肌肉组织，心脏组织，瓣膜组织，肺组织，脾脏组织，肾脏组织，肝脏组织，胃组织，胆囊组织，脂肪组织，软骨组织，气管组织，食道组织，膀胱组织，输尿管组织，输卵管组织或子宫组织。本发明专利技术提供的软组织去细胞基质的制备方法，对软组织基质成分的破坏更小，获得的软组织去细胞基质的免疫原性低，生物相容性好。

【技术实现步骤摘要】
超临界流体技术制备软组织去细胞基质的方法
本专利技术涉及临床医学、生物医学与再生医学
，尤其是涉及一种超临界流体技术制备软组织去细胞基质的方法。
技术介绍
去细胞基质是用适当的方法将组织/器官进行去细胞处理，除去组织中可能引起排斥反应的细胞成分，保持组织/器官的三维结构。与金属、塑料等非动物来源的材料相比，去细胞基质的成分和结构更接近人体组织，生物相容性更优异，这使之成为组织工程修复中应用最为广泛的材料。去细胞的过程就是通过物理方法、化学方法和生物酶等方法除去组织/器官中的细胞，尽量降低其中的细胞成分等免疫原性物质的含量。去细胞方法的有效性取决于多种因素，如细胞类型、组织密度、厚度和脂质含量等。软组织去细胞基质中，含有丰富的胶原蛋白、氨基聚糖等，具有良好的生物相容性和生物力学性能。多种软组织去细胞基质，如真皮去细胞基质、小肠黏膜下层去细胞基质、血管去细胞基质等，在组织工程研究中已经被广泛用于皮肤、血管、腹壁等组织缺损的再生修复，并表现出良好的促进组织再生能力。因此，将软组织中的细胞成分，使之成为不含细胞的软组织去细胞基质，可以用作合适细胞迁移、生长和增殖的生物支架材料。现有的软组织去细胞基质制备工艺多采用蛋白酶和十二烷基硫酸钠(SDS)等溶液除去组织中的细胞，但这些试剂对组织的作用剧烈，对基质成分破坏严重，容易导致组织基质降解。另外，这些试剂不易除去，残留在组织中可能会引起细胞毒性，生物相容性较差。传统的软组织去细胞基质制备工艺容易导致基质成分容易被破坏，而且试剂残留严重，植入组织中可能引起严重的免疫排斥反应。传统的软组织去细胞基质制备工艺可能导致基质降解，力学性能下降。传统的软组织去细胞基质制备工艺需要耗费大量的时间除去组织中的残留细胞和残留的试剂。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种软组织去细胞基质的制备方法，该方法去细胞效率高，对软组织的基质成分的破坏更小，同时使其免疫原性低，生物相容性好。为解决上述技术问题，本专利技术采用如下技术方案：一种软组织去细胞基质的制备方法，该方法包括：使用超临界流体技术制备软组织去细胞基质，所述软组织为天然软组织，所述天然软组织包括小肠组织，血管组织，肌肉组织，心脏组织，瓣膜组织，肺组织，脾脏组织，肾脏组织，肝脏组织，胃组织，胆囊组织，脂肪组织，软骨组织，气管组织，食道组织，膀胱组织，输尿管组织，输卵管组织或子宫组织。优选地，该方法具体包括预处理，消毒，去细胞，漂洗和灭菌步骤。优选地，所述预处理为在4-10℃条件下，除去所述软组织中的杂质组织，洗净待用。优选地，所述消毒为用过氧乙酸溶液、乙醇溶液和新洁尔灭中的一种振荡浸泡或几种混合后振荡浸泡经过预处理的软组织，再用生理盐水或磷酸盐缓冲溶液或去离子水漂洗至pH为中性。优选地，所述过氧乙酸溶液的浓度为0.01-0.1wt％；所述乙醇溶液的浓度为1-10％；所述新洁尔灭的浓度为0.05-1wt％；所述浸泡时间为0.5-24h。优选地，所述去细胞和漂洗均采用超临界CO2流体处理。优选地，所述去细胞步骤的流体处理的条件为：处理的时间为0.5-24h，处理的压强为8-40MPa，处理的温度为33-40℃，处理后的泄压速度为0.1-1MPa/min。优选地，所述去细胞步骤的流体处理过程中加入甲醇、无水乙醇、三氟乙醇和丙酮中的一种或多种极性溶剂作为夹带剂，所述夹带剂体积为所述软组织总体积的1-100倍。优选地，所述漂洗步骤的流体处理的条件为：处理的时间为6-48h，处理的压强为8-40MPa，处理的温度为33-40℃，处理后的泄压速度为0.1-1MPa/min；所述漂洗步骤的流体处理过程中加入浓度为0.5-10wt％的三羟甲基氨基甲烷溶液或无水乙醇作为夹带剂，夹带剂的体积为组织体积的1-100倍。上述方法制备的软组织去细胞基质。本专利技术的有益效果如下：1.超临界CO2扩散系数大，传质速度快，能在短时间内渗透到软组织基质内部，在数分钟或者数小时就能渗透到软组织基质内部，而传统的化学试剂通常需要1天甚至数天才能完全渗透至软组织基质内部，作用于组织中的细胞；2.CO2具有良好的脂质溶解性能，可以溶解细胞中的脂质成分，破坏细胞膜的完整性；3.泄压过程中，压力下降时细胞因胞内外压差较大而急剧膨胀发生破裂，释放细胞内容物，便于后续处理中将细胞内容物更彻底地除去，降低软组织基质中的免疫原性；4.泄压过程中，CO2由超临界状态恢复至气态，快速从软组织基质中逃逸出来，不易残留在组织中，避免化学试剂在软组织基质中残留，减少用于除去基质中化学试剂的漂洗时间，缩短去细胞处理的时间周期；5.超临界CO2流体技术制备的软组织去细胞基质，去细胞效率高，对软组织的基质成分的破坏更小，得到的软组织去细胞基质免疫原性低、生物相容性好。附图说明为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1A为实施例1中制备得到的猪小肠黏膜下层去细胞后放大10倍的组织染色图；图1B为实施例1中制备得到的猪小肠黏膜下层去细胞后放大20倍的组织染色图。具体实施方式下面将结合附图对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。生物衍生材料是指天然生物组织经过特殊处理后形成的一种生物材料。近年来去细胞组织基质(AcellularTissueMatrix)越来越多的被用于生物衍生材料。传统的软组织去细胞基质制备工艺容易导致基质成分容易被破坏，而且试剂残留严重，植入组织中可能引起严重的免疫排斥反应。传统的软组织去细胞基质制备工艺可能导致基质降解，力学性能下降。传统的软组织去细胞基质制备工艺需要耗费大量的时间除去组织中的残留细胞和残留的试剂。而超临界CO2扩散系数大，传质速度快，能在短时间内渗透到软组织基质内部，在数分钟或者数小时就能渗透到软组织基质内部，而传统的化学试剂通常需要1天甚至数天才能完全渗透至软组织基质内部，作用于组织中的细胞；CO2具有良好的脂质溶解性能，可以溶解细胞中的脂质成分，破坏细胞膜的完整性；泄压过程中，压力下降时细胞因胞内外压差较大而急剧膨胀发生破裂，释放细胞内容物，便于后续处理中将细胞内容物更彻底地除去，降低软组织基质中的免疫原性；泄压过程中，CO2由超临界状态恢复至气态，快速从软组织基质中逃逸出来，不会残留在组织中，避免化学试剂在软组织基质中残留，减少用于除去基质中化学试剂的漂洗时间，缩短去细胞处理的时间周期。所以，本专利技术的专利技术人将超临界流体技术用于制备软组织去细胞基质。采用超临界流体技术去软组织细胞基质包括如下步骤：预处理，消毒，去细胞，漂洗和灭菌步骤。在一个优选的实施方式中，预处理为在低温条件下，去除组织中的其他组织成分，洗净待用。在另一个优选的实施方式中，消毒为用过氧乙酸溶液、乙醇溶液、或新洁尔灭浸泡的一种振荡浸泡或几种混合后振荡浸泡经过预处理的软组织，再用水漂洗至pH为中本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种软组织去细胞基质的制备方法，其特征在于，该方法包括：使用超临界流体技术制备软组织去细胞基质，所述软组织为天然软组织，所述天然软组织包括小肠组织，血管组织，肌肉组织，心脏组织，瓣膜组织，肺组织，脾脏组织，肾脏组织，肝脏组织，胃组织，胆囊组织，脂肪组织，软骨组织，气管组织，食道组织，膀胱组织，输尿管组织，输卵管组织或子宫组织。

【技术特征摘要】
1.一种软组织去细胞基质的制备方法，其特征在于，该方法包括：使用超临界流体技术制备软组织去细胞基质，所述软组织为天然软组织，所述天然软组织包括小肠组织，血管组织，肌肉组织，心脏组织，瓣膜组织，肺组织，脾脏组织，肾脏组织，肝脏组织，胃组织，胆囊组织，脂肪组织，软骨组织，气管组织，食道组织，膀胱组织，输尿管组织，输卵管组织或子宫组织。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，该方法具体包括预处理，消毒，去细胞，漂洗和灭菌步骤。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述预处理为在4-10℃条件下，除去所述软组织中的杂质组织，洗净待用。4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述消毒为用过氧乙酸溶液、乙醇溶液和新洁尔灭中的一种振荡浸泡或几种混合后振荡浸泡经过预处理的软组织，再用生理盐水或磷酸盐缓冲溶液或去离子水漂洗至pH为中性。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述过氧乙酸溶液的浓度为0.01-0.1wt％；所述乙醇溶液的浓度为1-10％；所述新洁尔灭的浓度为0.05-1wt％；所...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾晨光，梁丽金，杨习锋，全大萍，
申请(专利权)人：广州新诚生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44