一种抗菌性脱细胞真皮基质敷料的制备方法技术

本发明专利技术属于组织工程的生物材料技术领域，具体涉及一种抗菌性脱细胞真皮基质敷料的制备方法，该制备方法包括以下步骤：选取健康的哺乳动物、剥离动物皮肤、剔除毛发、制备断层皮片、激光制孔、低温冻融、超声波振荡、脱脂处理、脱细胞处理、浸泡水溶性壳聚糖、冷冻干燥、包装和辐照灭菌后得到抗菌性脱细胞真皮基质敷料。本发明专利技术的抗菌性脱细胞真皮基质敷料具有胶原三维完整结构，脱细胞彻底，制作周期短并且具有抗菌功能的特点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物材料
，具体涉及一种抗菌性脱细胞真皮基质敷料的制备方法。
技术介绍
表皮、真皮、皮下组织共同构成了人体的皮肤结构，皮肤作为人体中最重要的器官之一，覆盖在人体表面，具有防御功能、感知功能、免疫功能、吸收功能、调节体温功能、排泄功能和分泌等功能。当人体皮肤受到损伤，特别是皮肤烧伤，烧伤后容易引起机体各种损害，比如免疫系统失调、水分和蛋白质及其他细胞成分过度散失、新陈代谢加剧等，烧伤严重的还会危及生命。因此，伤后必须用创伤敷料将创面覆盖，临时起到皮肤屏障保护作用，并能促进创面愈合，这对大面积烧伤尤其重要。脱细胞真皮基质敷料就是一种可以用于全层皮肤缺损的真皮替代物以及用于烧伤等皮肤损伤创面愈合的医用敷料，它是天然皮肤经过一系列处理去除了表皮和真皮中的细胞成分，但保留了真皮细胞外基质成分和其三维空间结构，这样的结构可以为皮肤再生提供“真皮模板”，诱导移植后宿主细胞成分如成纤维细胞、内皮细胞等在支架结构中分化、生长。但传统方法制得的脱细胞真皮基质（ADM）敷料存在渗透性差、抗菌性能低、生物相容性差等缺点，这严重限制了脱细胞真皮基质敷料在临床上的广泛应用。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术中存在的上述缺点，提出一种制备具有抗菌性的脱细胞真皮基质敷料的制备方法，其特点在于采用健康哺乳动物皮肤为原料，依次经过剔除毛发、制备断层皮片、激光制孔、消毒灭菌、低温冻融、超声波振荡、脱脂处理、脱细胞处理、浸泡水溶性壳聚糖、冷冻干燥、包装和辐照灭菌后得到抗菌性脱细胞真皮基质敷料。具有胶原三维结构完整，脱细胞彻底，制作周期短并且具有抗菌功能的特点。本专利技术所提供的上述一种抗菌性脱细胞真皮基质敷料的制备方法，包括以下步骤：对剥离的哺乳动物皮肤进行剔除毛发的处理；利用取皮器将处理好的动物皮肤制成厚度为0.5mm~1.5mm断层皮片；采用激光打孔技术对断层皮片进行制孔，所得孔均匀分布，其中孔径0.1mm~0.5mm，孔距1.5mm~2.5mm；采用辐照灭菌技术对含孔的真皮基质进行消毒灭菌，其中钴60辐照剂量为25kGy~50kGy，辐照时间为10h~15h；将消毒灭菌后的真皮基质置于-30℃~-50℃的超低温冰箱中预冷冻2~3h，再在-70℃~-80℃的超低温冰箱中预冷冻2~3h后取出，置于37℃水浴中解冻1h，反复2~4次；将冻融处理的真皮基质加入缓冲液中并用超声波进行震荡清洗，其中超声波震荡处理的频次为3~7次，每次30分钟；用质量浓度为0.8%~2.0%NaOH溶液和质量浓度为0.1%~0.6%表面活性剂混合液对清洗后的真皮基质进行脱脂处理；用浓度为0.2%~3.0%TritonX-100对脱脂后的真皮基质进行脱细胞处理；将脱细胞真皮基质浸泡于浓度为0.5mg/ml~2.5mg/ml的水溶性壳聚糖溶液中；将上述浸泡过壳聚糖溶液的脱细胞真皮基质放入冷冻干燥机进行冷冻干燥，成型包装、再经辐照消毒灭菌，即成抗菌性脱细胞真皮基质敷料成品。本专利技术的优点在于：所制得的抗菌性脱细胞真皮基质敷料脱细胞彻底，抗原性低；利用激光制孔技术所获得的均匀分布微孔真皮基质利于脱细胞、脱脂以及浸泡水溶性壳聚糖后续处理；制备过程中未使用固定剂、交联剂等，使得制得的脱细胞真皮基质保留完整的网络空间结构；冷冻干燥过程中采取的梯度预冷冻程序保证得到的脱细胞真皮基质力学性能好且可以很好的维持网络空间结构；脱脂处理使用的是阴离子表面活性剂，可以更好的达到脱去脂肪的目的；在脱细胞真皮基质中复合具有抗菌功能的壳聚糖，不仅增加了脱细胞真皮基质敷料的抗菌性而且可以增强脱细胞真皮基质的止血性能以及促进伤口愈合性能。具体实施方式实施例一剥离健康新生猪皮肤，剔除毛发；用取皮器将处理好的新鲜猪皮制成厚度为0.8mm断层皮片；用激光打孔技术对断层皮片进行制孔，孔径0.3mm，孔距2mm；再用钴60对断层皮片进行辐照消毒灭菌，剂量为30kGy，辐照时间为12h；将消毒灭菌后的真皮基质置于-40℃的超低温冰箱中预冷冻3h，再在-75℃的超低温冰箱中预冷冻3h后取出，置于37℃水浴中解冻1h，反复冻融3次；将冻融处理的真皮基质加入缓冲液中并用超声波进行震荡清洗，其中超声波震荡处理的频次为5次，每次30分钟；再用质量浓度为1.0%NaOH溶液和质量浓度为0.4%十二烷基硫酸铵阴离子表面活性剂混合液对清洗后的真皮基质进行脱脂处理；再用浓度为1.0%TritonX-100对脱脂后的真皮基质进行脱细胞处理；再将脱细胞真皮基质浸泡于浓度为1.5mg/ml的水溶性壳聚糖溶液中；最后将上述浸泡过壳聚糖溶液的脱细胞真皮基质放入冷冻干燥机进行冷冻干燥，成型包装、再经辐照消毒灭菌，即成抗菌性脱细胞真皮基质敷料成品。实施例二剥离健康新生猪皮肤，剔除毛发；用取皮器将处理好的新鲜猪皮制成厚度为0.5mm断层皮片；用激光打孔技术对断层皮片进行制孔，孔径0.1mm，孔距1.5mm；再用钴60对断层皮片进行辐照消毒灭菌，剂量为25kGy，辐照时间为10h；将消毒灭菌后的真皮基质置于-30℃的超低温冰箱中预冷冻2h，再在-70℃的超低温冰箱中预冷冻2h后取出，置于37℃水浴中解冻1h，反复冻融2次；将冻融处理的真皮基质加入缓冲液中并用超声波进行震荡清洗，其中超声波震荡处理的频次为3次，每次30分钟；再用质量浓度为1.0%NaOH溶液和质量浓度为0.1%脂肪醇羟乙基磺酸钠阴离子表面活性剂混合液对清洗后的真皮基质进行脱脂处理；再用浓度为0.2%TritonX-100对脱脂后的真皮基质进行脱细胞处理；再将脱细胞真皮基质浸泡于浓度为0.5mg/ml的水溶性壳聚糖溶液中；最后将上述浸泡过壳聚糖溶液的脱细胞真皮基质放入冷冻干燥机进行冷冻干燥，成型包装、再经辐照消毒灭菌，即成抗菌性脱细胞真皮基质敷料成品。实施例三剥离健康新生猪皮肤，剔除毛发；用取皮器将处理好的新鲜猪皮制成厚度为1.5mm断层皮片；用激光打孔技术对断层皮片进行制孔，孔径0.5mm，孔距2.5mm；再用钴60对断层皮片进行辐照消毒灭菌，剂量为50kGy，辐照时间为15h；将消毒灭菌后的真皮基质置于-50℃的超低温冰箱中预冷冻3h，再在-80℃的超低温冰箱中预冷冻3h后取出，置于37℃水浴中解冻1h，反复冻融4次；将冻融处理的真皮基质加入缓冲液中并用超声波进行震荡清洗，其中超声波震荡处理的频次为7次，每次30分钟；再用质量浓度为2.0%NaOH溶液和质量浓度为0.6%十二烷基磷酸酯阴离子表面活性剂混合液对清洗后的真皮基质进行脱脂处理；再用浓度为3.0%TritonX-100对脱脂后的真皮基质进行脱细胞处理；再将脱细胞真皮基质浸泡于浓度为2.5mg/ml的水溶性壳聚糖溶液中；最后将上述浸泡过壳聚糖溶液的脱细胞真皮基质放入冷冻干燥机进行冷冻干燥，成型包装、再经辐照消毒灭菌，即成抗菌性脱细胞真皮基质敷料成品。对照例一剥离健康新生猪皮肤，剔除毛发；用取皮器将处理好的新鲜猪皮制成厚度为0.8mm断层皮片；用激光打孔技术对断层皮片进行制孔，孔径0.3mm，孔距2mm；再用钴60对断层皮片进行辐照消毒灭菌，剂量为30kGy，辐照时间为12h；将消毒灭菌后的真皮基质置于-75℃的超低温冰箱中预冷冻3h后取出，置于37℃水浴中解冻1h，反复冻融3次；将冻融处理的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗菌性脱细胞真皮基质敷料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：a．对剥离的哺乳动物皮肤进行剔除毛发的处理；b. 利用取皮器将处理好的动物皮肤制成一定厚度的断层皮片；c. 采用激光打孔技术对断层皮片进行制孔，所得孔均匀分布；d. 采用辐照灭菌技术对含孔的真皮基质进行消毒灭菌；e. 将消毒灭菌后的真皮基质置于低温下进行冷融处理；f. 将冻融处理的真皮基质加入缓冲液中并用超声波进行震荡清洗；g. 用碱液和表面活性剂混合液对清洗后的真皮基质进行脱脂处理；h. 用TritonX‑100对脱脂后的真皮基质进行脱细胞处理；i. 将脱细胞真皮基质浸泡于水溶性壳聚糖溶液中；j. 将上述浸泡过壳聚糖溶液的脱细胞真皮基质放入冷冻干燥机进行冷冻干燥，成型包装、再经辐照消毒灭菌，即成抗菌性脱细胞真皮基质敷料成品。

【技术特征摘要】
1.一种抗菌性脱细胞真皮基质敷料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：a．对剥离的哺乳动物皮肤进行剔除毛发的处理；b.利用取皮器将处理好的动物皮肤制成一定厚度的断层皮片；c.采用激光打孔技术对断层皮片进行制孔，所得孔均匀分布；d.采用辐照灭菌技术对含孔的真皮基质进行消毒灭菌；e.将消毒灭菌后的真皮基质置于低温下进行冷融处理；f.将冻融处理的真皮基质加入缓冲液中并用超声波进行震荡清洗；g.用碱液和表面活性剂混合液对清洗后的真皮基质进行脱脂处理；h.用TritonX-100对脱脂后的真皮基质进行脱细胞处理；i.将脱细胞真皮基质浸泡于水溶性壳聚糖溶液中；j.将上述浸泡过壳聚糖溶液的脱细胞真皮基质放入冷冻干燥机进行冷冻干燥，成型包装、再经辐照消毒灭菌，即成抗菌性脱细胞真皮基质敷料成品。2.根据权利要求1所述的抗菌性脱细胞真皮基质敷料的制备方法，其特征在于，步骤b所述的断层皮片包括表皮层和真皮层，并且断层皮片的厚度为0.5mm~1.5mm。3.根据权利要求1所述的抗菌性脱细胞真皮基质敷料的制备方法，其特征在于，步骤c所述激光制得的孔的孔径为0.1mm~0.5mm，孔距为1.5mm~2.5mm。4.根据权利要求1所述的抗菌性脱细胞真皮基质敷料的制备方法，其特征在于，步骤d所述辐照灭菌是钴...

【专利技术属性】
技术研发人员：卢亢，陈锦涛，吴帅，
申请(专利权)人：广东泰宝医疗科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44