一种羊抗人肌红蛋白抗血清的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种羊抗人肌红蛋白抗血清的制备方法，该方法包括以下步骤：抗原准备：选用人肌红蛋白抗原，注射前以弗氏佐剂进行乳化得抗原乳剂；第一次注射后14天进行第二次注射；第二次注射后12天进行第三次注射；第三次注射后10天进行第四次注射；第四次注射后8天进行第五次注射；第五次注射后8天进行第六次注射；第六次注射后8 天进行第七次注射；血清效价检测：注射后8‑10 天采血，分离血清，检测其双扩效价；以上每次免疫注射部位均在动物体上选取24个部位点进行注射。采用本发明专利技术方法，成本低，过程简单，不仅能稳定生产抗体，并且产生抗体速度快，抗体水平高，抗原用量小。使生物科技在动物抗体制备方面规模化生产成为可能。

A preparation method of Sheep anti human serum myoglobin

The invention discloses a preparation method of a Sheep anti human myoglobin antiserum, the method comprises the following steps: preparing the antigen: the human myoglobin antigen with Freund's adjuvant before injection of antigen emulsified emulsion; second injection for 14 days after the first injection; third injection for 12 days after the second injection; fourth injection for 10 days after the third injection; fifth injection for 8 days after the fourth injection; Sixth injection for 8 days after the fifth injection; seventh injection for 8 days after the sixth injection; serum titer detection: 10 days after injection of 8 blood, serum separation, detection of the double diffuser above each titer; immunization sites are in the animal body from 24 sites of injection. The method of the invention has the advantages of low cost and simple process, and can not only stabilize the production of antibody, but also produce the antibody with high speed, high antibody level and small antigen dosage. It is possible to make large-scale production of animal antibody by biotechnology.

【技术实现步骤摘要】
一种羊抗人肌红蛋白抗血清的制备方法
本专利技术属于生物工程领域，具体涉及一种羊抗人肌红蛋白抗血清的制备方法。
技术介绍
肌红蛋白(Myoglobin,Mb)是一种氧结合血红素蛋白，主要分布于心肌和骨骼肌组织。抗血清为含有某一类具有特异免疫功能的抗体分子的血清，一般为动物被人工注射某类抗原后制备的动物血清。一种抗原能否引起抗体生成反应，一方面取决于抗原分子表面有无抗原决定簇（Antigenicdeterminant），另一方面取决于机体的免疫状态，当具备以上两个条件后，抗体生成将遵循抗体生成的一般规律——初次反应和再次反应。抗原的种类繁多，包括天然的蛋白质抗原和细胞性抗原、合成性抗原以及基因工程抗原等，不同的抗原免疫动物具有不同的特殊性。一般完全抗原免疫动物需加用佐剂，尤其在使用可溶性抗原时，以期得到高效价的抗血清；合成性抗原和基因工程抗原等半抗原物质需先通过人工的方法与蛋白质载体连接后再与佐剂混合免疫动物，方可获得理想的免疫效果。使用佐剂后可增加抗原的免疫原性和延长抗原在机体内存留的时间，从而改变了抗原原有的免疫原性。动物免疫系统是动物在种系发生和个体发育过程中逐渐进化和完善起来的，是机体执行免疫功能的组织机构，是产生免疫应答的物质基础。动物免疫系统是由免疫器官、免疫细胞和免疫分子组成的。目前，将人肌红蛋白（MB）抗原与佐剂乳化后，按一定的程序免疫动物，可在动物血清中产生抗人的MB抗体。虽然目前的生产方法都可以产生一定量的抗体，但是抗体产生速度慢，水平较低，且抗原用量高。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种能提高抗体效价的羊抗人肌红蛋白抗血清的制备方法。为达到上述目的，本专利技术是通过以下的技术方案来实现的。一种羊抗人肌红蛋白抗血清的制备方法，该方法包括以下步骤：（1）抗原准备：选用人肌红蛋白抗原，注射前以弗氏佐剂进行乳化得抗原乳剂；（2）第一次注射：使用上述抗原乳剂对羊进行注射；免疫注射部位均在动物体上选取22个部位点进行注射；（3）第二次注射：第一次注射后14天进行第二次注射；（4）第三次注射：第二次注射后12天进行第三次注射；（5）第四次注射：第三次注射后10天进行第四次注射；（6）第五次注射：第四次注射后8天进行第五次注射；（7）第六次注射：第五次注射后8天进行第六次注射；（8）第七次注射：第六次注射后8天进行第七次注射；（9）血清效价检测：最后一次注射后8-10天采血，分离血清，检测其双扩效价。作为本专利技术的进一步改进，第一次注射前乳化用的弗氏佐剂为完全弗氏佐剂，第二次、第三次、第四次、第五次、第六次、第七次注射前乳化用的弗氏佐剂为不完全弗氏佐剂。作为本专利技术的进一步改进，所述22个部位点分别为：后足窝各1点、颌下淋巴结左右各1点、腋窝周围左右各2点、股淋巴结周围各3点、背部脊柱左右两侧各4点。作为本专利技术的进一步改进，从第二次免疫开始至第七次免疫，注射部位均为20个部位点。作为本专利技术的进一步改进，所述20个部位点分别为：颌下淋巴结左右各1点、腋窝周围左右各2点、股淋巴结周围各3点、背部脊柱左右两侧各4点。有益效果：与现有技术相比，本专利技术的优点在于：本专利技术羊抗人肌红蛋白抗血清的制备方法，成本低，过程简单，不仅能稳定生产抗体，并且产生抗体速度快，抗体水平高，抗原用量小。能克服各羊只之间的个体差异，抗体效价整齐划一，能为IVD行业提供稳定的的原料：使生物科技在动物抗体制备方面规模化生产成为可能。具体实施方式下面结合实例对本专利技术作进一步的详细说明。实施例1：一种羊抗人肌红蛋白抗血清的制备方法，该方法包括以下步骤：（1）抗原准备：选用人肌红蛋白抗原，注射前以弗氏佐剂进行乳化得抗原乳剂；（2）第一次注射：取2.5mg人肌红蛋白抗原，用PBS或生理盐水稀释至5ml，再加入5ml完全弗氏佐剂制成抗原乳剂，使用此抗原乳剂对羊进行注射；第一次注射的剂量为每只羊0.5mg抗原，每一针剂量平均分配。注射部位在动物体上选取22个部位点进行注射。22个部位点分别为：后足窝各1点、颌下淋巴结左右各1点、腋窝周围左右各2点、股淋巴结周围各3点、背部脊柱左右两侧各4点。（3）第二次注射：第一次注射后14天进行第二次注射；取5.0mg人肌红蛋白抗原，用PBS或生理盐水稀释至5ml，再加入5ml不完全弗氏佐剂制成抗原乳剂，使用此抗原乳剂对羊进行注射，第二次注射的剂量为每只羊1.0mg抗原，每一针剂量平均分配。（4）第三次注射：第二次注射后12天进行第三次注射；，取10.0mg人肌红蛋白抗原，用PBS或生理盐水稀释至5ml，再加入5ml不完全弗氏佐剂制成抗原乳剂，使用此抗原乳剂对羊进行注射。（5）第四次注射：第三次注射后10天进行第四次注射；取10.0mg人肌红蛋白抗原，用PBS或生理盐水稀释至5ml，再加入5ml不完全弗氏佐剂制成抗原乳剂；使用此抗原乳剂对羊进行注射。（6）第五次注射：第四次注射后8天进行第五次注射；取10.0mg人肌红蛋白抗原，用PBS或生理盐水稀释至5ml，再加入5ml不完全弗氏佐剂制成抗原乳剂；使用此抗原乳剂对羊进行注射。（7）第六次注射：第五次注射后8天进行第六次注射；取10.0mg人肌红蛋白抗原，用PBS或生理盐水稀释至5ml，再加入5ml不完全弗氏佐剂制成抗原乳剂；使用此抗原乳剂对羊进行注射。（8）第七次注射：第六次注射后8天进行第七次注射；取10.0mg人肌红蛋白抗原，用PBS或生理盐水稀释至5ml，再加入5ml不完全弗氏佐剂制成抗原乳剂；使用此抗原乳剂对羊进行注射。以上从第二次免疫开始至第七次免疫，注射部位均为20个部位点，20个部位点分别为：颌下淋巴结左右各1点、腋窝周围左右各2点、股淋巴结周围各3点、背部脊柱左右两侧各4点。（9）血清效价检测：最后一次注射后8-10天采血，分离血清，检测其双扩效价；第三次、第四次、第五次、第六次、第七次注射的剂量均为每只羊2.0mg抗原，每一针剂量平均分配。下面通过表1来进一步阐述的有益效果。表1:采用本专利技术制备出羊抗人肌红蛋白抗血清产品效价表免疫方法产品统计时间段批次/数量产品效价（双扩）传统方法MB2012年11月至2013年12月2/101:8本专利技术MB2013年12月至2015年2月2/101:16由表1可知，采用本专利技术可以使MB免疫效价提高2倍以上。本专利技术按照上述实施例进行了说明，应当理解，上述实施例不以任何形式限定本专利技术，凡采用等同替换或等效变换方式所获得的技术方案，均落在本专利技术的保护范围之内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种羊抗人肌红蛋白抗血清的制备方法，该方法包括以下步骤：（1）抗原准备：选用人肌红蛋白抗原，注射前以弗氏佐剂进行乳化得抗原乳剂；（2）第一次注射：使用上述抗原乳剂对羊进行注射；免疫注射部位均在动物体上选取22个部位点进行注射；（3）第二次注射：第一次注射后14天进行第二次注射；（4）第三次注射：第二次注射后12天进行第三次注射；（5）第四次注射：第三次注射后10天进行第四次注射；（6）第五次注射：第四次注射后8天进行第五次注射；（7）第六次注射：第五次注射后8天进行第六次注射；（8）第七次注射：第六次注射后8 天进行第七次注射；（9）血清效价检测：最后一次注射后8‑10 天采血，分离血清，检测其双扩效价。

【技术特征摘要】
1.一种羊抗人肌红蛋白抗血清的制备方法，该方法包括以下步骤：（1）抗原准备：选用人肌红蛋白抗原，注射前以弗氏佐剂进行乳化得抗原乳剂；（2）第一次注射：使用上述抗原乳剂对羊进行注射；免疫注射部位均在动物体上选取22个部位点进行注射；（3）第二次注射：第一次注射后14天进行第二次注射；（4）第三次注射：第二次注射后12天进行第三次注射；（5）第四次注射：第三次注射后10天进行第四次注射；（6）第五次注射：第四次注射后8天进行第五次注射；（7）第六次注射：第五次注射后8天进行第六次注射；（8）第七次注射：第六次注射后8天进行第七次注射；（9）血清效价检测：最后一次注射后8-10天采血，分离血清，检测其双扩效价。2.根据权利要求1所述的羊抗人肌红蛋白抗血清的制备方法，其特征在于，所述第一次注射前乳化用的弗氏...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁金城，
申请(专利权)人：海奥斯生物科技镇江有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32