The invention discloses a preparation method of the full range of sheep or Rabbit anti human CRP antibody, the method comprises the following steps: (1) the immune sheep or Rabbit anti human CRP antiserum with high titer: (2) purified from sheep or Rabbit anti human CRP antibody: the sheep or Rabbit anti C reactive protein (by salting out method CRP) antiserum specific antibody in all extraction; purified purified sheep or Rabbit anti human CRP antibody and protein G column; then the neutralization buffer dilution range of raw materials: CRP antibody for freeze drying. The invention can solve the whole range of CRP detection of raw Goat anti C reactive protein (CRP) antibody production and preparation, to fill the domestic blank. The application of the downstream IVD industry more than CRP kit manufacturers, quality fully reach the international level of the same industry; the reagents used for the production of CRP antibodies we produce and preparation, detection of human serum 300mg/L up to 0.3mg/L.
【技术实现步骤摘要】
全量程羊或兔抗人CRP抗体的制备方法
本专利技术属于生物工程领域,具体涉及全量程羊或兔抗人CRP抗体的制备方法。
技术介绍
C反应蛋白(CRP)是典型的急性期反应蛋白与重要的免疫抵抗反应调节者。人C反应蛋白基因由两个外显子与一个内含子组成。由206个氨基酸组成的C反应蛋白,分子量是23KD。由五个相同的亚基依靠非共价键形成的环状五聚体,这一特征性结构使其归类于穿透素家族。人类CRP是由肝脏产生。在正常情况下,C反应蛋白的表达水平很低的,但是在受感染刺激后,它的表达水平可以在几个小时以后提高到10000倍。小鼠的C反应蛋白不是个急性反应蛋白,所以表达水平很低;CRP是一种能和肺炎链球菌的荚膜C多糖结合,由5个相同的亚单位(23KD)以非共价键聚集形成的环状五聚体蛋白,分子量为115KD,半寿期为19h,多由白细胞介素-6(IL-6)等炎性分子刺激肝脏细胞合成。正常人血清中CRP含量极微。一般新生儿血清CRP水平小于2mg/L,大于此值即与细菌感染的严重程度有关;儿童和成人≤10mg/L;10~99mg/L提示局灶性或浅表性感染,≥100mg/L提示败血症或侵袭性感染等严重感染。CRP是急性时相反应蛋白之一,在感染发生后6~8h开始升高,24~48h达到高峰。比正常值高几百倍甚至上千倍,升高幅度与感染的程度呈正相关。在疾病治愈后其含量急速下降,一周内可恢复正常。病毒感染时,CRP不增高(除了一些严重侵袭导致组织损伤的病毒如腺病毒(adenovirus)、疱疹病毒等)。临床上CRP一般作为鉴别细菌或病毒感染的一个首选指标,用于自身免疫性及感染性疾病的诊断和监测, ...
【技术保护点】
全量程羊或兔抗人CRP抗体的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)免疫出羊或兔抗人高效价的CRP抗血清:①抗原制备与处理:从人体液或组织中分离提纯CRP蛋白抗原,与佐剂混合并;②乳化:采用高速剪切法乳化抗原;③按免疫程序免疫羊或兔;④对免疫后的羊或兔采血;(2)纯化出羊或兔抗人CRP抗体:①盐析法:用辛酸、硫酸铵三步沉淀法,将羊或兔抗C反应蛋白(CRP)抗血清中的特异性抗体全部提取;②蛋白G柱纯化:取盐析后的羊或兔抗人CRP抗体,用结合缓冲液稀释,过滤,加入G柱中,收集流穿液,用结合缓冲液加入G柱中,待全部流出,加洗脱缓冲液 ,同时收集洗脱液;,得到纯化后的羊或兔抗人CRP抗体;(3)中和稀释:将步骤(2)纯化后的羊或兔抗人CRP抗体,用中和缓冲液稀释成全量程CRP抗体原料:(4)冻干制得。
【技术特征摘要】
1.全量程羊或兔抗人CRP抗体的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)免疫出羊或兔抗人高效价的CRP抗血清:①抗原制备与处理:从人体液或组织中分离提纯CRP蛋白抗原,与佐剂混合并;②乳化:采用高速剪切法乳化抗原;③按免疫程序免疫羊或兔;④对免疫后的羊或兔采血;(2)纯化出羊或兔抗人CRP抗体:①盐析法:用辛酸、硫酸铵三步沉淀法,将羊或兔抗C反应蛋白(CRP)抗血清中的特异性抗体全部提取;②蛋白G柱纯化:取盐析后的羊或兔抗人CRP抗体,用结合缓冲液稀释,过滤,加入G柱中,收集流穿液,用结合缓冲液加入G柱中,待全部流出,加洗脱缓冲液,同时收集洗脱液;,得到纯化后的羊或兔抗人CRP抗体;(3)中和稀释:将步骤(2)纯化后的羊或兔抗人CRP抗体,用中和缓冲液稀释成全量程CRP抗体原料:(4)冻干制得。2.根据权利要求1所述的全量程羊或兔抗人CRP抗体的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)中乳化过程中用冷却水对乳化容器降温,降至常温。3.根据权利要求1所述的全量程羊或兔抗人CRP抗体的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)中,免疫程序中,首次免疫注射部位选择22个部位点注射,第二次至最后一次注射选择20个部位点注射。4.根据权利要求3所述的全量程羊或兔抗人CRP抗体的制备方法,其特征在于,所述22个部位点分别为:后足窝各1点、颌下淋巴结左右各1点、腋窝周围左右各2点、股淋巴结周围各3点、背部脊柱左右两侧各4点。5.根据权利要求3所述的全量程羊或兔抗人CRP抗体的制备方法,其特征在于,所述20个部位点分别为:颌下淋巴结左右各1点、腋窝周围左右各2点、股淋巴结周围各3点、背部脊柱左右两侧各...
【专利技术属性】
技术研发人员:袁金城,王耀,江晓,
申请(专利权)人:海奥斯生物科技镇江有限公司,
类型:发明
国别省市:江苏,32
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