用于检测或测量乙基葡萄糖醛酸苷的乙基葡萄糖醛酸苷侧向流动测试带、免疫测定、装置和方法制造方法及图纸

可以用于检测针对酒精滥用的酒精摄入或者相关疾病和治疗监测的乙基葡萄糖醛酸苷(EtG)侧向流动免疫测定测试带、装置和方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于检测或测量乙基葡萄糖醛酸苷的乙基葡萄糖醛酸苷侧向流动测试带、免疫测定、装置和方法专利
本专利技术涉及可以用于针对酒精滥用或戒酒检测或监测的酒精摄入或者相关疾病和治疗监测的乙基葡萄糖醛酸苷(“EtG”)侧向流动免疫测定测试带、装置和方法。背景作为用于检测或监测体液或生物样品中药物或分析物的存在的方法，免疫测定变得越来越普及。在免疫测定的开发中的具体挑战是针对靶标药物/分析物的抗体的制备，因为许多不是固有抗原性的。通常，必须将药物修饰以制备抗原衍生物，但是当药物以适当可用的灵敏度(通常具有生理和/或药理学显著性的水平)包含在待测试的液体样本中时，针对抗原衍生物制备的抗体必须能够识别药物。灵敏度不是唯一的担忧。各种代谢物经常存在并且其他药物可能会与靶标分析物一起存在。优选地，针对特定药物或代谢物的抗体与其他代谢物或其他药物具有最小的交叉反应性(如果存在的话)。侧向流动测试，也被称为侧向流动免疫层析测定，是预期用于在不需要专门且昂贵的设备的情况下检测样品(基质)中靶标代谢物的存在(或不存在)的装置，尽管存在许多由读取设备支持的基于实验室的应用。通常，这些检测用于针对家庭检测、护理点检测(pointofcaretesting)或实验室用途的医学诊断以及车辆驾驶员的法律强制检测。所述技术基于一系列毛细管床，如多孔纸或烧结聚合物的层。这些层中的每一层具有自发输送液体(例如，尿液)的能力。第一层(样品垫)起海绵的作用并且容纳过量的样品液体。一旦浸渍，液体即迁移至第二层(缀合物垫)，制造商已经在其中储存了所谓的缀合物，即在含有保证靶标分子(例如，抗原)与已经固定在粒子表面上的其化学伴侣(例如，一抗)(任选第二标记抗体(二抗)(例如，夹心测定)之间的优化的化学反应所需的完全试剂混合物的盐-糖基质中的生物活性化合物(参见以下)的干燥形式。在样品液体溶解盐-糖基质的同时，其还溶解试剂，并且在一个组合输送作用中，样品和试剂在流经多孔结构的同时混合。以这种方式，代谢物在经由第三毛细管床进一步迁移的同时与抗体结合。这种床具有一个或多个已经由制造商固定第三分子(通常为标记的抗体)的区域(通常被称为条带)。到样品-缀合物混合物到达这些条带时，代谢物已经结合在第一抗体上并且第三“捕获”分子结合复合物。一会之后，当越来越多的液体经过条带时，抗体/代谢物复合物积聚并且条带区域改变颜色。通常，存在至少两个条带：捕获任何粒子并且从而表明反应条件和技术起作用的条带(对照)。第二条带区域含有特异性捕获分子并且仅捕获包含代谢物分子和第一抗体的那些复合物。在经过这些反应区域之后，液体进入最终的多孔材料，芯材，其提供牵引测试液体通过多个毛细管床的胶体渗透压(oncoticpressure)并且起废料容器的作用。侧向流动测试可以作为竞争性测定或夹心测定操作。在竞争性测定中，冲洗复合物，抗体受到限制或者存在与用于一抗结合的靶标竞争的靶标类似物。在夹心测定中，使用对抗原特异的一抗，并且二抗位于第三层中，二抗仅对第一抗体是特异性的。当使用二抗时，其可以与视觉(或可视化)标记物如荧光团或对可视化的发色团特异的酶缀合。在图3中示出的乙基葡萄糖醛酸苷(“EtG”)是通过乙醇与活化葡萄糖醛酸在UDP葡萄糖醛酸基转移酶(glucuronyltransferase)的存在下在线粒体膜上缀合形成的乙醇的直接代谢物。尽管乙醇在饮用之后仅数小时内是可检测的，而EtG在酒精饮用之后多至约四或五天是可检测的，使其成为用于确定酒精饮用的可靠靶标分析物(假定该测试可以针对假阳性和假阴性进行验证和控制)。酒精饮用的监测由于许多原因是重要的，包括与酒精滥用和戒酒检测和监测结合的用途(用于医学治疗、和法庭或法律强制检测和监测中的一种或多种)、安全敏感性程序如航空公司飞行员以及卫生保健或急救护理专业人员以及重型机械或车辆操作员。目前，EtG通过气相色谱法/质谱法(“GC/MS”)和液相色谱法/联用质谱法(“LC/MS/MS”)准确且可重复地检测。已经尝试了使用多克隆抗血清检测EtG的酶联免疫测定(“ELISA”)试验，但是多克隆抗体的使用可能会导致显著且增加的假阳性和假阴性数量，这表明该测定的差的特异性和灵敏度。此外，暴露于外部乙醇(例如，含有乙醇的个人护理产品、急救产品、清洁产品等)也产生假阳性。这种不准确性导致了这样的建议或策略：对于阳性测试结果来说，仅高水平的EtG(例如，至少500、750、或1000ng/mL尿液)是可接受的，这可能会导致显著数量的假阴性，尤其是使用免疫测定检测EtG。因此，市场上似乎没有提供针对EtG的准确、可重复且商业可行的免疫测定的优点的产品，所述免疫测定任选不需要通过使用包括(“GC/MS”)和液相色谱法/联用质谱法(“LC/MS/MS”)在内的额外检测进一步验证。这样的测试还需要大量时间以提供结果，例如至少数小时、数天、或数周。因此，需要提供和解决与开发用于针对EtG的准确、可重复且商业可行的免疫测定的装置和方法相关的当前问题中的一个或多个，例如，与现有的测定相比，提供更好的灵敏度和/或特异性(例如，使用EtG特异性单克隆抗体)、较低和/或可接受的假阴性和/或假阳性比率中的一个或多个，不需要使用更加昂贵且耗时和实验室所需的测试(例如，GC/MS和/或LC/MS/MS)的第二轮检测来确认阳性检测。因此，还需要提供超过已知系统或方法的改进(任选地克服这些问题中的一个或多个)的制造系统和方法。概述本专利技术的非限制性实施方案可以任选包括EtG免疫测定侧向流动测试带、装置、方法、和/或试剂中的一个或多个，如EtG特异性侧向流动带免疫测定装置以及制造和使用其的方法。非限制性的任选的实施方案可以包括装置、制造或使用方法、软件、计算机可读的计算机系统、和/或用于检验或检测药物或其他化学品或代谢物的存在的系统，例如，但不限于诊断、监测、或测量与疾病或医学病症相关的化学或其他参数，或者用于任选在非控制或难控制环境中检验非法或违禁药物。本专利技术的装置、方法或系统可以任选使用组织或体液中的一种或多种(例如，但不限于尿液、血液、唾液、或等血浆)作为用于检测EtG的测试样品。非限制性的任选的实施方案可以任选包括下列各项中的一种或多种：电子器件如智能电话或其他无线、互联网或蜂窝通讯能力的器件，以及数字和/或其他成像、数据处理、数据存储和/或经由蜂窝网络或Wi-Fi的数据的无线电子传输。装置、系统或方法可以任选收集、检测、处理、操控、改变、调节、确定、验证、和/或测试足以测试、化学和/或机械收集、检测、处理、操控、改变、调节、确定、验证、和/或测试尿液或口腔或其他体液或组织中的一个或多个中的EtG的体积的尿液、口腔或其他体液或组织。针对检测和/或将调节的液体递送至用于诊断、监测、或测量与疾病或医学病症相关的化学或其他参数、或确定EtG存在或不存在、或EtG的其他定量或定性测量的侧向流动测试带或其他检测系统，装置、系统或方法也可以提供设置和/或优化。通过一旦将检测装置插入至定位外罩中即自动引发计时或者由用户借助与触敏或其他图形用户界面相互作用来引发测试的起始时间，这样的装置还可以任选提供测试终点和/或随后的图像捕获的定时。侧向流动测试条装置、系统或方法可以任选提供进行测试的人员(本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测尿液中乙基葡萄糖醛酸苷的乙基葡萄糖醛酸苷(EtG)侧向流动测试条免疫测定系统，所述系统包括：(a)侧向流动测试条，所述测试条包含；(i)至少一种类型的毛细管流动材料，所述毛细管流动材料能够可重复地提供尿液、体液或组织样品经由所述测试条的侧向流动，以可重复地相互作用并且使用在所述测试条中包含的可检测标记的EtG特异性抗体以及第一和第二可检测标记物检测EtG，所述系统提供：(1)阳性结果，仅(C)着色带显色；(2)阴性结果，(T)着色带和(C)着色带二者均显色；或(3)无效结果，仅(T)着色带显色或没有带；(ii)如在图1中所示的尿液或对照样品施加区域(A)，所述尿液或对照样品施加区域(A)包含样品施加组分；(iii)标记的EtG标记的抗体区域(B)，所述标记的EtG标记的抗体区域(B)包含设置在所述测试条材料上或设置到所述测试条材料的可检测标记的EtG特异性抗体，所述可检测标记的EtG特异性抗体包含在施加至所述测试条之后与可检测标记物组分缀合并且由于所述尿液或对照样品的毛细管作用而可溶于所述测试条或沿着所述测试条传导的EtG特异性抗体；(iv)第一检测区域(D)，所述第一检测区域(D)包含所述第一可检测标记物作为当所述尿液或对照样品中的EtG的浓度低于在100至2000ng/mL之间的预选择的阈值时结合所述可检测标记的EtG特异性抗体的第一标记部分；其中低于所述预选择的阈值的所述可检测标记的EtG特异性抗体的结合得到具有所述(T)和(C)着色带二者的所述阴性结果；并且其中当所述尿液或对照样品中的所述EtG高于所述预选择的阈值时，所述可检测标记的EtG特异性抗体未可检测地或明显地结合所述第一可检测标记物并且也不提供所述阴性结果；(v)第二检测区域(E)，所述第二检测区域(E)包含所述第二可检测标记物作为当所述尿液或对照样品中的所述EtG的浓度高于在100至2000ng/mL之间的所述预选择的阈值时结合所述可检测标记的EtG特异性抗体的第二标记部分；其中高于所述预选择的阈值的所述可检测标记的EtG特异性抗体的结合得到仅具有所述(C)着色带的所述阳性结果；并且其中当所述尿液或对照样品中的所述EtG高于所述预选择的阈值时，所述可检测标记的EtG特异性抗体未可检测地或明显地结合所述第一可检测标记物；并且其中当所述测定无效时，所述可检测标记的EtG特异性抗体的结合得到仅具有所述(T)着色带或没有带的无效结果；并且其中所述可检测标记的EtG特异性抗体未可检测地或明显地结合所述第二可检测标记物。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于检测尿液中乙基葡萄糖醛酸苷的乙基葡萄糖醛酸苷(EtG)侧向流动测试条免疫测定系统，所述系统包括：(a)侧向流动测试条，所述测试条包含；(i)至少一种类型的毛细管流动材料，所述毛细管流动材料能够可重复地提供尿液、体液或组织样品经由所述测试条的侧向流动，以可重复地相互作用并且使用在所述测试条中包含的可检测标记的EtG特异性抗体以及第一和第二可检测标记物检测EtG，所述系统提供：(1)阳性结果，仅(C)着色带显色；(2)阴性结果，(T)着色带和(C)着色带二者均显色；或(3)无效结果，仅(T)着色带显色或没有带；(ii)如在图1中所示的尿液或对照样品施加区域(A)，所述尿液或对照样品施加区域(A)包含样品施加组分；(iii)标记的EtG标记的抗体区域(B)，所述标记的EtG标记的抗体区域(B)包含设置在所述测试条材料上或设置到所述测试条材料的可检测标记的EtG特异性抗体，所述可检测标记的EtG特异性抗体包含在施加至所述测试条之后与可检测标记物组分缀合并且由于所述尿液或对照样品的毛细管作用而可溶于所述测试条或沿着所述测试条传导的EtG特异性抗体；(iv)第一检测区域(D)，所述第一检测区域(D)包含所述第一可检测标记物作为当所述尿液或对照样品中的EtG的浓度低于在100至2000ng/mL之间的预选择的阈值时结合所述可检测标记的EtG特异性抗体的第一标记部分；其中低于所述预选择的阈值的所述可检测标记的EtG特异性抗体的结合得到具有所述(T)和(C)着色带二者的所述阴性结果；并且其中当所述尿液或对照样品中的所述EtG高于所述预选择的阈值时，所述可检测标记的EtG特异性抗体未可检测地或明显地结合所述第一可检测标记物并且也不提供所述阴性结果；(v)第二检测区域(E)，所述第二检测区域(E)包含所述第二可检测标记物作为当所述尿液或对照样品中的所述EtG的浓度高于在100至2000ng/mL之间的所述预选择的阈值时结合所述可检测标记的EtG特异性抗体的第二标记部分；其中高于所述预选择的阈值的所述可检测标记的EtG特异性抗体的结合得到仅具有所述(C)着色带的所述阳性结果；并且其中当所述尿液或对照样品中的所述EtG高于所述预选择的阈值时，所述可检测标记的EtG特异性抗体未可检测地或明显地结合所述第一可检测标记物；并且其中当所述测定无效时，所述可检测标记的EtG特异性抗体的结合得到仅具有所述(T)着色带或没有带的无效结果；并且其中所述可检测标记的EtG特异性抗体未可检测地或明显地结合所述第二可检测标记物。2.根据权利要求1所述的免疫测定系统，其中所述阈值是500、750、或1000ng/mL。3.根据权利要求1所述的免疫测定系统，其中所述可检测标记物是胶体金或胶乳金。4.根据权利要求1所述的免疫测定系统，其中所述EtG特异性抗体是单克隆的。5.根据权利要求4所述的免疫测定系统，其中所述EtG特异性抗体对EtG的亲和力是至少10-7KD。6.根据权利要求1所述的免疫测定系统，其中所述可检测标记物包含酶、酶片段或酶供体片段。7.一种关于用于检测尿液中乙基...

【专利技术属性】
技术研发人员：保罗·肯尼思·约翰逊，杰奎琳·安·盖尔，
申请(专利权)人：快速诊断国际公司，
类型：发明
国别省市：美国,US