新型产气荚膜梭菌噬菌体Clo‑PEP‑1及其用于抑制产气荚膜梭菌增殖的用途制造技术

本发明专利技术涉及可以特异性地杀死产气荚膜梭菌细胞的肌尾噬菌体科噬菌体Clo‑PEP‑1，其具有由SEQ ID NO：1的核苷酸序列表示的基因组（登记号：KCTC 12664BP），以及使用包含所述噬菌体作为活性成分的组合物来预防和治疗产气荚膜梭菌感染的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】新型产气荚膜梭菌噬菌体Clo-PEP-1及其用于抑制产气荚膜梭菌增殖的用途
本专利技术涉及一种从自然界分离的感染和杀死产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens)细胞的噬菌体，以及使用包含噬菌体作为活性成分的组合物用来预防和治疗产气荚膜梭菌细胞感染的方法。更具体地说，本专利技术涉及从自然界分离出来的并可以特异性地杀死产气荚膜梭菌细胞的肌尾噬菌体科(Myoviridae)噬菌体Clo-PEP-1，其具有由SEQIDNO：1(登记号：KCTC12664BP)的核苷酸序列表示的基因组以及预防产气荚膜梭菌感染和之后使用包含所述噬菌体的组合物作为活性成分治疗的方法。
技术介绍
产气荚膜梭菌是绝对厌氧菌(在氧气存在下几乎不能存活)且是导致严重疾病的致病细菌，包括坏死性肠炎和人类和动物如牛、猪和山羊等的食物中毒。产气荚膜梭菌产生的肠毒素通常是溶血性毒素和坏死毒素，其包括四种主要毒素α、β、ε和ι。根据它们的存在，产气荚膜梭菌分为六种产毒素类型，A至F。A型产气荚膜梭菌是食物中毒的主要致病病原体，C型产气荚膜梭菌是坏死性肠炎的主要致病病原体。最近，产气荚膜梭菌的感染在家禽业中越来越多。因此，鸡场正在遭受这些病例，因为它们在大量鸡群中流行，且长时间潜伏不表现出症状。特别是在肉鸡中，产气荚膜梭菌的感染往往发生在大范围内，因此被广泛认为是当今的主要病原体。此外，据养猪业报道，产气荚膜梭菌的感染病例也在增加。考虑到这种产气荚膜梭菌对畜牧业的重大损害，迫切需要开发一种预防或治疗产气荚膜梭菌感染的方法。已经使用各种抗生素来预防或治疗产气荚膜梭菌细胞的感染。然而，由于耐抗生素细菌的增加，迫切需要有效的替代方法。最近，使用噬菌体作为治疗细菌感染的新方法引起了我们的注意。特别地，我们对噬菌体非常感兴趣的原因是因为基于噬菌体的治疗是一种自然友好的方法。噬菌体是感染细菌的极小微生物，简称为噬菌体。一旦噬菌体感染细菌，噬菌体在细菌细胞内增殖。完全增殖后，后代破坏细菌细胞壁逃离宿主，这说明噬菌体具有杀菌能力。噬菌体感染的特征是特异性高，使得特定噬菌体仅感染特异性细菌。也就是说，可以被特定噬菌体感染的细菌是有限的，这表明噬菌体只能杀死特定细菌并且不会伤害其他细菌。噬菌体首先由英国细菌学家特沃特(Twort)在1915年发现，当时他注意到微球菌菌落被未知的某种东西融化并变得透明。1917年，法国细菌学家d'Herelle发现，痢疾病人粪便的滤液中的痢疾志贺菌(Shigelladisentriae)被某物融化，并进一步研究了这种现象。结果是，他独自鉴定了噬菌体，并将其命名为噬菌体，其意思是病菌杀手。从那时起，已经连续鉴定了特异性地作用于志贺菌(Shigella)，伤寒沙门氏菌(SalmonellaTyphi)和霍乱弧菌(Vibriocholerae)等致病菌的噬菌体。由于噬菌体杀死细菌的独特能力，已经研究并预期噬菌体是治疗细菌感染的更好的方法。然而，Fleming发现青霉素之后，由于抗生素的普及，只有东欧国家和前苏联的噬菌体研究在继续。2000年以后，常规抗生素的优点由于耐抗生素细菌的增加而褪色。因此，噬菌体再次被视为可以代替常规抗生素的新的抗菌剂。此外，最近全球政府强化对使用抗生素的监管。对噬菌体感兴趣的越来越多，工业应用也越来越多。因此，本专利技术人尝试通过使用从自然界中分离的可以选择性地杀死产气荚膜梭菌的噬菌体而开发可用于预防或治疗产气荚膜梭菌感染的组合物，并进一步建立使用该组合物预防或治疗产气荚膜梭菌感染的方法。结果是，本专利技术人分离出适合于此目的的噬菌体，并确定了可将本专利技术的噬菌体与其他噬菌体区分开的基因组的核苷酸序列。然后，我们已经开发了一种包含分离的噬菌体作为活性成分的组合物，并证实该组合物可以有效地用于预防和治疗产气荚膜梭菌感染，完成了本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种从自然界分离出来的并可以特异性地杀死产气荚膜梭菌细胞的肌尾噬菌体科噬菌体Clo-PEP-1，其具有由SEQIDNO：1(登记号：KCTC12664BP)的核苷酸序列表示的基因组。本专利技术的另一个目的是提供一种适用于预防产气荚膜梭菌感染的组合物，其包含可以感染和杀死产气荚膜梭菌细胞的噬菌体Clo-PEP-1作为活性成分，以及使用所述组合物预防产气荚膜梭菌感染的方法。本专利技术的另一个目的是提供一种适用于治疗产气荚膜梭菌感染的组合物，其包含可以感染和杀死产气荚膜梭菌细胞的噬菌体Clo-PEP-1作为活性成分，以及使用所述组合物治疗产气荚膜梭菌感染的方法。本专利技术的另一个目的是提供一种用于使用所述组合物预防和治疗产气荚膜梭菌感染的消毒剂。本专利技术的另一个目的是提供一种用于使用所述组合物预防和治疗产气荚膜梭菌感染的饮用水添加剂。本专利技术的另一个目的是提供一种通过使用所述组合物预防和治疗产气荚膜梭菌的感染而对养殖业有效的饲料添加剂。为了实现上述目的，本专利技术提供了一种从自然界分离出来的并可以特异性地杀死产气荚膜梭菌细胞的肌尾噬菌体科噬菌体Clo-PEP-1，其具有由SEQIDNO：1(登记号：KCTC12664BP)的核苷酸序列表示的基因组，以及使用包含噬菌体作为活性成分的组合物来预防和治疗产气荚膜梭菌感染的方法。噬菌体Clo-PEP-1由本专利技术人分离，然后于2014年8月21日放置于韩国生物科学和生物工艺学研究院韩国典型培养物保藏中心(登记号：KCTC12664BP)。本专利技术还提供一种适用于预防或治疗产气荚膜梭菌感染的消毒剂、饮用水添加剂和饲料添加剂，其包含噬菌体Clo-PEP-1作为活性成分。由于本专利技术的组合物中包含的噬菌体Clo-PEP-1有效地杀死产气荚膜梭菌细胞，因此被认为对预防或治疗由产气荚膜梭菌引起的各种疾病是有效的。因此，本专利技术的组合物可用于预防和治疗由产气荚膜梭菌引起的疾病(感染)。在本说明书中，术语“治疗(treatment)”或“治疗(treat)”表示(i)抑制由产气荚膜梭菌细胞引起的疾病；和(ii)缓解由产气荚膜梭菌细胞引起的疾病。在本说明书中，术语“分离(isolation)”或“分离的(isolated)”表示通过使用不同的实验技术分离噬菌体的所有操作，和确保能够区分该噬菌体与其他噬菌体的特征的操作，还包括通过生物工程技术增殖噬菌体使其有用的操作。包含在本专利技术组合物中的药学上可接受的载体是通常用于制备药物制剂的药物载体，其实施例为乳糖，葡萄糖，蔗糖，山梨糖醇，甘露醇，淀粉，阿拉伯树胶，磷酸钙，藻酸盐，明胶，硅酸钙，微晶纤维素，聚乙烯吡咯烷酮，纤维素，水，糖浆，甲基纤维素，羟基苯甲酸甲酯，羟基苯甲酸丙酯，滑石，硬脂酸镁和矿物油，但并不限于此。除了上述成分之外，本专利技术的组合物还可以包括润滑剂，润湿剂，甜味剂，香料，乳化剂，悬浮剂和防腐剂。在本专利技术的组合物中，包含噬菌体Clo-PEP-1作为活性成分。此时，噬菌体Clo-PEP-1为以下浓度：1×101pfu/ml～1×1030pfu/ml或1×101pfu/g～1×1030pfu/g，优选1×104pfu/ml～1×1015pfu/ml或1×104pfu/g～1×1015pfu/g。本专利技术的组合物可以由本领域技术人员通过使用单位剂量形式或在多剂量容器中的药学上可接受的载体和/或赋形剂通过本本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从自然界分离并能够特异性地杀死产气荚膜梭菌的肌尾噬菌体科噬菌体Clo‑PEP‑1，其具有由SEQ ID NO：1的核苷酸序列表示的基因组（登记号：KCTC 12664BP）。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.12.29 KR 10-2014-01916751.一种从自然界分离并能够特异性地杀死产气荚膜梭菌的肌尾噬菌体科噬菌体Clo-PEP-1，其具有由SEQIDNO：1的核苷酸序列表示的基因组（登记号：KCTC12664BP）。2.一种用于预防和治疗产气荚膜梭菌感染的组合物，其包含权利要求1所述的噬菌体Clo-PEP-1作为活性成分...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹成俊，姜尚铉，全秀娟，孙志洙，白亨琭，朴硕晃，
申请(专利权)人：尹特荣生物科技株式会社，
类型：发明
国别省市：韩国,KR