在水中用于制备透明质酸钠盐的丁酸酯类的方法技术

本发明专利技术涉及用于制备药物或化妆品用途或作为医疗装置的可接受的透明质酸丁酸酯或其盐的方法，其包含与钠或另一种碱金属成盐的透明质酸与丁酰基‑咪唑交酯在碳酸钠存在下在水溶液中反应。本发明专利技术还涉及包含由所述方法生产的透明质酸钠盐(HA)丁酸酯类的药物制剂、化妆品制剂或医疗装置。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】在水中用于制备透明质酸钠盐的丁酸酯类的方法本专利技术涉及制备透明质酸钠盐(HA)的丁酸酯的方法以及包含由所述方法生产的透明质酸钠盐(HA)的丁酸酯的药物制剂、化妆品制剂或医疗装置。本专利技术描述了通过在水性环境中合成来制备透明质酸钠盐(HA)的丁酸酯的方法，其令人惊奇地在丁酸酯中产生高度取代度(DS)并保留抵抗分子降解的天然透明质酸的多糖链。通过所述方法制备的透明质酸的丁酸酯不含在化妆品领域不耐受和/或禁止的杂质，具有抗炎和抗刺激特性，且由此可以有利地用于药物和皮肤美容领域和医疗装置中。本领域的状态已知透明质酸丁酸酯(HABut)(其中透明质酸的羟基被具有不同取代度的丁酸残基酯化)作为皮肤弹性增进剂和增湿剂具有抗炎、抗增殖和皮肤保护特性。透明质酸及其盐通过多糖链的糖苷键的水解而高度倾向于分子量降解。从文献中已知，所述水解显著地受到pH、离子强度和温度条件的影响。因此，HA的衍生条件对于保持多糖链的长度至关重要。理想的条件是使反应介质中水的存在最小化并且牵涉不是很高的温度和pH接近中性即介于5到8之间的条件的那些。EP0941253描述了在碱性活化剂例如吡啶和N，N-二甲氨基吡啶(DMAP)的存在下，在无质子有机溶剂例如N，N-二甲基甲酰胺和二甲亚砜(DMF，DMSO)中用丁酸酐制备具有低取代度(maxDS＝0.25)的透明质酸的丁酸酯。在有机溶剂中溶解的方法牵涉透明质酸可力丁鎓盐的制备，其通过用2NHCI酸化多糖水溶液并用旋转蒸发器蒸发溶剂而制备多糖的酸形式而获得，这是一种导致HA的分子量降解的方法。WO2005/092929描述了具有低取代度(DS≤0.1)的透明质酸丁酸酯的制备。在均匀条件下的合成牵涉通过使用强阳离子-交换树脂(AmberliteIR-120-plus)使其通过离子-交换柱来制备可溶于无质子有机溶剂的透明质酸四丁基铵(TBA)盐，所述通道导致分子量降解。WO2009/068215描述了透明质酸的混合丁酸-甲酸酯的制备及其在皮肤化妆品中的用途以及皮肤保护和抗炎活性。混合的酯类使用丁酸酐在甲酰胺(FA)中与碱性DMAP活化剂一起制备。所述方法使用无质子和质子有机溶剂，例如N，N二甲基甲酰胺、甲酰胺或二甲亚砜，这些有机溶剂列在根据Regulation(EC)no.1223/2009的化妆品制剂禁忌物质中。也可以使用有机碱，例如N，N二甲氨基吡啶，其具有高毒性特征(数十个ppm的LD50)。溶剂、试剂和活化剂的残留物在纯化过程中不能被定量消除。EP0416250中报道了在水中用于透明质酸衍生化的反应，该文献报道了由于与碳二亚胺或双-碳二亚胺的反应而在透明质酸的羧基上形成N-酰基脲和O-异酰基脲。该反应发生在水中、在不降解多糖的受控pH下进行。US5874417描述了在适度条件下用在水中的酰肼使透明质酸的羧基官能化。A.Mero等人(Polymer2014，6，346-369)报道HA可以在水中被衍生。然而，在水相中，需要在涉及HA链的明显降解的酸性或碱性条件下进行许多反应。该论文报道了在水中与碳二亚胺的反应，导致在羧基上形成酰胺键。本专利技术的方法还产生具有高取代度的HABut，仅使用水作为溶剂和碳酸钠作为碱性活化剂。得到的产物不存在会引起特定安全问题的任何溶剂或碱性活化剂残留物。本专利技术的描述本专利技术涉及制备用于药物或化妆品用途或作为医疗装置可接受的透明质酸丁酸酯或其盐的方法，包含使透明质酸，优选与钠或另一种碱金属成盐的透明质酸在水溶液中在碳酸钠的存在下与丁酰基-咪唑交酯(imidazolide)反应。本专利技术的方法优选用于制备透明质酸丁酸酯钠盐。该方法中使用的透明质酸钠盐优选具有在103-106道尔顿之间的重均分子量(MW)。将透明质酸盐溶于去矿质水，向所得溶液中加入碳酸钠，然后加入丁酰基-咪唑交酯。将该反应混合物维持在20℃至30℃的温度下不少于60分钟。反应的pH范围介于pH11-9之间。当反应完成时，将该混合物调节至中性pH，并通过在适合的溶剂中沉淀回收产物。然后将如此获得的产物纯化，例如通过用适合的溶剂连续洗涤并过滤。本专利技术的方法产生具有不同取代度的透明质酸丁酸酯。定义为每个透明质酸的GlcNAc-GlcUA二糖单位中的丁酸残基数之比的取代度(DS)可以在例如0.01-2.5之间。通过改变透明质酸和丁酰基-咪唑交酯之比可以获得不同的取代度。通过本专利技术方法获得的透明质酸丁酸酯不含溶剂残留物或毒性试剂，并且可用于药物制剂、化妆品制剂和医疗装置。因此，本专利技术的主题包括包含透明质酸丁酸酯或其盐以及至少一种药物或化妆品用途可接受的赋形剂和/或载体的药物和化妆品制剂，所述透明质酸丁酸酯或其盐为药物或化妆品用途可接受的，其通过上述报道的方法得到。通过报道的方法获得的透明质酸丁酸酯由于不存在管理化妆品成分的立法禁止的溶剂和试剂而被报道而可以用于皮肤美容领域的局部应用，在高安全性的制剂中具有水化、弹性、调色、抗衰老或抗-痤疮的活性，其适合于例如低变应原产品或敏感性皮肤。如体外对中性白细胞模型(多形核白细胞或PMN)所验证的，该分子还具有比透明质酸(HA)和丁酸钠(NaBut)更显著的抗刺激和抗炎活性，从而影响急性炎症应答。作为所述特征的结果，通过所述方法生产的透明质酸丁酸酯可用作药物制剂、化妆品制剂或医疗装置中的活性成分，作为用于治疗皮肤损伤例如由过热引起的炎症、溃疡和损伤的皮肤损伤的佐剂，所述过热通过例如紫外线、X射线和γ射线的辐射诱导。实施例所用的仪器：●安装有具有用于测定取代度(DS)的z梯度的5mm多核反向探针的BrukerAvance400MHz光谱仪；●安装有用于测定分子量分布和重均分子量(MW)的三重检测器(90℃和7℃的光散射，折射率和粘度计)。取代度(DS)的测定通过NMR光谱法定量透明质酸衍生物上丁酸酯的取代度。用安装有具有z梯度的5mm多核反向探针的BrukerAvance400MHz光谱仪在D2O中得到1HNMR光谱。通过将测量探头恒温至300°K进行测试。该测试包括扩散有序光谱(DOSY)分析，其验证聚合物和丁酸之间共价键的存在。丁酸酯中DS的定量直接在NMR管中用NaOD彻底水解后进行。水解物的1HNMR光谱允许整合可以归因于丁酸的信号(连位甲基和亚甲基质子)和可归因于透明质酸的信号(糖质子，不包括两个端基异头质子)；它们的比例决定了取代度。方法通过HP-SEC-TDA色谱法测定分子量和重均分子量(MW)分布使用3个检测器(在90°和7°的光散射，折射率和粘度计)的组合对样品进行尺寸排阻色谱。色谱图的处理使分子量Mw(重均分子量)的分布得到确定。色谱条件仪器Viscotek270max。柱：A7000，A6000mx2，温度35℃。流动相：PBS。流速：0.750ml/min。检测器：安装有折射计、毛细管粘度计和在90°和7°、温度35℃下的测量值的光散射的ViscotekTDA。注射体积：100μl。超氧阴离子产生评价在包被纤维蛋白原(FBG)、胶原蛋白IV(CIV)、HA或HAButIV的微量滴定板孔中的中性白细胞活化后，以释放到培养基中的超氧阴离子(O2-)的量来评价作为PMNs代谢活化指示剂的ROS的产生。使用分光光度法测定在板上温育期间被细胞产生的超氧阴离子减本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于制备药物和化妆品用途或作为医疗装置用途可接受的透明质酸丁酸酯或其盐的方法，包含将与钠或另一种碱金属成盐的透明质酸与丁酰基‑咪唑交酯在水溶液中在碳酸钠的存在下反应。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.01.13 IT MI2015A0000171.用于制备药物和化妆品用途或作为医疗装置用途可接受的透明质酸丁酸酯或其盐的方法，包含将与钠或另一种碱金属成盐的透明质酸与丁酰基-咪唑交酯在水溶液中在碳酸钠的存在下反应。2.根据权利要求1的方法，其用于制备透明质酸丁酸酯钠盐。3.根据权利要求1或2的方法，其中透明质酸钠盐具有103-106道尔顿的重均分子量。4.根据权利要求1-3任一项的方法，其中透明质酸丁酸酯具有0.01-2.5的取代度。5.根据权利要求4的方法，其中透明质酸丁酸酯具有0.1-2的取代度。6.根据权利要求1-5任一项的方法，其中所速反应在20℃-30℃...

【专利技术属性】
技术研发人员：L·斯图奇，R·基亚尼，A·塞奇，
申请(专利权)人：西格亚有限公司，
类型：发明
国别省市：意大利,IT