消痛贴膏指纹图谱质量检测方法技术

一种消痛贴膏指纹图谱质量检测方法，取消痛贴膏药芯袋内容物粉末和甲醇溶液，加热回流，冷却，用甲醇溶液补足减失的重量，滤过，取续滤液；梯度洗脱流动相；高效液相色谱分析不同批次的消痛贴膏药物，得各批次药物色谱图，经《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》处理分析，得共有特征对照图谱峰图，根据分离度和样品的重现性从中选取共有峰中的29个峰；获取待检测样品的指纹图谱，用中药指纹图谱计算机辅助相似度评价软件比较两种共有特征对照图谱峰图，29个共有峰计算得到的相似度不小于0.8。该质量检测方法能从色谱的整体面貌上把握消痛贴膏的质量情况，可作为消痛贴膏质量控制的指标，对今后标准化生产提供可利用的质量控制模式。

【技术实现步骤摘要】
消痛贴膏指纹图谱质量检测方法
本专利技术属于中药制剂检测
，涉及一种中药制剂的指纹图谱构建方法，具体涉及一种消痛贴膏药粉或膏或提取物的指纹图谱质量检测方法。
技术介绍
消痛贴膏为西藏奇正藏药股份有限公司生产的藏成药，该药采用中国青藏高原特有的天然药物，经特殊低温真空冻干工艺精制而成，主要功能为活血化瘀、消肿止痛，用于急慢性挫伤、跌打瘀伤、骨质增生、风湿及类风湿疼痛，以其卓越的功效享誉国内外，位列中国特有的精品藏药之首。目前，消痛贴膏的质量控制指标除了测定独一味的含量外，还对独一味、姜黄进行了薄层鉴别，这样虽能控制消痛贴膏的质量，但无法全面掌控质量状况。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种简便、稳定、精密度高、重现性好、易于掌握的消痛贴膏指纹图谱质量检测方法。为实现上述目的，本专利技术所采用的技术方案是：一种消痛贴膏指纹图谱质量检测方法，具体为：1）取消痛贴膏药芯袋内容物粉末0.8g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积百分比为70%的甲醇溶液25mL，密塞，称定重量，加热回流60分钟，自然冷却至室温，再称定重量，用体积百分比为70%的甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，得供试品溶液；所用消痛贴膏内容物粉末可以是组方制备的各种贴膏剂，也可以是按照组方制备的提取物或用原料直接制备的中药细粉或者按照组方制备各种口服临床剂型，如片剂、胶囊、颗粒、缓释制剂等。2）梯度洗脱流动相：十八烷基键和硅胶为填充剂；用WatersXSelectTMHSST3色谱柱，5μm，4.6mm×250mm；流动相：A相为蒸馏水，B相为乙腈；梯度洗脱：0→60min，流速1.00mL/min，A相90%，B相10%；60→80min，流速1.00mL/min，A相70%→40%，B相30%→60%；80→120min，流速1.00mL/min，A相40%→20%，B相60%→80%；120→125min，流速1.00mL/min，A相90%，B相10%；检测波长235nm，柱温25℃，进样量10μL；理论塔板数按山栀苷甲酯峰计，应不低于6000；3）建立标准药物图谱选取24批不同批次的消痛贴膏药物，根据步骤1）和步骤2）进行高效液相色谱分析，获得每个批次药物的色图谱，如图1，该色谱图经《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》（2012年版本）处理分析，得高效液相色谱指纹图谱的共有特征对照图谱峰图，如图2，根据分离度和样品的重现性从该特征对照图谱峰图中选取共有峰中的29个峰，作为特征峰；该29个特征峰的峰面积总和占总的峰面积的98%以上；其中，4号峰：保留时间8.9min，为山栀苷甲酯峰；9号峰：保留时间为23.6min，为8-O-乙酰山栀苷甲酯峰；4）指纹图谱的质量控制根据步骤1）和步骤2）获取待检测样品的指纹图谱，采用中药指纹图谱计算机辅助相似度评价软件（国家药典委员会）将待检测样品的共有特征对照图谱峰图与步骤3）中得到的特征对照图谱峰图进行比较，以29个共有峰计算得到的相似度不小于0.8。本专利技术质量检测方法采用样品处理方法和色谱条件，利用二极管阵列检测器的多波长同时检测能力建立消痛贴膏药物（药粉、药膏或药物提取物）的指纹图谱，用作消痛贴膏药物质量检测，能从色谱的整体面貌上把握消痛贴膏的质量情况，可作为消痛贴膏质量控制的指标。使消痛贴膏的质量控制技术更加完善、科学，并对今后的标准化生产提供了可利用的质量控制模式。该检测方法具有简便、稳定、精密度高、重现性好、易于掌握的特点。附图说明图1是本专利技术检测方法中对24批消痛贴膏进样高效液相色谱仪分析，获得的色谱图。图2是对图1所示色谱图用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》（2012年版本）处理分析，获得的消痛贴膏高效液相色谱指纹图谱的共有特征对照图谱峰图。图3是标准品山栀苷甲酯和8-O-乙酰山栀苷甲酯所配制的标准品容易色谱图。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术进行详细说明。实施例1成品、试剂和设备的准备：成品：消痛贴膏药芯袋内容物粉末来源：甘肃奇正藏药有限公司试剂：乙腈（色谱纯）来源：色谱纯：乙腈，色谱纯：水，分析纯：甲醇，仪器：Waters2695高效液相色谱仪，二极管阵列（PDA）检测器，EMPOWER2操作系统。）制备供试品溶液：取约0.8g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇溶液25ml，密塞，称定重量，加热回流60分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，得样品溶液；2）消痛贴膏指纹图谱的建立方法：2.1色谱条件高效液相色谱仪Waters2695/2998，WatersXSelectTMHSST3色谱柱，5μm，4.6mm×250mm。流动相：A：蒸馏水；B：乙腈，梯度洗脱。进样量10μl，检测波长235nm；柱温25℃。梯度洗脱如下：时间(min)流速(mL/min)A(%)B(%)0→601.00901060→801.0070→4030→6080→1201.0040→2060→80120→1251.0090102.3方法学考察2.3.1检测波长的选择消痛贴膏收载于《中国药典》2015年版一部，其含量测定成份选取了山栀苷甲酯和8-O-乙酰山栀苷甲酯（这两种成份是消痛贴膏中一味药材的有效成分，《中国药典》在该药材和消痛贴膏含量测定项下均选用这两种作为指标成份），检测波长为235nm。在该波长下，两组成份稳定，重现性高，故在做高效液相色谱指纹图谱时选取235nm波长为检测波长。2.3.2流动相及柱温的确定实验表明使用空调控制室温，在22～26℃的室温条件下，色谱峰的保留时间没有明显的变化，经5次在该温度范围内的测试，结果显示色谱峰的保留时间、峰高、峰面积数据的RSD均小于1.2%，色谱柱在25℃条件下的测试结果是可靠的，故选取25℃作为柱温控制值。经采用不同的流动相梯度洗脱，本专利技术检测方法中所提供的梯度是最佳方案，尤其是方法开始的最初20min以1mL/min的流速进行洗脱可使物质得到较好的分离，满足测试的需要。2.3.3稳定性考察：取供试品溶液测试品分别在0h，6h，12h，24h，36h，48h这六个时间点进行测试，考察色谱峰保留时间与峰面积的一致性，各指纹图谱特征峰的保留时间与峰面积的RSD均小于1.1%。2.3.4重复性实验取消痛贴膏5份，制作供试品，分别进样。结果显示各指纹峰的保留时间、峰高及峰面积的RSD均小于1.2%。2.4高效液相色谱图中选作特征指纹峰的保留时间及编号2.4.1按照色谱条件和供试品制备方法，对24批消痛贴膏进样高效液相色谱仪分析，对所获得的如图1所示的色谱图经《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》（2012年版本）处理分析，获得图2所示的消痛贴膏高效液相色谱指纹图谱的共有特征对照图谱峰图，根据分离度、样品的重现性选取选取29个特征峰，该29个特征峰的保留时间见表1，从表1可以看出：4号峰的保留时间为8.9min，9号峰的保留时间为23.6min。图2中的4号峰为山栀苷甲酯峰，9号峰为8-O-乙酰山栀苷甲酯峰；而标准品山栀苷甲酯、8-O-乙酰山栀苷甲酯的所配制的标准品溶液色谱图，见图3。图2是消痛贴膏供试品形成的共有峰，属于消痛贴膏样品色谱图。而图3是标准品山栀苷甲酯、8-O-乙酰山栀苷甲酯的所配本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种消痛贴膏指纹图谱质量检测方法，其特征在于，该检测方法具体为：1）取消痛贴膏药芯袋内容物粉末0.8g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积百分比为70%的甲醇溶液25mL，密塞，称定重量，加热回流60分钟，自然冷却至室温，再称定重量，用体积百分比为70%的甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，得供试品溶液；2）梯度洗脱流动相：以十八烷基键和硅胶为填充剂；用Waters XSelect

【技术特征摘要】
1.一种消痛贴膏指纹图谱质量检测方法，其特征在于，该检测方法具体为：1）取消痛贴膏药芯袋内容物粉末0.8g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积百分比为70%的甲醇溶液25mL，密塞，称定重量，加热回流60分钟，自然冷却至室温，再称定重量，用体积百分比为70%的甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，得供试品溶液；2）梯度洗脱流动相：以十八烷基键和硅胶为填充剂；用WatersXSelectTMHSST3色谱柱，5μm，4.6mm×250mm；流动相：A相为蒸馏水，B相为乙腈；梯度洗脱：0→60min，流速1.00mL/min，A相90%，B相10%；60→80min，流速1.00mL/min，A相70%→40%，B相30%→60%；80→120min，流速1.00mL/min，A相40%→20%，B相60%→80%；120→125min，流速1.00mL/min，A相90%，B相10%；检测波长235nm，柱温25℃，进样量10μL；理论塔板数按山栀苷甲酯峰计，不低于6000；3）建立标准药物图谱选取24批不同批次的消痛贴膏药物，根...

【专利技术属性】
技术研发人员：张雪菊，肖剑琴，马蓉，曹圆圆，
申请(专利权)人：甘肃奇正藏药有限公司，
类型：发明
国别省市：甘肃,62