海鱼弧菌检测用引物对、试剂盒及检测方法技术
【技术实现步骤摘要】
海鱼弧菌检测用引物对、试剂盒及检测方法
本专利技术涉及食源性病原菌的快速检测方法，尤其涉及利用TD-PCR技术检测样品中海鱼弧菌的方法。还涉及检测所使用的特异性引物序列和检测试剂盒。
技术介绍
致病性弧菌广泛存在于沿岸海水、沉积物和海洋生物体中，有些种发现于淡水中，被认为是海水鱼、虾、杂色蛤的一种常见致病菌，它们中的一些种也是引起人类急性胃肠炎的主要病原菌，在水产品卫生标准中对其都有严格的限定指标。海鱼弧菌(Vibriodamsela)是十二种致病性弧菌之一，又称为美人鱼发光杆菌(Photobacteriumdamselae)。海鱼弧菌由Love等于1981年首次从患皮肤溃疡病的少女鱼病灶处分离得到。该菌分布广泛，在海水、海产品及海产动物中均可发现它的存在；与弗尼斯弧菌一样，该菌也是近几年来公认的一种新型致病性弧菌。有资料表明，海鱼弧菌侵入宿主细胞后可产生大量的细胞溶解素，与其它弧菌所产生的细胞毒素在理化特性上不同。海鱼弧菌主要感染变温动物尤其是养殖鱼类，也可引起人类的伤口感染，因此称之为“人鱼共患病原体”。快速、准确的检测食品中致病菌是有效预防和控制病原菌感染的...
【技术保护点】
海鱼弧菌检测用引物对，其特征在于，碱基序列为SEQ ID NO.1/2。
【技术特征摘要】
1.海鱼弧菌检测用引物对，其特征在于，碱基序列为SEQIDNO.1/2。2.海鱼弧菌检测用试剂盒，包括碱基序列为SEQIDNO.1/2的引物对。3.根据权利要求2所述的海鱼弧菌检测用试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括浓度为10～100nmol/L的海鱼弧菌标准菌株的DNA提取物。4.一种海鱼弧菌的检测方法，其特征在于，所述方法包括以SEQIDNO.1/2为引物对进行TD-PCR扩增的步骤。5.权利要求4所述的海鱼弧菌的检测方法，其特征在于，所述TD-PCR扩增以海鱼弧菌gyrB基因941～1370位的核酸序列为靶基因。6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述的TD-PCR扩增反应条件为①94℃预变性4min；②扩增：94℃30s、69℃30S、72℃1min，2个循环；扩增：94℃30s、68℃30S、72℃1min，2个循环；扩增：94℃30S、67℃30S、72℃1min，2个循环；扩增:94℃30S、66℃30S、72℃1min，2个循环；扩增：94℃30S、65℃30S、72℃1min，2个循环；扩增:94℃30S、64℃30S、72℃1min，2个循环；扩增：94℃30S、63℃30S、72℃1min，2个循环；扩增：94℃30S、60℃30S、72℃1min，18个循环；③72℃延伸7min，4℃保存。7.权利要求4所述的海鱼弧菌检测方法，包括如下步骤：(1)提取待测样品DNA，得到模板液；(2)TD-PCR扩增：反应体系：模板液2μL、10×PCR缓冲液2.5μL、dNTP2μL、Taq酶0.125μL、浓度为10μM的引物对SEQIDNO.1/21μL、补充灭菌双蒸水至总体积为25μL；以上各组分加入至0.2mLPCR反应管中，混匀，5000r/min离心10s；反应...
【专利技术属性】
技术研发人员：麻丽丹，王殿夫，田卓，王青，冯华炜，吕婷婷，
申请(专利权)人：丹东出入境检验检疫局综合技术服务中心，
类型：发明
国别省市：辽宁,21
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