一种基于分子信标溶解曲线的可用于核酸扩增的快速、特异性检测方法技术

快速、方便的一种基于分子信标溶解曲线的用于核酸扩增的快速、特异性检测方法，步骤为：(1).针对目的基因设计合成引物和分子信标；(2).提取待测物DNA；(3).将所述引物和分子信标加入核酸扩增体系，对所述待测物DNA作核酸扩增；其特征在于—(4).所述核酸扩增完成后设置分子信标溶解曲线，检测判断所述待测物。本发明专利技术适用于检测判断核酸反应终点产物。

【技术实现步骤摘要】
一种基于分子信标溶解曲线的可用于核酸扩增的快速、特异性检测方法
本专利技术属于核酸检测领域，具体涉及一种可用于核酸扩增的快速、特异性检测方法。
技术介绍
核酸聚合酶链式反应(PCR)是最为经典的体外核酸扩增技术，自Khorana(1971)提出至今，该技术已经越来越广泛地应用于医学诊断、食品安全检测等领域。近年来新兴的恒温扩增技术，如环介导恒温扩增技术(LAMP)，交叉引物恒温扩增技术(CPA)，重组酶扩增技术(RPA)，滚环扩增技术(RCA)等同样被广泛应用。随着核酸扩增技术的发展，探究更为特异、灵敏、快速的核酸扩增检测方法成为重中之重。对于核酸扩增的检测方法，传统的凝胶电泳法采用的染料对人体有毒有害，操作步骤繁琐，开盖易造成气溶胶污染。实时荧光检测方法一般采用DNA双链荧光嵌入剂，如SYBRGreen，GelRed，SYTO9等，实现了对核酸扩增的实时检测，并且避免了开盖操作造成的交叉污染，但该方法不具有检测特异性。为了实现对核酸扩增的特异性检测，有学者提出了采用分子探针，如水解探针(如Taqman探针)、杂交探针(如分子信标)、复合探针，在核酸扩增过程探针序列与模板进行互补配对本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于分子信标溶解曲线的用于核酸扩增的快速、特异性检测方法，步骤为：(1).针对目的基因设计合成引物和分子信标；(2).提取待测物DNA；(3).将所述引物和分子信标加入核酸扩增体系，对所述待测物DNA作核酸扩增；其特征在于—(4).所述核酸扩增完成后设置分子信标溶解曲线，检测判断所述待测物。

【技术特征摘要】
1.一种基于分子信标溶解曲线的用于核酸扩增的快速、特异性检测方法，步骤为：(1).针对目的基因设计合成引物和分子信标；(2).提取待测物DNA；(3).将所述引物和分子信标加入核酸扩增体系，对所述待测物DNA作核酸扩增；其特征在于—(4).所述核酸扩增完成后设置分子信标溶解曲线，检测判断所述待测物。2.如权利要求1所述的方法，其特征是步骤(3)中正、反向引物浓度比为1:(2～100)或(2～100):1，分子信标浓度不高于正、反向引物中高浓度引物浓度。3.如权利要求2所述的方法，其特征是正、反向引物浓度比为1:(4～10)或(4～10):1，分子信标的浓度不高于正、反向引物中高浓度引物浓度的1/2。4.如权利要求1、2或3所述的方法，其特征是步骤(3)中分子信标浓度为正、反向引物中高浓度引物浓度的1/100至1/4。5.如权利要求4所述的方法，其特征是步骤(3)中分子信标浓度为正、反向引物中高浓度引物浓度的1/10至1/4。6.如权利要求1所述的方法，其特征是步骤(3)中分子信标浓度为0.01μM～1μM。7.如权利要求1所述的方法，其特征是步骤(3)中分子信标浓度为0.01μM～0.1μM。8.如权利要求1、2、3、6或7所述的方法，其特征是步骤(4)中所述溶解曲线的升温速率为0.001℃/s～10℃/s，升温范围为10℃～95℃或分子信标的(Tm－40℃)～(Tm+40℃)。9.如权利要求8所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴坚，王瑞，钱程，应义斌，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33