抗菌环（甘氨酸‑色氨酸‑亮氨酸‑D‑亮氨酸‑缬氨酸‑天冬酰胺）肽的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种抗菌环(甘氨酸‑色氨酸‑亮氨酸‑D‑亮氨酸‑缬氨酸‑天冬酰胺)肽的制备方法，包括：1)将基体树脂与Fmoc‑Asn(trt)‑OH在溶剂中进行接触反应以制得一级树脂，接着通过甲醇封头一级树脂，然后通过Fmoc洗脱剂洗脱去除一级树脂的Fmoc，最后经过哌啶脱保护以得到二级树脂；2)将二级树脂依次与多种改性氨基酸进行多次改性反应得到三级树脂；3)将树脂洗脱剂洗脱去除三级树脂中的树脂基团以得到如式(V)所示结构的直链六肽；4)在溶剂、PyAop、HOAt和DIPEA的存在下，直链六肽进行液相环合反应以制得环状物；5)通过基团洗脱剂洗脱去除环状物上的Boc和Trt以制得抗菌环(甘氨酸‑色氨酸‑亮氨酸‑D‑亮氨酸‑缬氨酸‑天冬酰胺)肽。通过该方法能够人工合成抗菌环(甘氨酸‑色氨酸‑亮氨酸‑D‑亮氨酸‑缬氨酸‑天冬酰胺)肽。

【技术实现步骤摘要】
抗菌环(甘氨酸-色氨酸-亮氨酸-D-亮氨酸-缬氨酸-天冬酰胺)肽的制备方法
本专利技术涉及环肽的制备，具体地，涉及抗菌环(甘氨酸-色氨酸-亮氨酸-D-亮氨酸-缬氨酸-天冬酰胺)肽的制备方法。
技术介绍
环肽DesotamideB(环(甘氨酸-色氨酸-亮氨酸-D-亮氨酸-缬氨酸-天冬酰胺)肽)从中国南海深海放线菌StreptomycesscopuliridisSCSIOZJ46代谢产物中提取的，由Trp-Leu-D-Leu-Val-Asn-Gly组成的六环肽(J.Nat.Prod.2014,77(8),1937-1941)，其中的色氨酸是该环肽抗菌骨架必不可缺的氨基酸，并对其抗菌活性进行了测试，发现其对耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE)具有良好的抑制作用。目前对DesotamideB进行的深入研究表明，其中的天冬酰胺对抗菌活性起到了关键作用。相对Desotamide家族的另外几种环肽而言，DesotamideB抗菌范围更广。但到目前为止，DesotamideB的获取仅限于从微生物代谢产物中提取，存在含量少、分离纯化复杂、成本昂贵等问题，制约了其进一步的生产应用，本专利技术可以高效的合成DesotamideB，降低获取成本。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种抗菌环(甘氨酸-色氨酸-亮氨酸-D-亮氨酸-缬氨酸-天冬酰胺)肽的制备方法，通过该方法能够人工合成抗菌环(甘氨酸-色氨酸-亮氨酸-D-亮氨酸-缬氨酸-天冬酰胺)肽，并且该方法具有原料易得、分离纯化简便和产率高的优点。为了实现上述目的，本专利技术提供了一种抗菌环(甘氨酸-色氨酸-亮氨酸-D-亮氨酸-缬氨酸-天冬酰胺)肽的制备方法，包括：1)将如式(I)所示结构的基体树脂与Fmoc-Asn(trt)-OH在溶剂中进行接触反应以制得如式(II)所示结构的一级树脂，接着通过甲醇封头一级树脂，然后通过Fmoc洗脱剂洗脱去除一级树脂的Fmoc，最后经过哌啶脱保护以得到如式(III)所示结构的二级树脂；2)将二级树脂依次与多种改性氨基酸进行多次改性反应得到如式(IV)所示结构的三级树脂；每步改性反应为：将树脂与改性氨基酸在溶剂和HATU的存在下进行接触反应，然后经过哌啶脱保护；单次的改性反应中的改性氨基酸依次独立为Fmoc-Val-OH、Fmoc-D-Leu-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Gly-OH；3)将树脂洗脱剂洗脱去除三级树脂中的树脂基团以得到如式(V)所示结构的直链六肽；4)在溶剂、PyAop、HOAt和DIPEA的存在下，直链六肽进行液相环合反应以制得如式(VI)所示结构的环状物；5)通过基团洗脱剂洗脱去除环状物上的Boc和Trt以制得如式(VII)所示结构的抗菌环(甘氨酸-色氨酸-亮氨酸-D-亮氨酸-缬氨酸-天冬酰胺)肽；其中，X为卤素，Fmoc为芴甲氧羰基，Boc为叔丁基氧羰基，Trt为三苯甲基。在上述技术方案只能怪，本专利技术以基体树脂为载体，通过Fmoc-Asn(trt)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-D-Leu-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH与Fmoc-Gly-OH合成直链六肽甘氨酸-色氨酸(叔丁基氧羰基)-亮氨酸-D-亮氨酸-缬氨酸-天冬酰胺(三苯甲基)；然后使用PyAOP/HOAt/DIPEA体系对得到的直链肽进行液相环合，最后利用TFA/水脱去叔丁基氧羰基和三苯甲基保护即可得到目标环(甘氨酸-色氨酸-亮氨酸-D-亮氨酸-缬氨酸-天冬酰胺)肽。同时，该方法具有原料易得、分离纯化简便和产率高的优点。本专利技术的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。附图说明附图是用来提供对本专利技术的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本专利技术，但并不构成对本专利技术的限制。在附图中：图1是实施例1中制得的环(甘氨酸-色氨酸-亮氨酸-D-亮氨酸-缬氨酸-天冬酰胺)肽的核磁氢谱图；图2是实施例1中制得的环(甘氨酸-色氨酸-亮氨酸-D-亮氨酸-缬氨酸-天冬酰胺)肽的核磁碳谱图；图3是实施例1中制得的环(甘氨酸-色氨酸-亮氨酸-D-亮氨酸-缬氨酸-天冬酰胺)肽的质谱图。具体实施方式以下对本专利技术的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本专利技术，并不用于限制本专利技术。在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。在本专利技术中部分的英文译文如下：Fmoc：芴甲氧羰基，Boc为叔丁基氧羰基，Trt为三苯甲基，DMF：N,N-二甲基甲酰胺，DCM：二氯甲烷，DIPEA：N,N-二异丙基乙胺，HATU：2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯，HOAt：1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑，PyAop：(3H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶-3-氧基)三-1-吡咯烷基六氟磷酸盐，TFA：三氟乙酸，SephadexLH-20：羟丙基葡聚糖凝胶，Fmoc-Asn(trt)-OH：Nα-芴甲氧羰基-Nδ-三苯甲基-天冬酰胺，Fmoc-Val-OH：N-芴甲氧羰基-缬氨酸，Fmoc-D-Leu-OH：N-芴甲氧羰基-D-亮氨酸，Fmoc-Leu-OH：N-芴甲氧羰基-亮氨酸，Fmoc-Trp(Boc)-OH：N-alpha-芴甲氧羰基-N-in-叔丁氧羰基-L-色氨酸，Fmoc-Gly-OH：N-芴甲氧羰基-甘氨酸；piperidine：哌啶，TFE：三氟乙醇，Acetic：乙酸，TFA：三氟乙酸。本专利技术提供了一种抗菌环(甘氨酸-色氨酸-亮氨酸-D-亮氨酸-缬氨酸-天冬酰胺)肽的制备方法，包括：1)将如式(I)所示结构的基体树脂与Fmoc-Asn(trt)-OH在溶剂中进行接触反应以制得如式(II)所示结构的一级树脂，接着通过甲醇封头一级树脂，然后通过Fmoc洗脱剂洗脱去除一级树脂的Fmoc，最后经过哌啶脱保护以得到如式(III)所示结构的二级树脂；2)将二级树脂依次与多种改性氨基酸进行多次改性反应得到如式(IV)所示结构的三级树脂；每步改性反应为：将树脂与改性氨基酸在溶剂和HATU的存在下进行接触反应，然后经过哌啶脱保护；单次的改性反应中的改性氨基酸依次独立为Fmoc-Val-OH、Fmoc-D-Leu-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Gly-OH；3)将树脂洗脱剂洗脱去除三级树脂中的树脂基团以得到如式(V)所示结构的直链六肽；4)在溶剂、PyAop、HOAt和DIPEA的存在下，直链六肽进行液相环合反应以制得如式(VI)所示结构的环状物；5)通过基团洗脱剂洗脱去除环状物上的Boc和Trt以制得如式(VII)所示结构的抗菌环(甘氨酸-色氨酸-亮氨酸-D-亮氨酸-缬氨酸-天冬酰胺)肽；其中，X为卤素，Fmoc为芴甲氧羰基，Boc为叔丁基氧羰基，Trt为三苯甲基，●为树脂的主体。在本专利技术中，为了使得抗菌环(甘氨酸-色氨酸-亮氨酸-D-亮氨酸-本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗菌环(甘氨酸‑色氨酸‑亮氨酸‑D‑亮氨酸‑缬氨酸‑天冬酰胺)肽的制备方法，其特征在于，包括：1)将如式(I)所示结构的基体树脂与Fmoc‑Asn(trt)‑OH在溶剂中进行接触反应以制得如式(II)所示结构的一级树脂，接着通过甲醇封头所述一级树脂，然后通过Fmoc洗脱剂洗脱去除所述一级树脂的Fmoc，最后经过哌啶脱保护以得到如式(III)所示结构的二级树脂；2)将所述二级树脂依次与多种改性氨基酸进行多次改性反应得到如式(IV)所示结构的三级树脂；每步所述改性反应为：将树脂与所述改性氨基酸在溶剂和HATU的存在下进行接触反应，然后经过哌啶脱保护；单次的改性反应中的改性氨基酸依次独立为Fmoc‑Val‑OH、Fmoc‑D‑Leu‑OH、Fmoc‑Leu‑OH、Fmoc‑Trp(Boc)‑OH、Fmoc‑Gly‑OH；3)将树脂洗脱剂洗脱去除所述三级树脂中的树脂基团以得到如式(V)所示结构的直链六肽；4)在溶剂、PyAop、HOAt和DIPEA的存在下，所述直链六肽进行液相环合反应以制得如式(VI)所示结构的环状物；5)通过基团洗脱剂洗脱去除所述环状物上的Boc和Trt以制得如式(VII)所示结构的抗菌环(甘氨酸‑色氨酸‑亮氨酸‑D‑亮氨酸‑缬氨酸‑天冬酰胺)肽；...

【技术特征摘要】
1.一种抗菌环(甘氨酸-色氨酸-亮氨酸-D-亮氨酸-缬氨酸-天冬酰胺)肽的制备方法，其特征在于，包括：1)将如式(I)所示结构的基体树脂与Fmoc-Asn(trt)-OH在溶剂中进行接触反应以制得如式(II)所示结构的一级树脂，接着通过甲醇封头所述一级树脂，然后通过Fmoc洗脱剂洗脱去除所述一级树脂的Fmoc，最后经过哌啶脱保护以得到如式(III)所示结构的二级树脂；2)将所述二级树脂依次与多种改性氨基酸进行多次改性反应得到如式(IV)所示结构的三级树脂；每步所述改性反应为：将树脂与所述改性氨基酸在溶剂和HATU的存在下进行接触反应，然后经过哌啶脱保护；单次的改性反应中的改性氨基酸依次独立为Fmoc-Val-OH、Fmoc-D-Leu-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Gly-OH；3)将树脂洗脱剂洗脱去除所述三级树脂中的树脂基团以得到如式(V)所示结构的直链六肽；4)在溶剂、PyAop、HOAt和DIPEA的存在下，所述直链六肽进行液相环合反应以制得如式(VI)所示结构的环状物；5)通过基团洗脱剂洗脱去除所述环状物上的Boc和Trt以制得如式(VII)所示结构的抗菌环(甘氨酸-色氨酸-亮氨酸-D-亮氨酸-缬氨酸-天冬酰胺)肽；其中，X为卤素，Fmoc为芴甲氧羰基，Boc为叔丁基氧羰基，Trt为三苯甲基。2.根据权利要求1所述的制备方法，其中，相对于2g的所述基体树脂，所述Fmoc-Asn(trt)-OH的用量为2-3mmol，所述Fmoc-Val-OH的用量为7.5-8.5mmol，所述Fmoc-D-Leu-OH的用量为7.5-8.5mmol，所述Fmoc-Leu-OH的用量为7.5-8.5mmol，所述Fmoc-Trp(Boc)-OH的用量为7.5-8.5mmol，所述Fmoc-Gly-OH的用量为7.5-8.5mmol。3.根据权利要求1所述的制备方法，其中，X为Br或Cl；优选地，所述基体树脂为2-氯三苯甲基氯树脂。4.根据权利要求1-3中任意一项所述的制备方法，其中，...

【专利技术属性】
技术研发人员：葛飞，马琪森，陶玉贵，朱龙宝，李婉珍，宋平，江志超，
申请(专利权)人：安徽工程大学，
类型：发明
国别省市：安徽,34