亨廷顿氏病的治疗化合物制造技术

本发明专利技术涉及靶向亨廷顿氏病核酸序列的RNA干扰(RNAi)分子，以及使用这些RNAi分子以治疗亨廷顿氏病的方法。本发明专利技术提供了分离的miRNA穿梭载体，其表达具有有限脱靶毒性的治疗性siRNA。在某些实施方案中，将具有脱靶毒性的siRNA包含在本发明专利技术的miRNA穿梭载体的背景中限制了所述siRNA的所述脱靶毒性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】亨廷顿氏病的治疗化合物相关专利申请本申请要求于2014年5月20日提交的美国临时专利申请No.61/000,895的优先权，其全文以引用方式并入本文。政府支持本专利技术是在国家卫生研究院资助的11033、DK054759、NS050210和NS068099下由政府支持完成的。政府享有本专利技术的某些权利。专利技术背景RNAi通过被加工成功能性的小的抑制性RNA(~21nt)的双链RNA(dsRNA)引导序列特异性基因沉默。在自然界中，用于调控基因表达的RNAi主要通过被称为微RNA(miRNA)的小RNA进行。成熟的微RNA(~19-25个核苷酸)是由更大的含有茎-环区的初级miRNA转录物(pri-miRNA)加工而成。经过由核糖核酸酶Drosha和Dicer催化的一系列加工事件，miRNA双链区被解开，而随后一条单链(反义“引导”链)被并入到RNA诱导沉默复合体(RISC)中，从而生成能够与靶转录物碱基配对并使之沉默的功能性复合体。靶标抑制的模式主要取决于互补程度；转录物裂解通常要求高度的碱基配对，而当小RNA不完全结合至靶转录物（最常在3′UTR中）时发生翻译抑制和mRNA去稳定本文档来自技高网...

【技术保护点】
核酸，其编码人工初级miRNA转录物(pri‑miRNA)，所述核酸由以下部分组成，依位置顺序：5′‑侧翼区、非引导区、环区、引导区和3′‑侧翼区，其中所述引导区由SEQ ID NO: 37(miHDss3)、SEQ ID NO:6(miHDS1v5U)或SEQ ID NO:7(miHDS1v6A)组成，并且所述非引导区与所述引导区至少80%互补。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.05.20 US 62/0008951.核酸，其编码人工初级miRNA转录物(pri-miRNA)，所述核酸由以下部分组成，依位置顺序：5′-侧翼区、非引导区、环区、引导区和3′-侧翼区，其中所述引导区由SEQIDNO:37(miHDss3)、SEQIDNO:6(miHDS1v5U)或SEQIDNO:7(miHDS1v6A)组成，并且所述非引导区与所述引导区至少80%互补。2.权利要求1的核酸，其中所述5′-侧翼区连续连接至所述非引导区，所述环区位于所述非引导区和所述引导区之间，而所述引导区连续连接至所述3′-侧翼区。3.权利要求1或2的核酸，其中所述5′-侧翼区包含连续连接至所述非引导区的5′-接合序列。4.权利要求3的核酸，其中所述5′-接合序列由5-8个核苷酸组成。5.权利要求4的核酸，其中所述5′-接合序列由7个核苷酸组成。6.权利要求3的核酸，其中所述5′-接合序列编码GUGAGCGA(SEQIDNO:13)或GUGAGCGC(SEQIDNO:14)。7.权利要求3-6中任一项的核酸，其中所述5′-侧翼区还包含位于所述5′-接合序列上游的5′-凸序列。8.权利要求7的核酸，其中所述5′-凸序列包含克隆位点。9.权利要求7的核酸，其中所述5′-凸序列由约1-10个核苷酸组成。10.权利要求7的核酸，其中所述5′-凸序列编码UAAACUCGA(SEQIDNO:15)。11.权利要求7-10中任一项的核酸，其中所述5′-侧翼区还包含位于所述5′-凸序列上游的5′-间隔序列。12.权利要求11的核酸，其中所述5′-间隔序列由10-12个核苷酸组成。13.权利要求11的核酸，其中所述5′-间隔序列编码UGGUACCGUU(SEQIDNO:16)。14.权利要求11-13中任一项的核酸，其中所述5′-侧翼区还包含位于所述5′-间隔序列上游的5′-上游序列。15.权利要求14的核酸，其中所述5′-上游序列长约30-2000个核苷酸。16.权利要求1-15中任一项的核酸，其中所述3′-侧翼区包含连续连接至所述引导区的3′-接合序列。17.权利要求16的核酸，其中所述3′-接合序列由5-8个核苷酸组成。18.权利要求16的核酸，其中所述3′-接合序列与所述5′-接合序列至少约85%互补。19.权利要求16的核酸，其中所述3′-接合序列编码CGCCUAC(SEQIDNO:18)。20.权利要求16-19中任一项的核酸，其中所述3′-侧翼区还包含位于所述3′-接合序列下游的3′-凸序列。21.权利要求20的核酸，其中所述3′-凸序列包含克隆位点。22.权利要求20的核酸，其中所述3′-凸序列由约1-10个核苷酸组成。23.权利要求20的核酸，其中3′-凸序列编码UAG(SEQIDNO:30)。24.权利要求20的核酸，其中所述5′-凸序列与所述3′-凸序列仅在位于所述凸序列两端的各一个核苷酸处互补。25.权利要求20-24中任一项的核酸，其中所述3′-侧翼区还包含位于所述3′-凸序列下游的3′-间隔序列。26.权利要求25的核酸，其中所述3′-间隔序列由10-12个核苷酸组成。27.权利要求25的核酸，其中所述3′-间隔序列编码AGCGGCCGCCA(SEQIDNO:19)。28.权利要求25-27中任一项的核酸，其中所述3′-间隔序列与所述5′-间隔序列至少约70%互补。29.权利要求25-28中任一项的核酸，其中所述3′-侧翼区还包含位于所述3′-间隔序列下游的3′-下游序列。30.权利要求29的核酸，其中所述5′-上游序列不与所述3′-下游序列明显配对。31.权利要求29或30的核酸，其中所述3′-下游序列长约30-2000个核苷酸。32.权利要求1-31中任一项的核酸，其中所述环区长15-25个核苷酸。33.RNA，其由权利要求1-32中任一项的核酸编码。34.表达盒，其编码权利要求1-32中任一项所述的分离的核酸。35.权利要求34的表达盒，其还包含连续连接至所述核酸的启动子。36.权利要求35的表达盒，其中所述启动子是polII或polIII启动子。37.权利要求36的表达盒，其中所述polIII启动子是U6启动子。38.权利要求36的表达盒，其中所述polIII启动子是小鼠U6启动子。39.权利要求36的表达盒，其中所述启动子是polII启动子。40.权利要求35的表达盒，其中所述启动子是组织特异性启动子。41.权利要求35的表达盒，其中所述启动子是诱导型启动子。42.权利要求35-41中任一项的表达盒，其还包含标志物基因。43.载体，其包含权利要求34-42中任一项的表达盒。44.权利要求43的载体，其中所述载体是腺相关病毒（AAV）载体。45.权利要求44的载体，其中所述AAV是AAV1、AAV2、AAV5、AAV6和/或AAV9。46.权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：BL戴维森，A马斯蒙泰斯，
申请(专利权)人：衣阿华大学研究基金会，
类型：发明
国别省市：美国,US