FMDV重组疫苗及其用途制造技术

本发明专利技术包括FMDV疫苗或组合物。疫苗或组合物可以是含有FMDV抗原的疫苗或组合物。本发明专利技术还包括编码和表达FMDV抗原、表位或免疫原的重组载体，其可用于保护动物、特别是绵羊、牛、山羊或猪免受FMDV感染。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】FMDV重组疫苗及其用途相关申请的交叉引用本申请要求于2014年9月23日提交的美国临时申请62/054,073的优先权。专利
本专利技术涉及用于对抗动物中的口蹄疫病毒(FMDV)感染的组合物。本专利技术提供包含FMDV抗原的药物组合物、抗FMDV的疫苗接种方法以及用于此类方法和组合物的试剂盒。专利技术背景口蹄疫(FMD)是影响农场动物的最具毒性和传染性的疾病之一。该疾病在世界许多国家是地方性的，特别是在非洲、亚洲和南美洲。另外，疫情爆发也可以定期发生。在国家中的存在该疾病可能会由于生产力的丧失、感染畜群的体重和产奶量以及对这些国家的贸易禁运而造成非常严重的经济后果。针对该疾病采取的措施包括严格执行进口限制、卫生控制和检疫、屠宰生病的动物和使用灭活疫苗的疫苗接种程序，作为国家或区域一级的预防措施，或在疫情爆发时定期进行。FMD的特点是其潜伏期短、传染性强、口中和蹄上形成溃疡以及有时候年轻动物的死亡。FMD影响许多动物物种，特别是牛、猪、绵羊和山羊。导致该疾病的介质(agent)是属于小核糖核酸病毒(Picornaviridae)科家族的口蹄疫病毒(Aphthovirus)属的核糖核酸(RNA)病毒(Cooperetal.,Intervirology,1978,10,165-180)。目前，已知至少有七种类型的口蹄疫病毒(FMDV)：欧洲型(A、O和C)、非洲型(SAT1、SAT2和SAT3)和亚洲型(Asia1)。还已经区分了许多子类型(Kleidetal.Science(1981),214,1125-1129)。FMDV是直径约25nm的裸露的二十面体病毒，其含有由约8500个核苷酸组成的具有正极性的单链RNA分子。该RNA分子包含单个开放阅读框(ORF)，其编码单个多聚蛋白，其中尤其还含有衣壳前体，也称为蛋白质P1或P88。蛋白质P1在其氨基末端被肉豆蔻酰化。在成熟过程中，蛋白质P1被蛋白酶3C切割成称为VP0、VP1和VP3的三个蛋白质(或者分别为1AB、1D和1C；BelshamG.J.，ProgressinBiophysicsandMolecularBiology,1993,60,241-261)。在病毒粒子中，蛋白质VP0然后被切割成两个蛋白质VP4和VP2(或者分别为1A和1B)。将蛋白质VP0转化为VP4和VP2以及形成成熟病毒粒子的机制尚不清楚。蛋白质VP1、VP2和VP3具有约26,000Da的分子量，而蛋白质VP4较小为约8,000Da。衣壳蛋白的简单组合形成原聚体或5S分子，其是FMDV衣壳的基本组分。然后将该原聚体络合成五聚体以形成12S分子。通过组装12个12S五聚体从而构成基因组RNA分子，从而构成146S颗粒，产生病毒粒子。也可以在其内部不存在RNA分子的情况下形成病毒衣壳(以下称为“空衣壳”)。空衣壳也被称为颗粒70S。空衣壳的形成可以在病毒复制过程中自然发生，或者可以通过化学处理人工产生。已经对天然空衣壳进行了一些研究。特别地，Rowlands等人(Rowlandsetal.,J.Gen.Virol.,1975,26,227-238)已经显示，A10口蹄疫病毒体主要包含四种蛋白质VP1、VP2、VP3和VP4。相比之下，天然空衣壳(不是通过重组而是从A10口蹄疫病毒的培养物中纯化得到的)基本上含有未切割的蛋白质VP0；与A-Pando口蹄疫病毒相同的结果由Rweyemamu(Rweyemamuetal.,ArchivesofVirology,1979,59,69-79)描述。在Tris-EDTA存在下透析后并离心后得到的人造空衣壳不含蛋白质VP4。根据Rowlands等人，这些人造衣壳仅具有轻微的免疫原性，而如该作者注意到的，天然空衣壳仅在用甲醛处理以使其稳定后具有免疫原性，而豚鼠的天然空衣壳诱导的抗体应答则是多变的。此外，Rowlands等人和Rweyemamu等人不同意需要稳定天然空衣壳。对于Rweyemamu等人，没有用甲醛处理不会影响天然空衣壳的抗原性水平。免疫原性仅通过诱导豚鼠的中和抗体来测试。借助于昆虫细胞中重组杆状病毒将编码该衣壳蛋白的前体P1的基因的表达与编码与大肠杆菌(E.coli)中的蛋白酶3C相关的P1的基因的表达进行比较(Grubmanetal.,Vaccine,1993,11,825-829；Lewisetal.,J.Virol.,1991,65,6572-6580)。大肠杆菌中P1和3C的共表达导致空衣壳70S的组装。这两种构造的表达产物在豚鼠和猪中产生中和抗体。用P1/杆状病毒构造获得的滴度低。这些相同的表达产物诱导在猪中的部分保护。然而，受到免受该疾病侵害的保护的猪不能受到免受攻击病毒的复制感染的保护。然而，大肠杆菌表达系统不会对蛋白质进行肉豆蔻酰化，蛋白酶3C对该细胞有毒性。Lewis等人得出结论，与病毒组成有关和在动物中获得最大保护所需的衣壳结构的基本问题尚未得到回答。此外，Grubman等人认为在配制疫苗之前需要稳定空衣壳；在这一点上，他们同意关于从病毒培养物提取获得的空衣壳所遇到的问题(见上文)。含有蛋白质P1的部分或全部的融合蛋白也已通过使用病毒载体即疱疹病毒或痘苗病毒获得。CA-A-2,047,585特别描述了用于产生融合蛋白的牛疱疹病毒，所述融合蛋白含有与该牛疱疹病毒的糖蛋白gpIII融合的口蹄疫病毒的肽序列(结合于P1的氨基酸200至213的P1的氨基酸141至158)。病毒载体也已用于表达稳定的FMDV空衣壳(US7,531,182)。最近，已将植物作为生产FMDV抗原的来源进行了调查(US2011/0236416)。已经发展了许多假设、研究路线和建议，试图设计有效的抗FMD的疫苗。目前市场上仅有的疫苗含有灭活病毒。存在对FMDV疫苗安全性的担忧，因为欧洲FMD的爆发与疫苗制造的缺点有关(King,A.M.Q.etal.,1981,Nature293:479-480)。灭活的疫苗不赋予长期免疫力，因此每年需要加强免疫注射，或者在发生疫情爆发时更频繁。此外，在灭活疫苗的生产过程中存在与不完全灭活和/或病毒逃逸相关的风险(King,A.M.Q.，出处同上)。本领域的目标是构建缺乏感染性FMDV基因组的构象正确的免疫原，以制备有效且安全的疫苗。据报道，母体来源的抗体(MDA)能够抑制小牛(2岁以下的牛)抗FMD的疫苗接种的应答(Graves,1963,JournalofImmunology91:251-256；Brunetal.,1977,DevelopmentsinBiologicalStandardisation,25:117-122)。考虑到动物(包括人，尽管很少)对FMDV的易感性，预防FMDV感染并保护动物的方法是至关重要的。因此，需要抗FMDV的更有效且稳定的疫苗。专利技术概述本专利技术提供了包含抗原性FMDV多肽及其片段和变体的组合物或疫苗，以及包含表达FMDV多肽及其片段和变体的重组病毒载体的组合物或疫苗。FMDV抗原及其片段和变体具有免疫原性和保护性的性质。FMDV抗原可以由昆虫细胞中的杆状病毒表达载体产生。可以修饰FMDV抗原以增强FMDV空衣壳或FMDVVLP(病毒样颗粒)的稳定性。重组病毒载体可以是表本文档来自技高网...

【技术保护点】
组合物或疫苗，其包含口蹄疫病毒(FMDV)抗原或表达FMDV抗原的重组病毒载体。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.09.23 US 62/054,0731.组合物或疫苗，其包含口蹄疫病毒(FMDV)抗原或表达FMDV抗原的重组病毒载体。2.权利要求1的组合物或疫苗，其中FMDV抗原形成FMDVVLP或空衣壳。3.权利要求1或2的组合物或疫苗，其中FMDV抗原由昆虫细胞中的杆状病毒载体表达。4.权利要求1的组合物或疫苗，其中病毒载体是腺病毒。5.权利要求1-4中任一项的组合物或疫苗，其中FMDV抗原是野生型P1多肽。6.权利要求1-5中任一项的组合物或疫苗，其中FMDV抗原是经修饰的P1多肽。7.权利要求1-6中任一项的组合物或疫苗，其中FMDV抗原包含具有SEQIDNO：1、2、4、5、6、8、10、12、13或16所示的序列的多肽。8.权利要求1-7中任一项的组合物或疫苗，其中FMDV抗原由具有SEQIDNO：3、7、9、11、14、15、17或20所示序列的多核苷酸编码。9.权利要求1-8中任一项的组合物或疫苗，其中FMDV抗原形成非天然存在的二硫桥，其增强VLP或空衣壳的热和酸稳定性。10.权利要求1或4的组合物或疫苗，其中经修饰的P1多肽在对应于SEQIDNO：2、4、6、8、10或16的氨基酸179的位置处包含半胱氨酸置换。11.权利要求1-10中任一项的组合物或疫苗，其中该组合物或疫苗还包含药学或兽医学上可接受的载体、赋形剂、佐剂或媒介物。12.质粒，其包含编码具有SEQIDNO：1、2、4、5、6、8、10、12、13或16所示序列的FMDV抗原的多核苷酸。13.权利要求12的质粒，其中多核苷酸具有如SEQIDNO：3、7、9、11、14、15、17或20所示的序列。14.权利要求12或13的质粒，其中多核苷酸可操作地连接于启动子。15.稳定转化的昆虫细胞，其表达FMDV空衣壳或FMDVVLP。16.重组病毒载体，其包含一种或多种异源多核苷酸，其编码和表达一种或多种FMDV抗原。17.权利要求16的重组病毒载...

【专利技术属性】
技术研发人员：JC·奥多奈特，Z·汉那斯迪耶巴拉，T·梅巴特松，蒋有为，J·怀德纳，F·瑞那德，
申请(专利权)人：梅里亚股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US