表达AGT1的重组酵母制造技术

本发明专利技术涉及对糖转运体AGT1的多种变体的鉴定，这些变体在酵母中重组表达时可提供低聚糖的增强的发酵。本发明专利技术进一步涉及编码这些变体的多核苷酸、表达这些变体的重组酵母细胞、以及这些重组酵母细胞在发酵低聚糖中的应用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】本专利技术涉及对糖转运体AGT1的多种变体的鉴定，这些变体在酵母中重组表达时可提供低聚糖的增强的发酵。本专利技术进一步涉及编码这些变体的多核苷酸、表达这些变体的重组酵母细胞、以及这些重组酵母细胞在发酵低聚糖中的应用。【专利说明】表达AGT1的重组酵母专利
本专利技术涉及对糖转运体AGTl ( α-葡萄糖苷转运体-1)的变体的鉴定，这些变体在酵母中重组表达时提供了低聚糖的增强的发酵。本专利技术进一步涉及编码这些变体的多核苷酸、表达这些变体的重组酵母细胞、以及这些重组酵母细胞在发酵低聚糖中的应用。专利技术背景随着全球矿物燃料消耗的不断增加，在可替代能源选择方面也越来越引起重视。乙醇的使用已经引起了人们相当大的关注。燃料乙醇可以从含有淀粉的作物，例如饲料谷物、食品谷物、以及块茎，例如马铃薯和甘薯来制备。含糖作物，例如甜菜、甘蔗、以及甜高粱也可以用于乙醇的生产。糖，以粗制糖或精制糖的形式，在发酵前不需要预水解(与玉米淀粉不同)。结果，从糖产生乙醇的过程比玉米淀粉转化为乙醇更简单。然而，高效地生产足够量的乙醇仍然是一个关注点。因此，设计并发展新方法和系统以增加乙醇生产过程的效率是令人希望的。本专利技术通过提供一种增强低聚糖发酵水平和比率的改进的发酵过程而解决了本领域中的以前的缺点。专利技术概述本专利技术部分地基于对AGTl的变体的鉴定，这些变体当在酵母中重组表达时增强低聚糖发酵的水平 和/或比率。本专利技术进一步基于这些变体在通过酵母而增强低聚糖发酵效率的应用。因此，作为一个方面，本专利技术提供了一种低聚糖发酵来生产乙醇的方法，该方法包括:将低聚糖与重组酵母细胞接触，该重组酵母细胞包括编码酵母AGTl多肽的异源的多核苷酸；其中该酵母AGTl多肽包括一种氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:1的氨基酸序列或具有至少约590个氨基酸的其N端片段具有至少98%的一致性。在另一个方面，本专利技术提供了一种修饰酵母细胞以减少低聚糖发酵期间乙醇生产的迟延时间的方法，该方法包括:将编码酵母AGTl多肽的多核苷酸插入到酵母细胞中；其中该酵母AGTl多肽包括一种氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:1的氨基酸序列或具有至少约590个氨基酸的其N端片段具有至少98%的一致性。在另个方面，本专利技术提供了一种修饰酵母细胞以增加低聚糖发酵期间乙醇生产量的方法，该方法包括:将编码酵母AGTl多肽的多核苷酸插入到酵母细胞中；其中该酵母AGTl多肽包括一种氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:1的氨基酸序列或具有至少约590个氨基酸的其N端片段具有至少98%的一致性。在又一个方面，本专利技术提供了一种用于从低聚糖进行乙醇生产的重组酵母细胞，该重组酵母细胞包括:编码酵母AGTl多肽的异源多核苷酸；其中该酵母AGTl多肽包括一种氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO:1的氨基酸序列或具有至少约590个氨基酸的其N端片段具有至少98%的一致性。 在下文的本专利技术描述中更详细地阐述本专利技术的这些方面和其他方面。附图简要说明图1显示了酵母基因组DNA与由AGTl的氨基酸编码区组成的探针的Southern杂交。图2显示了从8个酵母菌株扩增和测序的MALI区。图3显示了 AGTl序列的系统树。图4显示了由酵母菌株对4%的异麦芽酮糖(IM)的发酵，该酵母菌株中的AGTl基因已全部测序。图5显示了由表达AGTl变体的AAGTl酵母菌株(缺少天然(native) AGTl基因)对4%頂的发酵。图6将载有不同AGTl-表达盒的酵母所产生的乙醇的量显示为发酵的时间函数。图7显示了由菌株1334对4%潘糖的发酵。专利技术详细说明现在将参照附图对本专利技术进行更加详细的描述，其中展示了本专利技术的优选的实施例。然而，本专利技术能以不同的形式呈现，并且本专利技术不应该被理解为局限于在此阐述的实施例。当然，提供这些实施例以使得本披露将是深入的和完整的，并且将向本领的普通技术人员充分地传达本专利技术的范围。除非另外定义，在此所使用的全部技术术语和科学术语具有与本专利技术所属领域之内的普通技术人员通常所理解的相同的意思。在此处的本专利技术的说明中使用的术语是仅用于描述具体实施例的目的并且不意在限制本专利技术。在此引用的所有的公开、专利申请、专利、专利公开、由登录号标识`的序列、以及其他参考文件对于与引用中提及的句子和/或段落相关的传授内容通过引用以其全文结合在此。除非上下文中另外指出，在此所描述的本专利技术的多样的特征特别地意在能以任何组合使用。例如，涉及一个实施例所描述的特征也可以应用于并且结合于本专利技术的其他实施例和方面。而且，本专利技术还思考了在本专利技术的一些实施例中，在此所阐述的任何特征或特征的组合能被排除在外或省略。在此出现的核苷酸序列仅对单链，5’到3’方向，从左至右，除非特别地以另外的方式表明。核苷酸和氨基酸在此是以由IUPAC-1UB生物化学命名委员会推荐的方式所代表，或者(对于氨基酸)由一个字母代码或者3个字母代码的方式所代表，两者与37C.F.R.§ 1.822和既定用法一致。除了以另外的方式表明，本领域普通技术人员已知的标准方法可以被用于基因克隆、扩增和核酸检测，以及类似。O此类技术是本领域普通技术人员已知的。参见，例如，Sambrook (萨姆布鲁克)等人，Molecular Cloning: A Laboratory Manual 2nd Ed.(《分子克隆:实验室手册第二版》)(Cold Spring Harbor, NY, 1989 (冷泉港，纽约，1989))；Ausubel(奥苏贝尔)等人，Current Protocols in Molecular Biology (《分子生物学实验指南》)(Green Publishing Associates, Inc.and John ffiley&Sons, Inc., New York (格林出版联合公司以及约翰威利父子公司，纽约))。1.定义如在本专利技术的说明书和所附的权利要求书中所用的，单数形式“一个(a)”、“一种(an)”、以及“该(the)”意在还包括复数形式，除非上下文清楚地以另外的方式表明。如本文所用，“和/或”是指并且包括一个或多个相关的所列项的任何一个及全部可能组合，以及当按替代性(“或”)解读时，是指并且包括组合的缺少。在此使用的术语“约(about)”当指可测量的值(比如多肽、剂量、时间、温度、酶活性或其他生物活性以及类似物的量)时，意为包括±20%、土 10%、±5%、土 1%、±0.5%或甚至±0.1%的具体数值的变化。术语“基本上由……组成”(以及语法上的变体)当应用于本专利技术的多核苷酸或多肽序列时，是指由列举的序列(例如，SEQ ID NO)以及该列举的序列的5’和/或3’端上，或者N-端和/或C-端末端的全部十个或更少(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10)的额外的核苷酸或氨基酸两者组成的一个多核苷酸或多肽，这样使得该多核苷酸或多肽的功能未实质上发生改变。该全部十个或更少的额外的核苷酸或氨基酸包括全部数量的、两个端上加在一起的额外的核苷酸或氨基酸。术语“实质上地改变”，当应用于本专利技术的多核苷酸时，是指相较于由列举的序列组成的多核苷酸的表达水平，增加或减少至少约50%或更多的表达已编码多肽的能力本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种发酵低聚糖来生产乙醇的方法，该方法包括将该低聚糖与一种重组酵母细胞进行接触，该重组酵母细胞包括一种编码酵母AGT1多肽的异源多核苷酸；其中该酵母AGT1多肽包括一种氨基酸序列，该氨基酸序列与SEQ?ID?NO:1的氨基酸序列或具有至少约590个氨基酸的其N端片段具有至少98%的一致性。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：PE波蒂里，RJ哈尔，
申请(专利权)人：先正达参股股份有限公司，
类型：
国别省市：