【技术实现步骤摘要】
本专利技术提供了一种细粒棘球绦虫重组BCG疫苗，用于预防控制动物细粒棘球蝴病，同时还提供了该疫苗的制备方法，属于疫苗制备
技术介绍
棘球蝴病(cystic echinococcosis, CE)是一种严重危害人们身体健康的人畜共患寄生虫病，已成为农牧民因病致贫，因病返贫的主要因素之一。目前对包虫病患者进行包虫囊摘除术是首选的治疗方法。但手术对人体带来的损伤比较大且有可能复发，化疗药物可产生一些严重的不良反应。因此，需要研究更有效的解决方法，而疫苗预防是防治其流行的有效措施。预防细粒棘球蝴病的疫苗经历了多肽疫苗，亚单位疫苗，DNA疫苗等多种探索，随着生物技术的发展，重组活疫苗的制备得到了一种新的方法。基因重组卡介苗(rBCG)是借助基因工程技术，将外源基因导入BCG中构建而成的多价疫苗(rBCG)，可诱导长期的体液免疫和细胞免疫，近几年的研究结果已显示出rBCG具有非常好的应用前景，有望发展成为预防疾病的一种实际可用的新型疫苗。本专利技术小组曹春宝等从细粒棘球蝴中克隆了 egGlY162抗原基因。结果显示，egGlY162基因不论是在基因序列上，还是在氨...
【技术保护点】
重组细粒棘球绦虫BCG疫苗的制备方法，其包括如下步骤：（1）合成上游和下游引物：上游引物：5′?CCGAATTCATGGTACTTCGATTCTGT?3′；下游引物：5′?CCAAGCTTAGTAAGTAATAGGAGCCCA?3′；（2）目的基因egG1Y162的PCR扩增：以细粒棘球蚴cDNA为模板，采用上述的上下游引物，进行PCR扩增，扩增体系为：灭菌水16μl，质粒2μl，EcoRI?0.5μl，HindⅢ?0.5μl，mix?20μl，共40μl扩增体系；Touchdown?PCR反应条件：95℃?4?min；95℃?30s，65℃?30s?降1℃，72℃?2mi...
【技术特征摘要】
1.重组细粒棘球绦虫BCG疫苗的制备方法，其包括如下步骤(1)合成上游和下游引物上游引物5' -CCGAATTCATGGTACTTCGATTCTGT-3'；下游引物5' -CCAAGCTTAGTAAGTAATAGGAGCCCA-3'；(2)目的基因egGlY162的PCR扩增以细粒棘球蝴cDNA为模板，采用上述的上下游引物，进行PCR扩增，扩增体系为灭菌水 16 μ 1，质粒 2 μ 1，EcoRI O. 5 μ I, HindIII O. 5 μ I, mix 20 μ 1，共 40 μ I 扩增体系; Touchdown PCR 反应条件95°C 4 min ；95°C 30s, 65°C 30s 降 1°C，72°C 2min 共 11 个循环；95°C 30s, 50°C 30s, 75°C 2min 共 25 个循环；最后 72°C 延伸，7min，末次 4°C，将 PCR 扩增产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定，得到大小为360bp的目的条带；(3)目的片段egGlY162与载体PMV361的连接egGlY162扩增产物经DNA纯化试剂盒纯化回收后先与PMD19-T载体连接，利用α互补原则筛选阳性克隆并进行PCR扩增鉴定、酶切鉴定和测序鉴定，将经上述鉴定正确的阳性克隆扩增后提取egGlY162-PMD19质粒，将该质粒经EcoR1、Hind III限制性内切酶酶切， 凝胶回收目的片段后与同样用EcoRI和Hind III进行双酶切的pMV361质粒胶回收产物， 按3 :1的摩尔比(目的片段载体)在T4DNA连接酶的催化下进行连接，连接体系为 buffer 缓冲液 I μ 1，目的片段 7 yl，PMV361 载体 I μ I，T4DNA 连接酶 I μ1，*10μ1 的连接体系，16°C，连接过夜。转化入E. coli DH5 α感受态细胞后，利用PMV361质粒所携带的卡那霉素抗性筛选egGlY162-PMV361重组子，对阳性克隆进行PCR扩增鉴定和EcoRI 和Hind III双酶切鉴定，将鉴定正确的重组质粒命名为egGlY162-PMV361 ；(4)重组egGlY...
【专利技术属性】
技术研发人员：丁剑冰，马海梅，祖力皮也·吐尔逊，马秀敏，曹春宝，德里夏提·依米提，朱明，温浩，
申请(专利权)人：新疆医科大学，
类型：发明
国别省市：
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