一种利用ICP‑MS和荧光成像检测全血中循环肿瘤细胞的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用ICP‑MS和荧光成像检测全血中循环肿瘤细胞（CTC）的方法。本发明专利技术通过抗体包被的Cs掺杂多核磁性纳米粒子，捕获全血样本中的循环肿瘤细胞进行磁分离，然后加入量子点修饰的抗体进行荧光标记，以量子点作为ICP‑MS以及荧光成像的共同标签，可以用荧光显微镜对CTC进行成像，也可以将其经硝酸分散后直接引入ICP‑MS检测，通过ICP‑MS检测抗体上标记的量子点中的元素实现CTC的定量计数。本发明专利技术不仅具有高选择性、高灵敏度、耐基质干扰等优点，磁性纳米粒子中掺杂的Cs可以作为内标元素，采用内标法定量以消除因分析过程中磁性纳米粒子的损失对实验结果测定造成的误差，进一步提高了方法的可靠性。本发明专利技术适用于人全血样品分析，在临床上有良好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种利用ICP-MS和荧光成像检测全血中循环肿瘤细胞的方法
本专利技术属于生物分析方法领域，具体涉及一种利用ICP-MS和荧光成像检测全血中循环肿瘤细胞(CTC)的方法。
技术介绍
据我国国家癌症中心发布的数据显示，在2015年我国新发癌症病例429.2万，癌症死亡281.4万。肝癌的发病率位于肺癌、胃癌和食管癌之后位列第四，而肝癌的死亡率仅次于肺癌和胃癌。同时肝癌也是目前世界最多发的癌症之一，尚未有有效的治愈手段，尤其是到了肝癌晚期阶段。大多数癌症引起的死亡是由于最初的癌细胞发生转移导致的。与其他许多疾病相似，早期诊断对于癌症的有效治疗至关重要。发展切实可行的肝癌早期诊断方案目前仍然是一项重大的挑战。电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)是一种元素特异性的检测器，因其具有灵敏度高、线性范围宽、多元素多同位素同时检测、抗基体干扰能力强等诸多优点，被广泛应用于环境、食品以及生物样品中痕量元素及其形态分析。近年来，随着元素标记策略不断发展，ICP-MS技术的应用已拓展到生物定量分析和质谱细胞计数等领域。常用的元素标签通常有内源性元素、金属离子螯合物、含金属元素的聚合物以及含金属元素的纳米粒本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用ICP‑MS和荧光成像检测全血中循环肿瘤细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)在铯盐溶液中加入硅源，通过碱催化反应得到Cs掺杂纳米二氧化硅；(2)向O/W反向微乳液中依次加入磁性纳米粒子和Cs掺杂纳米二氧化硅，然后加入浓氨水进行搅拌，再分次加入正硅酸乙酯进行搅拌，最后加入3‑氨丙基三乙氧基硅烷进行搅拌，洗涤后得到氨基改性Cs掺杂多核磁性纳米粒子，即MMNPs‑NH2；(3)将MMNPs‑NH2与anti‑EpCAM抗体加入HEPES缓冲液中，然后加入EDC和N‑羟基硫代琥珀酰亚胺进行偶联反应，再加入Tris‑HCl缓冲液封闭多余的活性位点，得到MMNPs‑anti‑EpCAM探针...

【技术特征摘要】
1.一种利用ICP-MS和荧光成像检测全血中循环肿瘤细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)在铯盐溶液中加入硅源，通过碱催化反应得到Cs掺杂纳米二氧化硅；(2)向O/W反向微乳液中依次加入磁性纳米粒子和Cs掺杂纳米二氧化硅，然后加入浓氨水进行搅拌，再分次加入正硅酸乙酯进行搅拌，最后加入3-氨丙基三乙氧基硅烷进行搅拌，洗涤后得到氨基改性Cs掺杂多核磁性纳米粒子，即MMNPs-NH2；(3)将MMNPs-NH2与anti-EpCAM抗体加入HEPES缓冲液中，然后加入EDC和N-羟基硫代琥珀酰亚胺进行偶联反应，再加入Tris-HCl缓冲液封闭多余的活性位点，得到MMNPs-anti-EpCAM探针磁球；(4)利用金属量子点标记ASGPR抗原，得到QDs-anti-ASGPR标记探针；(5)将MMNPs-anti-EpCAM探针磁球在1％牛血清蛋白溶液中封闭处理，然后加入除去红细胞的全血样品，室温孵育，然后磁分离弃去上清液，并用PBS缓冲液清洗磁球；然后加入过滤的脱脂奶粉进行封闭，再加入QDs-anti-ASGPR标记探针进行孵育，然后磁分离弃去上清液；(6)将步骤(5)的产物用酸液分散，置于ICP-MS中检测，得到Cs与量子点中金属元素的质谱峰强度，比对工作曲线，得到全血样品中循环肿瘤细胞的准确含量；(7)将步...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡斌，杨彬，何蔓，陈贝贝，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42