一种非侵入式机体免疫功能变化的监测方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种非侵入式机体免疫功能变化的监测方法及其应用。该监测方法包括步骤：（1）收集尿液样本；（2）检测尿液样本中的葡萄糖含量；（3）判断机体免疫功能的变化：以受检者健康状态时尿液中葡萄糖含量为参照基准，尿液中葡萄糖浓度上升反映机体免疫功能下降；以亚健康或疾病状态时尿液中葡萄糖含量为参照基准，尿液中葡萄糖浓度下降反映机体免疫功能增强。该监测方法是非侵入式，只需收集尿液样本，样本获得的成本低廉、依从性高、无安全风险，可应用于医疗、保健中的提前预估免疫功能低下相关疾病或亚健康状况的发生、发展，或者评估免疫功能干预手段的效果。

【技术实现步骤摘要】
一种非侵入式机体免疫功能变化的监测方法及其应用
本专利技术涉及生物医学免疫力监测领域，具体涉及一种非侵入式机体免疫功能变化的监测方法及其应用。
技术介绍
在同样的环境中，有的人感冒了，有的人却若无其事；有的癌症病人被医生“宣判”活不了几个月，但过了多少年，他们仍好好地活着。这些现象是由于个体免疫系统功能的差异所导致，人们通常把人体对外来侵袭、识别和排除异物的抵抗力称为“免疫力”。免疫系统担当着防御外来病原体入侵、监视体内变异、清除体内衰老和死亡细胞的任务。机体有各种各样的免疫应答方式，有些是特异性的，有些是非特异性的；有些是细胞免疫性的，有些是体液免疫性的。免疫系统有三大作用，即防御、自稳和监视。免疫防御主要针对外来抗原(如微生物、毒素等)的免疫保护作用；免疫自稳主要指免疫系统内部的自我调控，以维持免疫功能的相对稳定性；免疫监视是指免疫系统识别并清除突变的细胞(如癌细胞)。在正常情况下，机体能够通过适度的免疫应答防止病原微生物的入侵、监视并清除体内恶变的细胞，以保持内环境的稳定。作为人体健康屏障的免疫系统一旦出现异常，就会发生相应的疾病。经典的评价机体免疫功能的方法是：(1)动物实验：脏器/体重比值测定(胸腺/体重比值，脾脏/体重比值)、细胞免疫功能测定(小鼠脾淋巴细胞转化实验，迟发型变态反应实验)、体液免疫功能测定(抗体生成细胞检测，血清溶血素测定)、单核-巨噬细胞功能测定(小鼠碳廓清实验，小鼠腹腔巨噬细胞吞噬荧光微球实验)、NK细胞活性测定；(2)人体免疫功能相关检测指标：抽取血液样本，分析血红蛋白、血中红细胞计数、白细胞计数，细胞免疫功能(T淋巴细胞转化试验，亚群分泌细胞因子的能力(Th1、Th2、Th17)及CTL功能)、调节性T细胞(Treg)的比例和分泌细胞因子的能力、体液免疫功能(B淋巴细胞转化试验、B淋巴细胞分泌抗体能力)、中性粒细胞功能(中性粒细胞吞噬细菌的能力、中性粒细胞表达NADPH氧化酶复合物的能力)、NK细胞功能(杀伤靶细胞及表达IFN-γ的能力)。这些免疫功能检测方法共性特点是侵入式(取血)、检测物料试剂多、检测周期长、费用高昂，同时需要有正常对照才可以判断所检测指标是正常还是异常。更为重要的是，机体免疫功能的强弱是所检测指标综合的结果，上述单一或数个指标无法做出免疫功能强弱的判断。因此，开发方便、快速、能反映免疫系统综合功能强弱的非侵入式监测方法，对于预防免疫功能低下相关亚健康状况、疾病的发生和预后具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种体外非侵入式、能反映机体免疫功能变化的监测方法。本专利技术的目的还在于提供所述的一种非侵入式机体免疫功能变化的监测方法的应用。本专利技术的目的通过如下技术方案实现。一种非侵入式机体免疫功能变化的监测方法，包括如下步骤：(1)收集尿液样本：收集受检者禁食8小时后的空腹晨尿或受检者的24h尿液，用无菌管保存；(2)检测尿液样本中的葡萄糖含量：取尿液样本，在高速离心机内离心，取上清液，检测上清液中的葡萄糖含量；(3)判断机体免疫功能的变化：以受检者健康状态时尿液中葡萄糖含量为参照基准，尿液中葡萄糖浓度上升≥20％，反映机体免疫功能下降；以受检者亚健康或疾病状态时尿液中葡萄糖含量为参照基准，尿液中葡萄糖浓度下降≥20％，反映机体免疫功能增强。进一步地，步骤(2)中，所述离心是在室温下3000-5000g离心5～10min。进一步地，步骤(2)中，所述检测的方法包括化学、物理或生物的检测方法。更进一步地，步骤(2)中，所述化学、物理或生物的检测方法包括硫酸苯酚法、硫酸蒽酮法、高效液相色谱法、核磁共振法(NMR)、光波导共振法或生物酶法。所述的一种非侵入式机体免疫功能变化的监测方法应用于医疗、保健中的提前预估免疫功能低下相关疾病或亚健康状况的发生、发展，或者评估免疫功能干预手段的效果。与现有技术相比，本专利技术具有如下优点和有益效果：(1)本专利技术的监测方法是非侵入式，只需收集尿液样本，样本获得的成本低廉、依从性高、无安全风险。(2)本专利技术的监测方法只需检测尿液中葡萄糖浓度，检测指标简单、快速、成本低。(3)本专利技术的监测方法中，免疫功能强弱的变化判断只需与受检者其它时间点或健康状态的尿液中葡萄糖浓度进行对比，无需建立标准参数范围或他人的空白对照，实施方便。附图说明图1为实施例1中免疫低下组与正常组小鼠的NK细胞的杀伤活性的结果示意图；图2a为实施例1中免疫低下组与正常组小鼠血清中免疫因子TNF-α的分泌结果示意图；图2b为实施例1中免疫低下组与正常组小鼠血清中免疫因子IL-1α的分泌结果示意图；图2c为实施例1中免疫低下组与正常组小鼠血清中免疫因子IFN-γ的分泌结果示意图；图2d为实施例1中免疫低下组与正常组小鼠血清中免疫因子IL-2的分泌结果示意图；图2e为实施例1中免疫低下组与正常组小鼠血清中免疫因子IL-6的分泌结果示意图；图2f为实施例1中免疫低下组与正常组小鼠血清中免疫因子IL-12的分泌结果示意图。具体实施方式以下结合实施例来进一步解释本专利技术，但实施例并不对本专利技术做任何形式的限定。任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的
技术实现思路
加以变更为同等变化的等效实施例。凡是未脱离本专利技术方案内容，依据本专利技术的技术实质对所做的任何修改或等同变化，均落在本专利技术的保护范围内。在未作说明的情况下，本专利技术涉及的原料与方法均为本领域的常规原料和方法。实施例1免疫功能低下小鼠模型和尿液中葡萄糖浓度的监测方法：实验开始时即开始造模，免疫功能低下小鼠模型造模，模型组小鼠(小鼠数量n＝4)腹腔注射环磷酰胺150mg/kg，制备免疫低下模型，以后每周加强1次，连续四周；正常组造模，正常组小鼠(小鼠数量n＝7)腹腔注射同体积蒸馏水；模型组小鼠和正常组小鼠正常摄食饮水，四周后实验结束前一天代谢笼收集24h尿液，然后脱颈椎处死，常规方法检测免疫指标，NMR法检测尿液样本中葡萄糖相对浓度。结果：免疫功能低下小鼠模型与正常组的造模结果如表1、图1和图2a～2f所示。其中，脾脏指数与胸腺指数的对比结果如表1(**p＜0.01vs.Ngroups.)所示。表1正常组与模型组胸腺与脾脏指数的对比而免疫功能低下小鼠模型与正常组小鼠的对自然杀伤细胞(NK细胞)的杀伤活性的结果如图1所示(**p<0.01；***p<0.001)，血清中免疫因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1α(IL-1α)、干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-2(IL-2)、白介素-6(IL-6)和白介素-12(IL-12)的分泌结果如图2a～图2f(*p<0.05；**p<0.01；***p<0.001)所示；由表1、图1和图2a～图2f可知，模型组小鼠的脾脏指数、NK细胞的杀伤活性、血清免疫因子的分泌均比正常组小鼠低，免疫系统功能低下小鼠模型造模成功。检测：24h尿液样本中葡萄糖含量，利用NMR法检测，以NMR信号积分面积计定量相对浓度，结果如表2所示。表2正常组和模型组尿液中葡萄糖相对含量对比由表2可知，免疫低下模型组小鼠尿液样本中葡萄糖含量相对升高，升高率为29.8％。综合分析正常小鼠、模型小鼠免疫功能和尿液中葡萄糖的浓度，小鼠免疫功能的降低和尿液中葡萄糖浓度的增加有本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种非侵入式机体免疫功能变化的监测方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）收集尿液样本：收集受检者禁食8小时后的空腹晨尿或受检者的24h尿液，用无菌管保存；（2）检测尿液样本中的葡萄糖含量：取尿液样本，在高速离心机内离心，取上清液，检测上清液中的葡萄糖含量；（3）判断机体免疫功能的变化：以受检者健康状态时尿液中葡萄糖含量为参照基准，尿液中葡萄糖浓度上升≥20%，反映机体免疫功能下降；以受检者亚健康或疾病状态时尿液中葡萄糖含量为参照基准，尿液中葡萄糖浓度下降≥20%，反映机体免疫功能增强。

【技术特征摘要】
1.一种非侵入式机体免疫功能变化的监测方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）收集尿液样本：收集受检者禁食8小时后的空腹晨尿或受检者的24h尿液，用无菌管保存；（2）检测尿液样本中的葡萄糖含量：取尿液样本，在高速离心机内离心，取上清液，检测上清液中的葡萄糖含量；（3）判断机体免疫功能的变化：以受检者健康状态时尿液中葡萄糖含量为参照基准，尿液中葡萄糖浓度上升≥20%，反映机体免疫功能下降；以受检者亚健康或疾病状态时尿液中葡萄糖含量为参照基准，尿液中葡萄糖浓度下降≥20%，反映机体免疫功能增强。2.根据权利要求1所述的一种非侵入式机体免疫功能变化的监测方法，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐晓飞，杨继国，宁正祥，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：广东,44