中药成份对阿奇霉素作用基线提升评价方法及评价妇科千金方的应用技术

本发明专利技术公开了一种中药成份对阿奇霉素作用基线提升评价方法及评价妇科千金方的应用。本发明专利技术采用基线等加法，首先测定已证实明确有效的治疗药物阿奇霉素的作用水平，将阿奇霉素与供试中药组合物并行给予实验模型，测定合并用药的基线水平和合并用药的疗效趋势，建立群体药动学‑群体药效学联合模型进行验证。本发明专利技术科学设计了能定量评价引药参与的动力学‑药效学系统变异动力学系统，改变了弱效能药物疗效指标点法测定均值比较的研究方法的弊端。将本发明专利技术方法应用于妇科千金方的提升评价，明确了妇科千金方组合物对阿奇霉素各药动学参数的增效影响，总结得到妇科千金方组合物中发挥抗炎和活血作用的主要药物组，本发明专利技术方法可以很好地应用于评价中药组合物与抗生素联用安全性和有效性方面，尤其是应用于评价妇科千金方中当归成分引药内消作用方面。

【技术实现步骤摘要】
中药成份对阿奇霉素作用基线提升评价方法及评价妇科千金方的应用
本专利技术涉及药物评价
，更具体地，涉及中药组合物中活性成分对阿奇霉素作用基线提升水平的评价方法，尤其是中药组合物妇科千金方中活性成分对阿奇霉素作用基线提升水平的评价方法。技术背景根据文献报道，中医学认为慢性盆腔炎(chronicpelvicinflammatorydisease，CPID)主要机理是妇人经期、产后血室正开，余血未尽，易为六淫、七情、饮食、劳倦及房劳所伤，影响冲任气血以成瘀为患。近年来，随着中医药现代化进程加速，中西药联合应用日趋广泛。临床对慢性盆腔炎的治疗亦常采用中西医结合疗法或中药与抗生素联合应用。目前，大量研究报道妇科千金片与抗生素联合应用治疗慢性盆腔炎疗效显著提高，且不良反应发生率明显降低。妇科千金片联合阿奇霉素对慢性妇科炎症的疗效优于单用阿奇霉素，临床上常将两者合用治疗慢性妇科炎症疾病。实践中，治疗慢性盆腔炎，中医应用活血化瘀法可明显改善临床症状，西医学则认为其为急性盆腔炎后的无菌性炎症，表现为血液流变学、免疫学、病理学等异常改变。因此，治疗采用抗感染、抗炎和宫腔内药物局部作用为基本治则，也有临床文献认为促使子宫收缩使感染性宫腔分泌物排出或应用大量抗生素的情况下清理宫腔具有较显著疗效。这一治疗思想同当归“引药内消”的本草认识具有思路上的相似处。量化中药组合物中不同药物群对复方以及复方联合阿奇霉素应用的总体功效的贡献率方面进行深入研究，对探究中药组合物中发挥抗炎和活血作用的主要药物组、全面提高中药组合物的产品质量，确保临床用药质量可控、均一、安全提供理论依据、指导临床合理用药具有重要的意义。妇科千金片(胶囊)是一种应用良好的典型中药组合物，其由千斤拔、单面针、金樱根、穿心莲、功劳木、党参、当归、鸡血藤八味活性成分组成，清热除湿，益气化瘀。主要用于湿热瘀阻所致的带下病、腹痛，症见带下量多、色黄质稠、臭秽，小腹疼痛，腰骶酸痛，神疲乏力；慢性盆腔炎、子宫内膜炎、慢性宫颈炎见上述证候者。在治疗慢性盆腔炎方面取得显著的效果。同时，其中一味中药的活性成分当归是“能引诸血各归其所当归之经，故名当归”；“妇人以血为本”，当归乃血家要药。主要有补血活血，调经止痛，润肠通便之功，在妇科疾病中应用极广。《本草新编》云“用当归于败毒化毒药中，正取其性动，则引药内消，直趋大便而出，奏功实神。故已溃者断宜大用，使之活血以生肌，即未溃者尤宜急用，使之去毒而逐秽也。”但是，在妇科千金片与抗生素联合应用治疗慢性盆腔炎的研究中，鲜见针对妇科千金方中当归“引药内消”作用是否存在及内在作用机制与效果的研究，也未见当归引药作用是用其于败毒化毒之何种活性成分组的效果基础之上，妇科千金片中活性成分以及活性成分组如何提升对阿奇霉素的作用基线水平的机制也缺乏相关研究和指引。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是填补现有中药组合物联合阿奇霉素治疗慢性盆腔炎的效果评价技术不足，提供一种中药组合物中活性成分对阿奇霉素作用基线提升水平的量化评价方法。本专利技术的目的通过以下技术方案予以实现：提供一种中药成份对阿奇霉素作用基线提升评价方法，是采用基线等加法，首先测定已证实明确有效的治疗药物阿奇霉素的作用水平，将阿奇霉素与供试中药组合物并行给予实验模型，测定合并用药的基线水平和合并用药的疗效趋势，通过群体药动学-群体药效学联合模型进行验证。本专利技术科学设计技术路线，提供的所述中药成份对阿奇霉素作用基线提升评价方法，具体包括以下步骤：S1.以慢性盆腔炎大鼠为实验模型；S2.测定阿奇霉素的作用水平；S3.构建中药组合物PPK-PPD联结模型；引入中药组合物中各组成部分为协变量，量化评价阿奇霉素作用基线提升水平。其中，步骤S1所述实验模型可以采用慢性盆腔炎大鼠模型，优选的制备模型的方法是采用混合菌液机械注入大鼠宫腔并轻度机械损伤法完成。所述混合菌液是以金色葡萄球菌和大肠埃希菌为受试菌。优选地，混合菌液中受试菌的最佳培养方式为：分别挑3～4个单菌落于40毫升的M-H(B)培养基中，隔夜增菌培养16小时后取出原菌液用全波长多功能读数议测OD值(细菌生长饱和期)；取20mL，分装于离心管中，每管2mL，离心10000～15000rpm/min，10分钟，弃取上清液之中的M-H(B)，用2mL生理盐水混匀后，再离心15000rpm/min，10分钟，弃取上清液中的生理盐水，收集细菌细胞菌体2mL。将相同方法培养的金色葡萄球菌和大肠埃希菌按1：1混合即获得4mL混合菌液。将该菌液为100菌液浓度，用生理盐水进行10倍稀释，稀释至0.1×100，0.01×100，备用(共3个剂量)。进一步优选地，以0.01×100为最佳感染菌量。步骤S3是经过不断地分析和设计，预试采用包括HPLC-UV或EC(电化学检测)法在内的多种检测方法进行，完成模型大鼠血液及子宫组织两种生物基质内选择性、工作曲线、稳定性试验，最终确定优选地两种生物基质中阿奇霉素的浓度测定方法。所述测定阿奇霉素的作用水平的方法是：HPLC-ECD方法或者HPLC-ESI-MS方法。所述HPLC-ECD方法或者HPLC-ESI-MS方法的样品前处理方法是取血浆50μL，加入10MNH4OH溶液和内标罗红霉素甲醇溶液(160ng/mL)；加入二乙醚，涡旋后静置，离心后吸取上层有机相，空气流下吹干，残留物加入流动相溶解，涡旋，离心，取上清液进行分析。所述HPLC-ECD方法的色谱条件为：色谱柱Aglientporoshell120EC-C18(2.7μm×4.6×100mm)695975-902，在线滤器：SSI35-0149；流动相：乙腈-pH7.0磷酸缓冲溶液(45：55，V/V)；流速0.8mL/min；柱温30℃。玻碳工作电极电位+1.2V，参比电极Ag/AgCl。所述HPLC-ESI-MS方法的色谱条件为：色谱柱Aglientporoshell120EC-C18(2.7um×4.6×100mm)695975-902，在线滤器：SSI35-0149；流动相：乙腈-10mMpH5.2醋酸铵(65:35)，流速为0.2mL/min，进样量5μL；质谱检测条件为：电喷雾电离源(ESI)，选择性正离子检测(SIM)，阿奇霉素m/z749.5[M+H]+和内标罗红霉素m/z837.5[M+H]+，电离源电压4.5kV，喷雾气(N2)的流速为1.5L/min，脱溶剂温度为250℃，检测器电压1.5kv。步骤S3是以分组模式为关键协变量，量化妇科千金方组合物以及方中各活性成分组对阿奇霉素作用的PK及PD参数的群体模型参数的影响方式及相关系数。基本途径包括以下步骤：S31.建立AZM的PPK模型；S32.确定综合表达总体药效的线性空间或在各个药效指标中选择一个各组方协同作用较明显的指标作为PD输出值；S33.确定合适的PD指标量化模型，建立截断数据的PPD模型；S34.分析组织分布、抗菌类型、感染与炎症关系的量化因素，确定合适的PPK-PPD联接方式；S35.建立基于作用机制的中药组合物以及组合物中各活性成分组对阿奇霉素协同作用的合并用药PPK-PPD综合模型，计算相应模型参数；S36.对得到的模型参数进行相关假设检验及区间估计，完成评价。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种中药组合物中活性成分对阿奇霉素作用基线提升水平的量化评价方法，其特征在于，是采用基线等加法，首先测定已证实明确有效的治疗药物阿奇霉素的作用水平，将阿奇霉素与供试中药组合物并行给予实验模型，测定合并用药的基线水平和合并用药的疗效趋势，建立过群体药动学‑群体药效学联合模型进行验证。

【技术特征摘要】
1.一种中药组合物中活性成分对阿奇霉素作用基线提升水平的量化评价方法，其特征在于，是采用基线等加法，首先测定已证实明确有效的治疗药物阿奇霉素的作用水平，将阿奇霉素与供试中药组合物并行给予实验模型，测定合并用药的基线水平和合并用药的疗效趋势，建立过群体药动学-群体药效学联合模型进行验证。2.根据权利要求1所述的量化评价方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.以慢性盆腔炎大鼠为实验模型；S2.测定阿奇霉素的作用水平；S3.构建中药组合物PPK-PPD联结模型；引入中药组合物各组成部分为协变量，量化评价阿奇霉素作用基线提升水平。3.根据权利要求2所述的量化评价方法，其特征在于，步骤S1所述实验模型的制备中，以金色葡萄球菌和大肠埃希菌为受试菌制备混合菌液；优选是将相同方法培养的金色葡萄球菌液和大肠埃希菌液按1：1混合获得混合菌液。4.根据权利要求3所述的量化评价方法，其特征在于，所述混合菌液的使用以0.01×100为最佳感染菌量。5.根据权利要求2所述的量化评价方法，其特征在于，步骤S2所述测定阿奇霉素的作用水平的方法是采用HPLC-ECD方法或者HPLC-ESI-MS方法；所述HPLC-ECD方法或者HPLC-ESI-MS方法的样品前处理方法是取血浆50μL，加入10MNH4OH溶液和内标罗红霉素甲醇溶液；加入二乙醚，涡旋后静置，离心后吸取上层有机相，空气流下吹干，残留物加入流动相溶解，涡旋，离心，取上清液进行分析；所述HPLC-ECD方法的色谱条件为：色谱柱Aglientporoshell120EC-C18(2.7μm×4.6×100mm)695975-902，在线滤器：SSI35-0149；流动相：乙腈-pH7.0磷酸缓冲溶液(45：55，V/V)；流速0.8mL/min；柱温30℃，玻碳工作电极电位+1.2V，参比电极Ag/AgCl；所述HPLC-ESI-MS方法的色谱条件为：色谱柱Aglientporoshell120EC-C18(2.7um×4.6×100mm)695975-902，在线滤器：SSI35-0149；流动相：乙腈-10mMpH5.2醋酸铵(65:35)，流速为0.2mL/min，进样量5μL；质谱检测条件为：电喷雾电离源(ESI)，选择性正离子检测(SIM)，阿奇霉素m/z749.5[M+H]+和内标罗红霉素m/z837.5[M+H]+，电离...

【专利技术属性】
技术研发人员：龚云，李伏君，张鹏，邹亮，彭开锋，
申请(专利权)人：株洲千金药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南,43