一种解淀粉芽孢杆菌RH9、筛选方法及用途技术
【技术实现步骤摘要】
一种解淀粉芽孢杆菌RH9、筛选方法及用途
本专利技术属于微生物
，具体涉及一种解淀粉芽孢杆菌RH9、筛选方法及用途。
技术介绍
抗菌肽对食品中的多种革兰氏阳性及阴性细菌均有较强的杀灭作用，能快速抑制微生物的生长，食用后易被体内蛋白酶水解消化且无毒副作用，在酸性条件下活性很强，具有良好的溶解性和稳定性，是极具发展前景的新型食品防腐剂。伊枯草菌素A(iturinA)及其同系物也属于抗菌肽，主要来源于芽孢杆菌属菌株的次生代谢产物，具有广谱抗病性和不易产生抗药性等优点，对植物和动物病原菌具有较高的抑制活性，尤其具有强烈的抗真菌活性。解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)是一种可以分泌iturinA等抗菌肽物质的芽孢杆菌。由于IturinA对丝状霉菌有良好的抑制作用，不仅可以在农业上用于进行生物防治，而且在工业和环境保护上也有着广泛的应用潜力。但实际中，其并未在工业以及环境保护中广泛应用，究其原因，是因为它生产成本巨大，缺乏一种高产iturinA的解淀粉芽孢杆菌。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术的目的是提供所述解淀粉芽孢杆菌RH9...
【技术保护点】
一种解淀粉芽孢杆菌RH9，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌RH9在中国普通微生物菌种保藏管理中心的保藏编号为CGMCC12489，保藏日期为2016年5月23日。
【技术特征摘要】
1.一种解淀粉芽孢杆菌RH9，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌RH9在中国普通微生物菌种保藏管理中心的保藏编号为CGMCC12489，保藏日期为2016年5月23日。2.根据权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌RH9的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，原始菌株解淀粉芽孢杆菌RH3的活化；步骤2，初级诱变步骤2.1，将活化后的解淀粉芽孢杆菌RH3进行青霉素诱变，获得iturinA产量高的第一正突变株和第二正突变株；步骤2.2，将活化后的解淀粉芽孢杆菌RH3进行亚硝基胍诱变，获得iturinA产量高的第三正突变株和第四正突变株；步骤3，基因组改组步骤3.1，原生质体制备与再生利用第一正突变株制备第一正突变株的原生质体溶液；利用第二正突变株制备第二正突变株的原生质体溶液；利用第三正突变株制备第三正突变株的原生质体溶液；利用第四正突变株制备第四正突变株的原生质体溶液；步骤3.2，原生质体融合步骤3.2.1，将第一正突变株的原生质体溶液经紫外灭活处理得到第一紫外灭活溶液，将第二正突变株的原生质体溶液经紫外灭活处理得到第二紫外灭活溶液，将第三正突变株的原生质体溶液经紫外灭活处理得到第三紫外灭活溶液，将第四正突变株的原生质体溶液经紫外灭活处理得到第四紫外灭活溶液；步骤3.2.2，将第一正突变株的原生质体溶液100℃灭活处理得到第一热灭活溶液，将第二正突变株的原生质体溶液100℃灭活处理得到第二热灭活溶液，将第三正突变株的原生质体溶液100℃灭活处理得到第三热灭活溶液，将第四正突变株的原生质体溶液100℃灭活处理得到第四热灭活溶液；步骤3.2.3，将第一紫外灭活溶液、第二紫外灭活溶液、第三紫外灭活溶液、第四紫外灭活溶液、第一热灭活溶液、第二热灭活溶液、第三热灭活溶液和第四热灭活溶液等体积混合均匀，4℃离心并收集沉淀，得到原生质体混合物沉淀；步骤3.2.4，将原生质体混合物沉淀重悬于SMM缓冲液中，再加入相当于SMM缓冲液9倍体积的40％PEG6000，室温放置5min，得到重悬液，然后再加入与重悬液体积相同的SMM缓冲液，混匀并4℃离心，并用SMM缓冲液洗涤沉淀，得到洗涤后的沉淀物；步骤3.2.5，将洗涤后的沉淀物重悬于SMM缓冲液中，涂布RM培养基平板，37℃避光培养至长出单菌落；步骤3.2.6，挑取步骤3.2.5的单菌落，根据琼脂柱法进行初筛，得到10株以上iturinA产量高的初筛菌株；步骤3.2.7，将10株以上iturinA产量高的初筛菌株分别进行iturinA发酵，复筛出2-4株iturinA产量高的第一轮基因组改组菌株；步骤3.2.8，利用第一轮基因组改组菌株制备第一轮...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵君峰，纠敏，原江锋，符丹丹，李阳，
申请(专利权)人：河南科技大学，
类型：发明
国别省市：河南,41
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