金属硫蛋白的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种金属硫蛋白的制备方法，属于生物技术领域。本发明专利技术将植物经金属盐水溶液进行诱导后再经汽爆处理，并在一定压力、温度、惰性气氛下分离提纯，用常温型α‑淀粉酶进行酶解最终得到金属硫蛋白成品。本发明专利技术选用小乔木、大叶作物、瓜秧等材料，经诱导后制备出高含量、高质量的金属硫蛋白，并且本发明专利技术采用在常温、高压下的汽爆方法，通过由内而外的冲击力冲破细胞壁，使细胞内容物（包含金属硫蛋白）全部“破壁而出”，利于下一步的分离操作，并应用了特殊的生物酶，保证了本发明专利技术对诱导植物利用的高效率、高质量、高收益。生产工艺简单、易于操作和技术推广。

【技术实现步骤摘要】
金属硫蛋白的制备方法
本专利技术涉及生物
，特别涉及一种金属硫蛋白的制备方法。
技术介绍
金属硫蛋白（metallothionein）是由微生物和动、植物产生的金属结合蛋白，是一种低分子量、高巯基含量、能大量结合重金属离子的蛋白质，因此称为金属硫蛋白（简称MT）。根据研究，金属硫蛋白的重要生理功能表现在它是一种目前已知的最有效的自由基清除剂。其清除氢氧根自由基（•OH）的能力约为SOD的几千倍，而清除氧自由基（•O）的能力约是谷胱甘肽（GSH）的25倍，而且具有很强的抗氧化活性；并由此衍生出抗肿瘤、预防心脑血管疾病及帕金森症等生理功能。金属硫蛋白在医药品、保健品、化妆品等领域的应用越来越广泛。目前金属硫蛋白的主要来源为兔肝。由于担心人畜横向传染疾病，动物源的金属硫蛋白在欧美地区已逐步被禁用。因此，开发更具安全性的植物源的金属硫蛋白已是当务之急。
技术实现思路
为了弥补现有技术的不足，本专利技术提供了一种金属硫蛋白的制备方法。本专利技术的技术方案为：一种金属硫蛋白的制备方法，包括步骤：A原料准备1）诱导植物：将诱导剂浇根或喷施于植物叶面，平均剂量控制在5—30毫克/千克干基植物；连用本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种金属硫蛋白的制备方法，其特征在于，包括步骤：A原料准备1）诱导植物：将诱导剂浇根或喷施于植物叶面，平均剂量控制在5—30毫克/千克干基植物；连用5—20天，隔天施用1次，每次剂量较上一次高0.3—3倍；2）将上述诱导后的植物经除杂、揉丝、切段、干燥、粉碎后置入汽爆罐中，粉末加入量达到罐体容积的5—40%，用空压机缓缓通入惰性气体排净罐内空气后封闭；不断加压至1—5MPa，保压20—120分钟；喷放到密封喷放仓，得汽爆粉末；充入惰性气体保存、备用；B金属硫蛋白的制备3）汽爆粉末入提取罐中，加入1—20倍体积的Tris‑HCl缓冲液，Tris‑HCl缓冲液的质量浓度为0.01~0.1mol/L...

【技术特征摘要】
1.一种金属硫蛋白的制备方法，其特征在于，包括步骤：A原料准备1）诱导植物：将诱导剂浇根或喷施于植物叶面，平均剂量控制在5—30毫克/千克干基植物；连用5—20天，隔天施用1次，每次剂量较上一次高0.3—3倍；2）将上述诱导后的植物经除杂、揉丝、切段、干燥、粉碎后置入汽爆罐中，粉末加入量达到罐体容积的5—40%，用空压机缓缓通入惰性气体排净罐内空气后封闭；不断加压至1—5MPa，保压20—120分钟；喷放到密封喷放仓，得汽爆粉末；充入惰性气体保存、备用；B金属硫蛋白的制备3）汽爆粉末入提取罐中，加入1—20倍体积的Tris-HCl缓冲液，Tris-HCl缓冲液的质量浓度为0.01~0.1mol/L，用空压机通入惰性气体，搅匀后，提取10—60分钟；4）将步骤3）中提取罐内的混合溶液离心分离，取上清；静置1—3小时，澄清处理，然后通过超滤、纳滤分离系统，得到分子量介于10000至15000道尔顿的金属硫蛋白粗液；5）将上述金属硫蛋白粗液移入酶解罐，加入常温型α-淀粉酶，间歇1分钟，通入惰性气体1分钟；酶解10—80分钟；所述常温型α-淀粉酶由微波诱导所得变异地衣芽孢杆菌分泌所得α-淀粉酶，所述常温型α-淀粉酶的适宜温度为22-35℃；6）将步骤5）酶解后的液体移入冷冻离心机高速离心，取上清；7）将上清直接上SephadexG-50柱层析进行分离，以0.005~0.05mol/LTris-HCl缓冲液进行洗脱，收集含金属硫蛋白组分的洗脱液；8）将步骤7）中收集的洗脱液进行真空浓缩，浓缩后的剩余部分用Tris-HCl缓冲液洗涤1~5遍，重复本步骤，得金属硫...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹吉祥，
申请(专利权)人：济南米铎碳新能源科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37