一种水生生物金属硫蛋白的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种水生生物金属硫蛋白的检测方法，属于电化学技术领域。所述的检测方法的原理为：溶液中待检测的金属硫蛋白分子，在选择的富集电位下富集到汞电极表面，与支持电解质Pt(NH3)2Cl2发生反应产生H+，当电位扫描到-1.48V左右时反应的H+被还原，这样就可以在伏安图上产生特征峰及相应的电流。由于本法灵敏性高，检出限低，因此要求的样品量少，同时反应由扩散控制，受竞争吸附影响小，也即是检测受待分析样品中其它蛋白干扰不大，因此适宜使用标准曲线法检测。本发明专利技术是一种简单、可靠性好、准确性高、检出限低的检测水生生物内金属硫蛋白的方法。

【技术实现步骤摘要】
—种水生生物金属硫蛋白的检测方法
本专利技术公开了，具体来说，涉及一种对水生生物内金属硫蛋白进行定性、定量分析的电化学方法。
技术介绍
金属硫蛋白(Metal1thionein, MT)是一类低分子量的能够被金属诱导产生的特异性蛋白，广泛地存在于生物体内，富含半胱氨酸，不含芳香族氨基酸，极个别的含有组氨酸，在生物体组织中起到解除重金属毒性、贮存和转运必需元素、清除自由基、调控基因表达等诸多作用。在水环境生态研究中，金属硫蛋白的作用尤其受到人们的重视。这是由于金属硫蛋白的一个显著特点是其基因的转录能被环境金属诱导，转录水平与环境金属浓度直接相关。在正常生理状态下，生物体内存在一定水平的金属硫蛋白以调节必需金属元素，当周围环境中金属含量达到一定的浓度时，能诱导合成新的金属硫蛋白。因此，环境工作者们经常使用金属硫蛋白的含量作为评价水生生物所受重金属毒性的一个重要指标。目前，检测水生生物内金属硫蛋白的经典方法主要有金属饱和法、电化学法以及分光光度法。金属饱和法灵敏度不高，且易受其它能结合金属的分子干扰，尤其水生生物中易积累环境中物质，因此不能准确定量分析生物中金属硫蛋白含量，特异性较本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种水生生物金属硫蛋白的检测方法，其特征在于：第一步，绘制标准金属硫蛋白浓度‑电流曲线；所述标准金属硫蛋白浓度为0～5ng/mL；第二步，准备金属硫蛋白粗提取液：首先对待检测的水生生物进行清洗和称重；然后将所述的水生生物加入到匀浆液中，在冰浴中进行超声破碎，得到组织匀浆液；对所述的组织匀浆液一次离心处理得到一次上清液；二次离心处理一次上清液得到二次上清液；所述的二次上清液即为金属硫蛋白粗提取液。第三步，采用SWCVS检测方法，检测金属硫蛋白粗提取液中金属硫蛋白浓度；第四步，根据所述的金属硫蛋白粗提取液中金属硫蛋白的浓度以及大型溞湿重，换算得到待检测的水生生物中的金属硫蛋白的浓度。

【技术特征摘要】
1.一种水生生物金属硫蛋白的检测方法，其特征在于: 第一步，绘制标准金属硫蛋白浓度-电流曲线；所述标准金属硫蛋白浓度为O?5ng/mL ； 第二步，准备金属硫蛋白粗提取液:首先对待检测的水生生物进行清洗和称重；然后将所述的水生生物加入到匀浆液中，在冰浴中进行超声破碎，得到组织匀浆液；对所述的组织匀浆液一次离心处理得到一次上清液；二次离心处理一次上清液得到二次上清液；所述的二次上清液即为金属硫蛋白粗提取液。 第三步，采用SWCVS检测方法，检测金属硫蛋白粗提取液中金属硫蛋白浓度； 第四步，根据所述的金属硫蛋白粗提取液中金属硫蛋白的浓度以及大型潘湿重，换算得到待检测的水生生物中的金属硫蛋白的浓度。2.根据权利要求1所述的一种水生生物金属硫蛋白的检测方法，其特征在于:第一步具体步骤如下: 使用瑞士万通797VA极谱仪作为三电极测试系统，汞电极为工作电极，Ag/AgCl电极作为参比电极，玻碳电极为对电极，电解池中加入IOml的IM NH4C1+NH40H溶液作为缓冲体系，10 μ M的Pt (NH3)2Cl2为支持电解质，选择SW方波模式，多次加入兔肝金属硫蛋白作为标准物，电化学参数如下:初始通5min氮气以除去溶液中溶解氧影响，富集电位选择为-0.06V,富集时间60s，扫描电位区间为-1.2V?-1.7V，扫描电位增幅为3mV，方波振幅50mV，频率50Hz，然后于室温或者不低于室温下进行电流测定，并绘制伏安曲线；根据伏安曲线绘制的标准曲线。3.根据权利要求1所述的一种水生生物金属硫蛋白的检测方...

【专利技术属性】
技术研发人员：范文宏，王祥瑞，
申请(专利权)人：北京航空航天大学，
类型：发明
国别省市：北京;11