本发明专利技术提供了一种人表皮生长因子和金属硫蛋白的融合蛋白，包括第一部分和第二部分，所述的第一部分为人表皮生长因子，第二部分为人金属硫蛋白，所述的人金属硫蛋白位于人表皮生长因子的Ｃ端。本发明专利技术还提供了上述的融合蛋白在制备治疗烧伤、或者烫伤、或者创伤、或者溃疡的药物中的应用和在制备皮肤护理药物中的应用。本发明专利技术中的融合蛋白和原来的人表皮生长因子和金属硫蛋白相比，稳定性增加了、清除速率降低了和降解减少了，为ＥＧＦ－ＭＴ融合蛋白的使用带来了好处和便利，从而可以减少用药量和用药频率。同时，本发明专利技术所形成的融合蛋白是一个双功能分子，其具有ＥＧＦ和ＭＴ双重功效。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物
，涉及一种融合蛋白，具体地本专利技术是一种人表皮生长 因子和金属硫蛋白的融合蛋白及其制备方法和应用。
技术介绍
1962年Cohen从小鼠颂下腺中发现了表皮生长因子(EGF)，于1975年测定了 EGF的氨基酸组成，而人的EGF基因是在1986年才克隆得到。天然表皮生长因子是一个 53个氨基酸的蛋白质，分子量约6000道尔顿，含有三对二硫键(Cohen等，J. Biol. Chem, 1962，237 :1555-1562)，具有多种生物学活性(Karnes 等，Epidermal growth factor and transforming growth factor alpha, 1994, Raven Press, New York)。由于表皮生长因子 较小，单独在大肠杆菌中表达有一定难度，但有许多在酵母和哺乳动物细胞中表达人表皮 生长因子的资料。马清钧将EGF与ANG融合(CN01120099. 5)表达，黄秉仁在酵母中表达 EGF (97115284. 5)，甘人宝(00127953. X)在大肠杆菌中分泌表达了人EGF。1957年Margoshes发现金属硫蛋白(MT)，分子量为6500道尔顿，具有清除体内自 由基、抗电离辐射、抗紫外线照射、防止机体衰老，解除重金属的毒性，治疗消化道溃疡、各 种炎症以及美容护肤等方面发挥重要的作用。它结合重金属离子能力是结合一般金属离子 能力的1000倍。此外，MT与细胞生长因子有协同作用，已经有利用工程菌生产MT的尝试 (01128543. 5,01132046. X)。随着基因工程的发展，需要在各种系统中表达所需要的蛋白质，为满足治疗用重 组蛋白质有效性的需要，在蛋白质设计和化学修饰方面，有了很大进步，融合蛋白的设计， 既可以充分发挥二者的特性，也可以减少目标蛋白质的降解。本专利技术利用基因工程技术，针 对现有EGF、MT存在的问题，对EGF进行了融合改造，所获得的新型人表皮生长因子融合蛋 白，具有产量高、兼俱EGF和MT的活性，在抗辐射、解除重金属的毒性，皮肤损伤、皮肤保养 和各种溃疡的治疗方面，具有很好的疗效。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种人表皮生长因子和金属硫蛋白的融合蛋白，所述的这 种人表皮生长因子和金属硫蛋白的融合蛋白要解决现有技术中的单独的人表皮生长因子 或金属硫蛋白在治疗烧伤、或者烫伤、或者创伤、或者溃疡的过程中效果不佳的技术问题。本专利技术提供了一种人表皮生长因子和金属硫蛋白的融合蛋白，包括第一部分和第 二部分，所述的第一部分为人表皮生长因子，第二部分为人金属硫蛋白。进一步的，所述的人金属硫蛋白位于人表皮生长因子的C端。进一步的，所述的融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No 1所示。本专利技术还提供了一种分离的核酸分子，编码权利要求1所述的人表皮生长因子和 金属硫蛋白的融合蛋白。进一步的，所述的核酸分子的核苷酸序列如SEQ ID No 2所示。进一步的，所述的融合蛋白中的人表皮生长因子的氨基酸序列如SEQ ID No:3所7J\ o进一步的，所述的融合蛋白中的人金属硫蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No :4所示。本专利技术还提供了 一种载体，所述载体含有上述的核酸分子。本专利技术还提供了一种宿主细胞，所述的细胞含有上述的载体，或者所述的细胞用 上述的核酸分子转化或转染。本专利技术还提供了一种生产上述的人表皮生长因子和金属硫蛋白的融合蛋白的方 法，包括一个克隆和培养上述的宿主细胞的过程，包括一个利用所述的宿主细胞表达所述 的融合蛋白的过程，包括一个分离所述的融合蛋白的过程。本专利技术还提供了上述的人表皮生长因子和金属硫蛋白的融合蛋白在制备治疗烧 伤、或者烫伤、或者创伤、或者溃疡的药物中的应用。本专利技术还提供了上述的人表皮生长因子和金属硫蛋白的融合蛋白在制备皮肤护 理药物中的应用。本专利技术还提供了一种药物组合物，含有上述的人表皮生长因子和金属硫蛋白的融 合蛋白以及药学上可接受的载体或者赋形剂或者稀释剂。本专利技术还提供了上述药物组合物在制备治疗烧伤、或者烫伤、或者创伤、或者溃疡 的药物中的应用。本专利技术还提供了上述药物组合物在制备皮肤护理药物中的应用。本文中所用的术语“融合蛋白”是指两个以上蛋白质或多肽分子连接到一起，所形 成的新的蛋白质。连接可以通过公知的遗传工程或化学合成方法来进行，优选通过遗传工 程方法，即通过重组DNA技术来实现多个蛋白质或多肽分子的融合。本专利技术的融合蛋白中 亦可包括一些化学修饰部分，如水溶性聚合物。优选水溶性聚合物要为药学上可接受的聚 合物，如聚乙二醇，葡萄糖，丙二醇同源共聚物，多聚氨基酸等。它们可以延长融合蛋白的体 内代谢时间，加速生物体对融合蛋白的吸收，增强融合蛋白的稳定性等。根据生产中所使用 的宿主细胞的不同，如原核细胞(如细菌细胞)或真核细胞(如哺乳动物细胞)，本专利技术的 融合蛋白可以是糖基化的，也可以是非糖基化的。本文中所用的术语“功能等价物”指的是与原有多肽或蛋白质的活性基本相同的 变异体多肽。该变异体多肽是在原有多肽或蛋白质序列中变异一个或几个氨基酸残基而获 得的多肽，优选是变异不超过五个氨基酸残基而获得的多肽，最佳地，是变异一个至三个氨 基酸残基而获得的多肽。变异可以通过缺失、插入或取代来实施。本领域技术人员知晓，通 过改变已知多肽的编码基因序列并将其导入表达载体，可以制备出取代、插入或删除了氨 基酸残基的多肽，这些方法广泛记载于《分子克隆实验指南》(北京科学出版社，2002年) 等本领域公知的文献中。在变异的氨基酸残基中，优选变异为与原氨基酸残基侧链性质相 似的其它氨基酸，从而更得以保持原有功能活性。本专利技术所述的人表皮生长因子、金属硫蛋白是指天然存在的人表皮生长因子和金 属硫蛋白及其功能等价物，包括N末端带有或不带有甲硫氨酸，最佳地，所述的融合蛋白由 人表皮生长因子、金属硫蛋白成熟肽组建而成。本专利技术除提供EGF-MT融合蛋白通过肽键连 接的方式以外，也可以通过本领域熟知的化学连接物进行连接。本专利技术中的人表皮生长因子，除天然存在的53个氨基酸的形式外，亦包括其N末 端带有甲硫氨酸的形式，以及其截短突变体，如C端缺失氨基酸所形成的52肽，本专利技术优选 N端带有甲硫氨酸的形式。本专利技术中金属硫蛋白与表皮生长因子可以使用接头肽连接，也可以直接连接，优 选直接连接。本专利技术中的核酸分子，根据宿主菌的特性，根据最佳密码子使用原则，采用了人工 合成的方式，获得所需的人表皮生长因子基因。本专利技术中，“最佳密码子”，也称“惯用码”，是 指根据不同物种中编码同一个氨基酸的不同遗传密码出现的频率高低，有意识地按照出现 频率较高的去组织所需目的基因，使得目的基因在这个宿主菌中易于获得高表达。在本文 中，“核酸分子”、“基因”、“DNA”可以相互替换使用，均指一个含意。本专利技术的多核苷酸，优 选DNA形式。通过常规技术，如PCR方法、重组法或人工合成的方法，本领域技术人员可以 很容易获得本专利技术的编码新型人表皮生长因子融合蛋白的核苷酸序列或其片段。本文中的术语“表达载体”，是指本领域中常用的细菌质粒、酵母质粒及其它各种 病毒载体。本专利技术中适用的载体包括但不限于在细菌中表达用的载体(原核表达载体)、 在酵母中表达用的载体(如毕赤酵母本文档来自技高网...
【技术保护点】
人表皮生长因子和金属硫蛋白的融合蛋白，其特征在于：包括第一部分和第二部分，所述的第一部分为人表皮生长因子，第二部分为人金属硫蛋白。
【技术特征摘要】
人表皮生长因子和金属硫蛋白的融合蛋白，其特征在于包括第一部分和第二部分，所述的第一部分为人表皮生长因子，第二部分为人金属硫蛋白。2.如权利要求1所述的人表皮生长因子和金属硫蛋白的融合蛋白，其特征在于所述 的人金属硫蛋白位于人表皮生长因子的C端。3.如权利要求1所述的人表皮生长因子和金属硫蛋白的融合蛋白，其特征在于所述 的融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No:l所示。4.一种分离的核酸分子，其特征在于编码权利要求1所述的人表皮生长因子和金属 硫蛋白的融合蛋白。5.如权利要求4所述的一种分离的核酸分子，其特征在于所述的核酸分子的核苷酸 序列如SEQ ID No 2所示。6.如权利要求1所述的人表皮生长因子和金属硫蛋白的融合蛋白，其特征在于所述 的融合蛋白中的人表皮生长因子的氨基酸序列如SEQID No :3所示。7.如权利要求1所述的人表皮生长因子和金属硫蛋白的融合蛋白，其特征在于所述 的融合蛋白中的人金属硫蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No:4所示。8.一种载体，其...
【专利技术属性】
技术研发人员：孙家驹，周银华，
申请(专利权)人：上海司睿宝生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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