一种从河蚌中提取金属硫蛋白的方法技术

本发明专利技术公开了一种从河蚌中提取金属硫蛋白的方法，它采用金属离子诱导培养、匀浆离心、执变性去杂、二次离心分离提纯四个工艺步骤完成；该工艺为河蚌MT应用于企业工业化生产提供了可靠、高效的提取方法；而且该提取方法操作简单，过程易于控制，将对科学研究和生产企业的生产与深加工具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种从河蚌中提取金属硫蛋白的方法，其特征是它采用金属离子诱导培养、匀浆离心、执变性去杂、二次离心分离提纯四个工艺步骤完成；金属离子诱导培养：选用干净活体的河蚌放入含Cd2?+?(10mg?/L)金属离子浓度进行批量诱导,诱导时间为2d，期间不喂食，然后解剖取出新鲜河蚌肌肉及肝脏组织，并进行－20℃冷冻，冷冻后的河蚌肌肉组织经解冻绞碎，进行下一步处理；匀浆离心：在温度20?30℃下放置8?10h后，用5000～10000转/分，离心机离心30min，再用负压精滤得河蚌肌肉组织中浆体的活性成份；采用Tirs－HCl缓冲液进行匀浆，配制含有0.15mol/L?NaCl以促进蛋白溶解，及蛋白酶抑制剂苯甲基磺酰氟(PMSF，0.1、0.2mmol/L)、还原剂二硫苏糖醇(?DTT，1mmol/L)或B2巯基乙醇(?10mmol/L)作为巯基(－SH)结构活性稳定剂，以保护MT的巯基(－SH)?不被降解或氧化；被提取的河蚌肌肉和肝脏组织与所加缓冲液的质量体积比(g/mL)?一般为1/2～1/5；执变性去杂：即变性除杂蛋白，10000r?/min于4℃离心30min，弃沉淀，取上清液，85℃水浴热变性5min，冰水冷却，用8?层纱布过滤，取清液，静置约2h、8000r?/min?于4℃离心10min，弃沉淀，取上清液，得到所要的匀浆液，记下体积V，精确到1mL，每组设5个平行；二次离心分离提纯：二次离心的目的是实现热变性絮凝杂蛋白与提取剂的分离而得到高纯度浓缩液；用Tris－HCl?缓冲溶液浓度为0.01mol?/L，PH8.6，置85℃水浴热变性5min，进行第二次离心8000r?/min，10min；河蚌浆液与缓冲液的质量体积比为1?/2；在10000r?/min时离心10min就能将细胞碎片、线粒体等物质沉降；为提高分离速度，在保持离心为8000r?/min?的情况下，对离心时间进行优化；二次离心的时间对吸光度的测定值影响不大，在10～60min内基本稳定；为节省提取时间，二次离心的时间以10min为宜，取得的浓缩浆液，经冷冻干燥等常规步骤制得MT冻干粉。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：左有权，
申请(专利权)人：沅江普济生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：