一种地龙蛋白的提取方法技术

本发明专利技术公开一种地龙蛋白的提取方法，包括以下步骤：1)取活体地龙，除杂，用液氮处理后进行粉碎；2)加入无水乙醇，浸泡，离心，去除上清；3)加入高氯酸溶液，浸提，离心，抽取上清；4)加入活性炭，搅拌并静置，离心，抽取上清；5)用磷酸缓冲液调节上清液pH值至5‑6，加入硫酸钠粉末，沉淀，得到地龙蛋白粗提物；6)将地龙蛋白粗提物用pH7.2 20mM Tris‑HCl缓冲液溶解，用DEAE‑Sephadex离子交换法纯化，收集洗脱成分，洗脱成分经透析、浓缩、冻干，即得。本发明专利技术制备方法简单、周期短，提取效果好、纯度高，得到的地龙蛋白可延长凝血酶时间，有效降低小鼠的BALF中EOS总数。

【技术实现步骤摘要】
一种地龙蛋白的提取方法
本专利技术涉及蛋白质提取领域。更具体地，涉及一种地龙蛋白的提取方法。
技术介绍
地龙是重要的动物药材之一。地龙蛋白提取自地龙，含有胶原酶、纤溶酶、蚓激酶、核酸、微量元素等多种成分，其分子量在5000-10000，属于短链小分子物质。现代研究表明，地龙蛋白含有胶原酶、纤溶酶、核酸、微量元素等多种成分，对体内的凝血系统和纤溶系统具有广泛的影响，既可明显降低血小板黏附率，延长体内血栓形成和溶解体内血栓，又能增加脑血流量，减少脑血管阻力，还能提高红细胞变形能力，从而改善血液流变性和微循环障碍，其药用价值备受重视。但是由于地龙蛋白不稳定，易受酸、碱、离子强度、温度等的影响，因而传统的以水煎入药，影响了其药效的发挥。因此，需要提供一种工艺简单、周期短、提取效果好、纯度高的地龙蛋白的提取方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种地龙蛋白的提取方法，该提取方法简单、周期短，地龙蛋白的提取效果好、纯度高。为达到上述目的，本专利技术采用下述技术方案：一种地龙蛋白的提取方法，包括以下步骤：1)取活体地龙，除杂，用液氮处理后进行粉碎；2)加入3-4倍体积的无水乙醇，0-4℃浸泡1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种地龙蛋白的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：1)取活体地龙，除杂，用液氮处理后进行粉碎；2)加入3‑4倍体积的无水乙醇，0‑4℃浸泡16‑24h，离心，去除上清；3)加入浓度为0.05％‑0.10％的高氯酸溶液，调节pH值到3.5‑4.5，15‑20℃浸提20‑30min，离心，抽取上清；4)加入活性炭，搅拌并静置，离心，抽取上清；5)用磷酸缓冲液调节上清液pH值至5‑6，加入硫酸钠粉末，处理10‑15min，沉淀，得到地龙蛋白粗提物；6)将地龙蛋白粗提物用pH7.2 20mM Tris‑HCl缓冲液溶解，与DEAE‑Sephadex离子交换介质接触，依次用含有0、0.1、0.3、0.4...

【技术特征摘要】
1.一种地龙蛋白的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：1)取活体地龙，除杂，用液氮处理后进行粉碎；2)加入3-4倍体积的无水乙醇，0-4℃浸泡16-24h，离心，去除上清；3)加入浓度为0.05％-0.10％的高氯酸溶液，调节pH值到3.5-4.5，15-20℃浸提20-30min，离心，抽取上清；4)加入活性炭，搅拌并静置，离心，抽取上清；5)用磷酸缓冲液调节上清液pH值至5-6，加入硫酸钠粉末，处理10-15min，沉淀，得到地龙蛋白粗提物；6)将地龙蛋白粗提物用pH7.220mMTris-HCl缓冲液溶解，与DEAE-Sephadex离...

【专利技术属性】
技术研发人员：巩东辉，格日乐，
申请(专利权)人：北京恒大博医中医研究院，
类型：发明
国别省市：北京,11