用于治疗心脏疾病的药物组合物制造技术

本发明专利技术涉及根据国际认可的药品生产标准制备的、包含定向产生心脏组织的细胞和至少一种药学上可接受赋形剂的药物组合物，用于制备这种药物组合物的方法，以及用于施用所述药物组合物的、包括含有所述药物组合物的容器的试剂盒。

Pharmaceutical composition for the treatment of heart disease

The present invention relates to pharmaceutical production based on the internationally recognized standard preparation, including directional generation of heart tissue cells and at least one pharmaceutically acceptable excipients, pharmaceutical compositions and methods for preparing such pharmaceutical compositions, and kits for the pharmaceutical composition comprises a container containing the application of the pharmaceutical composition.

【技术实现步骤摘要】
用于治疗心脏疾病的药物组合物本申请是申请号为201080021110.6、专利技术名称为“用于治疗心脏疾病的药物组合物”的分案申请。
本专利技术涉及通过将药物组合物递送至有需要的个体而治疗心脏疾病或疾患倾向。具体地，公开了包含定向产生心脏组织的细胞和至少一种药学上可接受赋形剂的药物组合物，所述药物组合物以允许细胞存活和运输至世界各地、方便人员操作以递送给接受者的方式包含在容器中，其中所述细胞根据国际认可的药品生产标准制备。
技术介绍
再生细胞疗法对于其中器官以需要组织重构以例如恢复形态以及患病器官功能的方式受损的疾病或者当生理修复机制受损时特别相关。心脏是末端分化器官，并且在例如心脏疾病发作中心肌细胞的大量损伤导致不可逆的损伤，因此需要修复。此外，心脏疾病是世界范围死亡率的首要原因。心脏修复的细胞疗法是极其重要的挑战。细胞疗法的临床经验基于以未改变状态递送的成体干细胞。第一代生物制剂是天然的人干细胞，人干细胞被鉴定为容易获得的细胞型。已经显示，一些个体在递送了天然人干细胞时得到改善。人类心脏的天然细胞移植领域的技术水平特别描述于Abdel-LatifA.等.‘Adultbonemarrow-derivedcellsforcardiacrepair:asystematicreviewandmeta-analysis.’ArchInternMed.(2007)167:989-997的综述及其中参考文献。在希望改善临床结果的过程中，开发了第二代干细胞疗法的概念，包括在递送给患者之前提高天然干细胞的生心潜能。为了探索提高细胞生心潜能的方式，基础研究首先使用小鼠胚胎干细胞(下文称为mESC)来阐释心脏分化期间涉及的复杂的信号传导通路。该研究导致生心物质的鉴定，所述生心物质与细胞接触时改善所述细胞分化成心脏修复细胞的能力。心脏修复细胞是中间细胞表型，其中细胞定向产生心脏组织但还没有完全分化。心脏再生领域基础研究的关键里程碑公开于：Behfar等.‘Derivationofacardiopoieticpopulationfromhumanmesenchymalstemyieldsprogeny’,NatureClin.Pract.,Cardiovasc.Med.(2006)3:S78–S82,Behfar等.,‘Cardiopoieticprogrammingofembryoniccellsfortumor-freerepairs’,J.Exp.Med.(2007)204:405-420,以及WO2006/015127,US2008/0019944和WO2009/151907，全部授予MayoFoundationforMedicalEducationandResearch,TerzicA.和BehfarA。上述作者、申请人和专利技术人显示，mESC分化成定向产生心脏组织的细胞可以在mESC与所谓生心物质的‘混合物’接触培养时启动，所述生心物质的‘混合物’即在溶液中含有生心因子的组合物。如WO2006/015127中公开的，当mESC衍生的心脏修复细胞被递送入慢性梗死鼠心脏时，可以实现心脏修复。因此，已知mESC衍生的心脏修复细胞可以显示再生心脏组织的益处。然而，与ESC相关的肿瘤发生风险提出了将这些基础发现用于治疗用途的安全性问题。而且，在实验室环境下在小鼠中进行实验，使用从悬浮于实验管培养基的培养物收集并随后在相同设备中迅速使用的mESC衍生的心脏修复细胞。据信，成体干细胞疗法没有肿瘤发生风险。没有记载肿瘤发生风险并合适衍生为心脏修复细胞的干细胞源的鉴定描述于Behfar等.‘Derivationofacardiopoieticpopulationfromhumanmesenchymalstemyieldsprogeny’,NatureClinicalPractice,CardiovascularMedicine(2006)3:S78–S82。US2008/0019944描述了从心脏修复细胞获得的心脏修复细胞。作者、申请人和专利技术人还公开了可以使用生心因子的混合物实现人成体间充质干细胞分化成心脏修复细胞(WO2009/151907)。人类心脏细胞移植领域的技术水平特别描述于Abdel-LatifA.等.‘Adultbonemarrow-derivedcellsforcardiacrepair:asystematicreviewandmeta-analysis.’ArchInternMed.(2007)167:989-997的综述及其中参考文献。在Behfar等.‘Guidedstemcellcardiopoietic:Discoveryandtranslation’J.Mol.andCell.Cardiology(2008)45:523–529的另一综述中，也公开了使用心脏修复细胞进行心脏再生的概念。从实验室到医院的转移通常是制药工业的挑战。在这种情况下，该挑战特别难克服，这是因为定向产生心脏组织的细胞的生物学特征以及当个体不在生产场所附近场所时绝对需要维持这些特征直到递送给个体。本专利技术通过以下公开解决了该问题：根据国际认可的药品生产标准工业生产包含定向产生心脏组织的细胞和至少一种药学上可接受的赋形剂的药物组合物的方法，允许不同用途同时维持定向产生心脏组织的细胞的特征、其存活、运输至世界各地、方便人员操作以递送给接受者的细胞保持和包装方法。定义在本专利技术范围内并且除非指明相反，以下引号内指定的术语具有以下定义。‘BMMSC’指骨髓间充质干细胞。‘hBMMSC’指人来源的此类BMMSC。‘心脏修复细胞’是中间细胞表型，即，定向产生心脏组织但未完全分化。心脏修复细胞特征在于Nkx2.5和MEF2C的核转移，以及肌节蛋白的缺乏(Behfar等.‘Derivationofacardiopoieticpopulationfromhumanmesenchymalstemyieldsprogeny’,NatureClin.Pract.,Cardiovasc.Med.(2006)3:S78–S82)。心脏修复细胞保留增殖能力。心脏修复细胞可以衍生自干细胞，包括例如人成体间充质干细胞、胚胎样干细胞、可诱导的多能干细胞或任何其他获得性来源。此外，在下文中，所述的干细胞均不是人胚胎干细胞。‘生心混合物(cardiogeniccocktail)’或‘混合物(cocktail)’指含有至少两种生心物质的组合物。‘生心物质(cardiogenicsubstance)’是与细胞接触时提高所述细胞分化成心脏修复细胞的能力的物质。‘汇合’指其中细胞在一定空间量内生长至最大容量的状态。此时，与其他细胞的接触导致它们抑制生长。‘有效量’表示足以提供预期治疗或生理效应或结果的量。这种效应或结果包括心脏组织的修复、维持、再生、增大、或心脏功能的改善。不期望的效应有时与期望的治疗效应一起显现；因此，专业人员在确定合适的‘有效量’时权衡潜在的益处和潜在的风险。该量可以在受试者之间变化，取决于例如受试者年龄、健康状况、天生和后天差异等以及施用方式。因此，不可能指定确切的‘有效量’。然而，在任何个体情况下合适的‘有效量’可以由本领域普通技术人员在药物组合物施用本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种药物组合物，包含定向产生心脏组织的中间表型细胞，其中所述细胞显示：(1)与非心脏修复细胞的参照相比，MEF2C和至少另外一种基因的表达水平均有观察到的增加，所述另外一种基因选自由以下组成的组：Nkx2.5、Tbx5、GATA4、GATA6、Mesp1、FOG1、FOG2、Flk1及其同系物；和(2)不存在可检出的MYH7表达水平；以及至少一种药学上可接受的赋形剂，其中所述至少一种药学上可接受的赋形剂是包含二甲基亚砜(DMSO)、离子、pH缓冲剂、抗渗透剂、胶体和代谢物的保存液；其中所述非心脏修复细胞的总含量是总细胞数的0％至50％。

【技术特征摘要】
2009.05.20 EP PCT/EP2009/0561971.一种药物组合物，包含定向产生心脏组织的中间表型细胞，其中所述细胞显示：(1)与非心脏修复细胞的参照相比，MEF2C和至少另外一种基因的表达水平均有观察到的增加，所述另外一种基因选自由以下组成的组：Nkx2.5、Tbx5、GATA4、GATA6、Mesp1、FOG1、FOG2、Flk1及其同系物；和(2)不存在可检出的MYH7表达水平；以及至少一种药学上可接受的赋形剂，其中所述至少一种药学上可接受的赋形剂是包含二甲基亚砜(DMSO)、离子、pH缓冲剂、抗渗透剂、胶体和代谢物的保存液；其中所述非心脏修复细胞的总含量是总细胞数的0％至50％。2.权利要求1的药物组合物，其中所述保存液选自包括以下的组：允许在-196℃至0℃的温度下冷冻保藏的保存液和允许在0℃至+40℃的温度下保存的保存液。3.权利要求1的药物组合物，其中所述保存液是进一步含有一种或多种组分的保存液，所述一种或多种组分选自由以下组成的组：甘油、蔗糖、血清白蛋白、海藻糖或其任意组合的保存液。4.权利要求1的药物组合物，其中所述离子选自由以下组成的组：Na+、K+、Ca2+、Mg2+、Cl-和所述离子的组合。5.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述pH缓冲剂选自由以下组成的组：H2PO4-、HCO3-、(4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸)(HEPES)及其混合物。6.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述抗渗透剂选自由以下组成的组：乳糖醛酸盐、蔗糖、甘露醇、葡萄糖及其组合。7.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述胶体是葡聚糖-40。8.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述代谢物选自由以下组成的组：腺苷、谷胱甘肽及其组合。9.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述至少一种药学上可接受的赋形剂包括选自由以下组成的组的至少一种成分：生长因子、细胞因子、参与器官发生信号传导的蛋白、药物、血小板溶胞产物、血清、同位素、体内示踪细胞的工具、稀释剂、润滑剂、基质或支架材料及其组合。10.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述定向产生心脏组织的细胞是干细胞。11.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述定向产生心脏组织的细胞来源于干细胞。12.根据权利要求10所述的药物组合物，其中所述干细胞选自由以下组成的组：成体干细胞、胚胎干细胞、诱导的多能干细胞(IPS)、骨髓分离的成体多谱系可诱导细胞(MIAMI)、心脏自身干细胞、植物干细胞及其组合。13.根据权利要求12所述的药物组合物，其中所述干细胞是从选自由以下组成的组的合适组织源收获的间充质干细胞：骨髓、脂肪组织、脐带血、羊水、月经液和血液。14.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述定向产生心脏组织的细胞是哺乳动物细胞。15.根据权利要求14所述的药物组合物，其中所述哺乳动物细胞选自由以下组成的组：人、猫、狗、猪、马、小鼠、大鼠和仓鼠。16.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述细胞是自体细胞、同种异体细胞、异种细胞或其任意组合。17.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述定向产生心脏组织的细胞是心脏修复细胞，所述心脏修复细胞能够衍生自人成体间充质干细胞、人胚胎干细胞(条件是其产生不引起人胚胎破坏)、胚胎样干细胞、可诱导的多能干细胞、心脏自身干细胞或任何其他获得性来源或者其组合。18.根据权利要求17所述的药物组合物，其中所述组合物不含可检测的非心脏修...

【专利技术属性】
技术研发人员：V·高森，R·戈登贝瑞斯福特，C·霍姆西，
申请(专利权)人：卡迪欧参生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：比利时,BE